天花粉-5A(10)2免疫毒素的形成及其对人肺腺癌细胞SPC体外导向杀伤作用的研究

目的通过化学交联形成天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素，对人肺腺癌细胞ＳＰＣ进行导向杀伤作用的研究。方法天花粉毒蛋白与２┐ＩＴ（ｉｍｉｎｏｔｈｉｏｌａｎｅ，２┐亚氨基四氢噻吩）作用、抗人肺腺癌单抗５Ａ（１０）２与ＳＰＤＰ（Ｎ┐ｓｕｃｃｉｎｉｍｉｄｙｌ┐３┐［２┐ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ］ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ，Ｎ┐琥铂酰亚胺┐３┐［２┐吡啶二硫］┐丙酸酯）作用，分别导入巯基（┐ＳＨ）和２┐吡啶二硫丙酰（ＰＤＰ，２┐［ｐｙｒｉｄｙｌｄｉｔｈｉｏ］ｐｒｏｐｉｏｎａｔｅ）基，通过天花粉分子中引入的┐ＳＨ与５Ａ（１０）２分子中引入的ＰＤＰ作用将天花粉与５Ａ（１０）２单抗连接在一起，形成免疫毒素分子。结果体外细胞毒实验表明，天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素对ＳＰＣ的杀伤作用比游离天花粉至少高６～７倍，而对肝癌细胞７７２１的杀伤作用与游离天花粉相近。结论证明天花粉┐５Ａ（１０）２免疫毒素在体外对靶细胞ＳＰＣ具有导向杀伤作用。

噬菌体展示的抗汉病毒ScFv基因的构建及应用于细胞内免疫的基础研究

细胞内免疫(Intracellular Immunization)是一种将抗体基因导入细胞内阻断病毒组装的一项新技术。为探索抗汉坦病毒细胞内免疫的可行性,我们用SOE(Splice by overlapping extention)

肿瘤抗原一般特性及其临床应用的研究概况

自1975年Kohler和Milstein创立杂交瘤技术制备单克隆抗体(单抗)以来,肿瘤抗原的研究取得了很大进展。到目前为止先后证实了人黑色素瘤、结肠癌、肺癌和胃癌等肿瘤细胞内外与其单抗相应的肿瘤抗原存在。并且,肿瘤抗原这一物质基础与肿瘤发生发展及临床应用是紧密联系着的。

五行汤对黑色素瘤小鼠抑瘤作用及免疫功能的影响

背景与目的:民间验方"五行汤"由牛蒡、白萝卜、白萝卜叶、胡萝卜和香菇组成,有一定的抗肿瘤效果,值得深入研究。本研究通过动物体内实验观察五行汤对小鼠黑色素瘤的抑瘤作用和免疫功能的影响,同时检测比较单方和复方作用差异。方法:用不同成分汤剂处理小鼠黑色素瘤细胞B16,MTT法检测汤剂对细胞生长的影响;C57/BL6小鼠接种B16建立小鼠黑色素瘤模型,随机分为阳性组、空白组和各汤剂处理组;接种后第2天给小鼠灌胃,每天1次,25 d后处死小鼠取瘤称重;MTT法检测小鼠T淋巴细胞转化功能,乳酸脱氢酶(LDH)法检测NK细胞杀伤活性。结果:体外实验显示不同成分汤剂均可抑制B16细胞生长,以复方五行汤抑制作用最强,同时呈浓度依赖性;体内实验显示不同成分汤剂有不同程度的抑瘤作用;不同成分汤剂灌胃后小鼠淋巴细胞转化功能相应增强;同时NK细胞杀伤活性也有不同程度的增加;抑瘤作用和免疫功能的单、复方的比较中都是五行汤的作用最强。结论:五行汤对小鼠黑色素瘤有较明确的抑制作用同时可以增强荷瘤小鼠细胞免疫功能。

免疫球蛋白变区基因的体外扩增及人－鼠嵌合抗体的表达

应用聚合酶链反应法体外扩增抗人小细胞肺癌单克隆抗体的变区基因，经核苷酸序列分析，轻链变区基因为３２４ｂｐ，编码１０８个氨基酸；重链变区基因为３５１ｂｐ，编码１１７个氨基酸。将重链变区基因克隆至ｐＳＶ_２△ＨｇｐｔＨｕγ_３质粒，经一系列克隆、筛选，得一插入方向正确的表达人－鼠嵌合重链抗体的载体－ｐＳＶ_２△Ｈｇｐｔ２Ｆ７ＶＨＨｕγ_３。用电穿孔方法将该质粒导入鼠源骨髓瘤细胞Ｊ５５８Ｌ，用霉酚酸进行初步筛选，最终用兔抗人免疫球蛋白ＩｇＧＦｃ片段的抗体筛选得七株阳性克隆，免疫印迹法结果表明在与人ＩｇＧ相同位置上有一阳性条带。

用基因定点突变技术改建—免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体

本文介绍了一种简便的、具有高突变率的基因定点突变方法。应用Bio-Rad Muta-Gene Phagemid Kit,在一装有表达载体上的抗NP(4-hydroxyl-3-nitrophenacetyl)免疫球蛋白重链可变区基因的J_a区引进BstE Ⅱ酶切位点,从而改建成一种能用于表达免疫球蛋白重链可变区基因的通用表达载体。应用该Kit,基因定点突变率达43％。

单克隆抗体检测纤维蛋白原降解产物—D碎片及其临床研究

纤维蛋白原(FG)经凝血酶作用形成纤维蛋白(Fb),经纤溶酶进一步作用形成FG/Fb降解产物(统称FDP/fdp)。其中FG及未交链Fb降解产物包括X、Y、D、E碎片;交链纤维蛋白降解产物包括D-dimer及DD/E复合物等。

聚合酶链反应法扩增免疫球蛋白变区基因

用异硫氰酸胍抽提抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞株2F7的总RNA,用逆转录酶合成第一链cDNA,用PCR技术扩增出351 bp的重链变区基因(V_H)和324bp轻链变区基因(V_L),分别克隆至pUCV_(NP)-PCR和pWR13载体上,经筛选和DNA序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的变区基因.

抗人小细胞肺癌单克隆抗体的重链变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

本文从抗人小细胞肺癌单克隆抗体杂交瘤细胞中抽提总RNA,合成第一链cDNA,直接用PCR技术(polymerase chain reaction)扩增出351bp的重链变区基因(V_H),克隆至pUCV_(NP)-PCR载体上,经筛选得一批插入片段为351bp的阳性克隆,经核苷酸序列分析研究,证实已获得了该单克隆抗体的重链可变区基因。

一种简便的适用于特异扩增单抗可变区基因的杂交瘤细胞的RNA制备方法

在分子生物学实验中,欲合成cDNA必先制备高纯度、未降解的RNA。目前较为常用的有氯化铯超速离心,但因该法操作时间长需要昂贵的实验试剂和设备,给实验带来较大的不便。

抗人肺腺鳞癌单克隆抗体的研制

将人肺腺癌细胞ＳＰＣ、Ａ５４９、Ａ４２７序贯免疫ＢＡＬＢ／Ｃ小鼠，取脾细胞与小鼠骨髓瘤细胞ＳＰ２／０融合。获得一株稳定分泌抗肺腺鳞癌单克隆抗体的杂交瘤细胞株──Ｓ５Ａ１０─２，制备了小鼠腹水抗体并进行了纯化，腹水效价为１．０２×１０７，亚型测定为ＩｇＧ１．免疫组化分析ｓ５Ａ１０－２单抗与肺腺、鳞癌和肺鳞癌有较好的选择反应性，与正常组织无交叉反应，ＷｅｓｔｅｒｎＢｌｏｔ测定Ｓ５Ａｌ０─２在ＳＰＣ细胞膜上的抗原分子量为４０Ｋｄ、５０Ｋｄ和８０Ｋｄ，在Ａ５４９，细胞膜上的抗原分子量为４３Ｋｄ，而与Ａ４２７细胞膜蛋白无明显反应。该抗体的亲和常数为８．４３×１０１０Ｍ－１，Ｓ５Ａ１０－２杂交瘤细胞株，经液氮冻存后复苏，其分泌抗体能力不受影响。

小鼠抗人小细胞肺癌单抗轻链可变区基因的体外扩增、克隆及序列分析

本文通过一对分别位于小鼠免疫球蛋白轻链可变区基因 FR1骨架区和 FR4骨架区的通用引物,利用 PCR 技术首次从小鼠抗人小细胞肺癌2F7杂交瘤细胞染色体组总 DNA 中直接扩增出相应的免疫球蛋白轻链可变区基因,扩增出的基因片段经引物上引进的两个限制性内切酶位点直接克隆到装有人免疫球蛋白轻链恒区的克隆载体 pGEM-7Zf(+)-V_kPCR 中的 EcoR1和 BglⅡ内切酶位点之间.通过对其进行顺序分析,结果表明我们克隆得到了免疫球蛋白轻链可变区基因,其长度为318bp.

23例白血病患者ets-2癌基因分析

应用人ets-2特异探针pH33基因片段,通过Southern印迹杂交,对23例白血病患者进行ets-2癌基因分析。结果显示:3例白血病病人细胞出现ets-2基因重排。这在文献中尚未见报道。作者同时讨论了癌基因在白血病发病中的作用。

人－大鼠嵌合抗双滩病毒抗体重链基因重组表达质粒的构建

人－大鼠嵌合抗双滩病毒抗体重链基因重组表达质粒的构建程卫青，杨为松，徐海峰，白雪帆，尚高峰（第四军医大学唐都医院传染科西安７１００３２）刘健，郭虹汾，张文祥，李斯德（上海市肿瘤研究所免疫室，上海２０００３９）早在八十年代中期，国外就已开展了入－鼠嵌合...

大鼠抗汉滩病毒单抗重链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析

大鼠抗汉滩病毒单抗重链可变区基因的体外扩增、克隆和序列分析程卫青，杨为松，徐海峰，白雪帆，尚高峰（第四军医大学唐都医院传染科西安７１００３２）刘健，郭虹汾，李斯德（上海市肿瘤研究所免疫室，上佝２０００３２）目前基因工程抗体的研究正方兴未艾。制备基因工...

单克隆抗体在淋巴细胞白血病中的临床应用

本实验应用二十一种抗人白细胞分化抗原的单克隆抗体。通过ABC(avidin-biotin peroxidase complex)免疫酶标方法对十二例淋巴细胞白血病病人进行了免疫表型分析。提示单克隆抗体在淋巴细胞白血病病人的临床分型、治疗及预后估计上很有意义。粒、淋双表达白血病其本质不明,因而治疗上至今还没有一个理想的方案。

建立Ig基因富集的DNA库进行2F7单克隆抗体基因克隆

用小鼠型抗人小细胞肺癌单克隆抗体的2F7杂交瘤细胞DNA,经限制性内切酶EcoRI或BamHI完全酶解,通过Southern blot,用小鼠Ig基因Cr_(2a)、V_(H)、J_(H)和E_(H)作探针,富集阳性DNA,同时用pSV_2neo质粒为载体与这些DNA重组,经筛选获得了一批杂交阳性的克隆。

复方灵芝、复方丹参及复方三棱莪术注射液对淋巴细胞毒性的影响

体外微量细胞毒性试验,显示了三种中药复方对正常人淋巴细胞的细胞毒性功能具有不同形式的影响。复方丹参对正常人淋巴细胞毒性功能影响最大,在6/11例中激发或增强细胞毒作用,3/11例无作用,2/11例抑制细胞毒作用。复方三棱莪术对2/7例有激发或加强作用,4/7例无作用,1/7例有抑制作用。复方灵芝对6/8例无作用,对2/8例有抑制作用。