胰岛素样生长因子-1基因原核表达载体的构建及表达蛋白的生物学活性

目的构建人胰岛素样生长因子-1(hIGF-1)基因原核表达载体,并检测表达的重组人IGF-1(rhIGF-1)蛋白的生物学活性。方法以pUC57-hIGF-1质粒为模板,PCR扩增hIGF-1基因,克隆入pTEtrans载体,进行DNA序列分析后,亚克隆入表达载体pTE,转化大肠杆菌W3110,进行诱导表达,表达产物经阳离子交换层析和凝胶过滤层析纯化,并进行Tricine-SDS-PAGE和Western blot分析。MTT法检测rhIGF-1促MCF-7细胞的增殖作用。结果转化质粒pTE-hIGF-1的大肠杆菌经诱导后,以可溶性形式表达相对分子质量约为7700的目的蛋白,表达量约占菌体总蛋白的8%。Western blot证实该蛋白具有良好的反应原性,Tricine-SDS-PAGE证实纯度达98%以上,MTT证实具有良好的促MCF-7细胞增殖的作用。结论已成功构建了含hIGF-1基因的原核表达载体,并获得具有生物学活性的高纯度rhIGF-1。

^(131)I-肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗肿瘤治疗内照射吸收剂量估算

目的 估算1 31 I 肿瘤细胞核人鼠嵌合单克隆抗体 (chTNT)肿瘤治疗中肿瘤和主要器官内照射吸收剂量。方法 9例肿瘤患者 ,单次静脉注射1 31 I chTNT按体重 (2 9 6± 3 7)MBq kg后测量各时间点血、尿样放射性 ,并采用连续 (配对 )显像结合CT扣除周围组织本底的方法估算各时间点全身、肿瘤及主要器官放射性 ;将原始数据转换为百分注射剂量 (%ID) ,用一室或二室模型拟合时间 放射性曲线 ,求单位累积活度 ,采用医用内照射照射吸收剂量 (MIRD)方法将其输入Mirdose 3软件 ,求得全身、肿瘤和各主要器官的平均总吸收剂量。结果 肿瘤平均总吸收剂量为 (8 2 8± 2 6 5 )Gy ,瘤 非瘤比值为 3 95± 1 5 5。结论 该注射剂量难以满足抑制肿瘤生长的要求。为姑息性抑制肿瘤生长 ,有必要多次重复给药。

^(131)碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗药代动力学研究

目的 :研究13 1碘肿瘤细胞核人鼠嵌合单抗 ( 13 1I chTNT)的药代动力学。方法 :9例肿瘤患者 ,体重5 0± 6kg,单次静脉推注13 1I chTNT 2 9 6± 3 7MBq/kg后测量各时间点血、尿样本中药物的放射性。应用高效液相色谱法检测13 1I chTNT在体内的稳定性和代谢情况。采用连续显像法估算各时间点全身及各器官的放射性 ,并将原始数据转换为注入剂量的百分率 (ID ,% )。结果 :72h内血清原形13 1I chTNT超过 95 %、16 8h为 ( 86±6 ) %。血清药 时曲线符合静脉给药二室模型 ,t1/2α4 93± 9 36h ,t1/2 β6 1 7± 2 1 2h ,AUC 2 9 1± 11 6MBq·h·ml-1,CL 5 3 9± 2 4 6ml/h。13 1碘是13 1I chTNT的代谢产物 ,1周累积经尿液排出注射剂量的 ( 33± 9) %。注射13 1I chTNT后放射性主要集中在肺、肝、肿瘤组织 ,脑组织最少 ,甲状腺放射性多逐渐浓聚。肿瘤组织放射性 2 4h达到最大值 ,T/L(瘤 /非瘤 )值呈逐渐增大的趋势多在 3～ 7d达到最大值 ( 1 2 5～ 3 73)。肿瘤组织 2 4 ,72 ,16 8h的ID值分别为 ( 2 8± 2 0 ) %、( 1 9± 1 3) %和 ( 0 9± 0 6 ) %。结论 :13 1I

rhEPO-Fc融合蛋白的表达、纯化及质量研究

用无血清培养基培养分泌表达rhEPO-Fc融合蛋白的工程细胞株MY06(CHO细胞),收集发酵培养上清,通过离心、过滤、亲和层析、离子交换层析、分子筛等方法对目的蛋白进行纯化,通过lowry法、SDS-PAGE、Western-blot、HPLC、ELISA及IEF等方法研究目的蛋白质量,以建立rhEPO-Fc融合蛋白的发酵、纯化工艺,并探寻该融合蛋白的质量检测方法。通过该工艺,rhEPO-Fc蛋白表达量高达2g/L,蛋白纯化得率达45%以上,纯度可达98%以上,相对分子质量约为60kDa,t1/2长达38h,免疫印迹证明具有天然EPO的免疫原性。研究结果表明该生产工艺可获得rhEPO-Fc的高效表达,纯化得率高,质量检验方法稳定可靠,适用于大规模生产。

聚乙二醇干扰素α2b质控方法探讨

目的:采用分子量为30 KD的聚乙二醇(PEG)对干扰素α2b进行N端定点修饰获得聚乙二醇干扰素α2b(PEGIFNα2b),并建立PEG-IFNα2b的质控方法。方法:采用Wish细胞-VSV病毒系统,以细胞病变抑制法(CPE)测定PEG-IFNα2b的生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相凝胶过滤色谱法测定纯度,胰蛋白酶消化法测定肽图,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛(DIG)标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,ELISA法测定宿主菌菌体蛋白残留量。结果:聚乙二醇干扰素α2b的比活性为1.39×10~7 IU·mg^(-1)蛋白,蛋白含量为420μg·ml^(-1),相对分子质量约为65 000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在278 nm波长处,外源性DNA残留量小于100pg/剂量,宿主菌菌体蛋白残留量为0.010 27%。结论:该质控方法可用于聚乙二醇干扰素α2b的检定。

气相色谱在医药检测中应用的研究进展

气相色谱法作为一种重要的分离分析方法,在石油化工、医药卫生、环境监测、生物化学等领域都得到了广泛的应用。该研究介绍了气相色谱技术的概念、原理以及相关参数,同时介绍了气相色谱-质谱联用技术、顶空气相色谱技术、全二维气相色谱技术、气相色谱-红外光谱联用技术等在医药方面的应用进展。

放射免疫治疗的若干进展

经过数十年的研发与改进，放射性核素标记的单克隆抗体（简称单抗）已经用于临床，开辟了一种治疗癌症的新方法——放射免疫治疗（radioimmunotherapy，RIT）。

延生复苏的概念及现状

1概述 心跳停止后,大脑、心脏对完全性缺血缺氧的耐受分别不超过5 min和20min.超过这一时限,即使取得暂时复苏,心脑常遗有严重的功能障碍.心肺复苏的成败常在分秒之间.然而,对因创伤、失血造成心跳停止的病人,如没有可靠的止血,再及时的心肺复苏努力也是徒劳.

rhEPO-Fc融合蛋白质量标准的研究

目的:本研究采用的rhEPO-Fc融合蛋白是首次将编码人IgG Fc段的基因与编码人EPO的基因片段连接,并将其克隆至高表达质粒载体中,用该质粒转染CHO细胞进行分泌表达所得。通过对rhEPO-Fc融合蛋白的质量检验和实验方法参数的选择,建立rhEPO-Fc融合蛋白的质量标准。方法:采用细胞MTT比色法及Human EPO ELISA试剂盒测定rhEPO-Fc的体外生物学活性,Lowry法测定蛋白含量,SDS-聚丙烯酰胺凝胶电泳法测定相对分子质量,高效液相色谱法(HPLC)测定纯度,紫外分光光度法测定紫外吸收光谱,地高辛(DIG)标记的核酸探针法测定外源性DNA残留量,等电聚焦电泳法测定等电点,间苯二酚显色法测定唾液酸(SA)含量。结果:rhEPO-Fc的比活性为1.1×105IU/mg蛋白,蛋白含量为1.58mg/ml,相对分子质量约为59000道尔顿,纯度超过99.0%,紫外最大吸收峰约在280nm波长处,外源性DNA残留量小于10pg/mg,等电点为4.5～6.5,唾液酸含量为11.92mol/mol蛋白质。结论:所建立的质控方法已用于rhEPO-Fc制品的检定,可以有效地控制rhEPO-Fc制品的质量。

聚乙二醇干扰素α2b在SD大鼠体内的药代动力学特征

目的研究SD大鼠单次及多次皮下注射聚乙二醇干扰素α2b(PEG-IFNα2b)的药代动力学特征。方法单次皮下注射按18、180、900μg/kg给药;多次皮下注射按180μg/kg,1、4、7d给药;在不同时间点采集血样,ELISA法检测血药浓度,并计算药代动力学参数。结果SD大鼠单次给药的血药浓度-时间曲线呈剂量依赖关系,体内呈一级动力学过程,具有线性动力学特征;多次给药后,未见PEG-IFNα2b的达峰值时间延长及峰浓度升高的现象,曲线下面积(AUC)亦未见增加,末次给药后大鼠的血药浓度曲线呈一室开发模型,半衰期与单次给药半衰期无明显差异,多次皮下给药无蓄积倾向。结论PEG-IFNα2b半衰期比IFNα2b显著延长,使用PEG-IFNα2b可以减少用药频次,并可能提高疗效。