甘草酸和泼尼松对慢性马兜铃酸肾病大鼠肾脏组织病理及超微病理改变的影响

目的通过建立大鼠慢性马兜铃酸肾病(AAN)动物模型,观察甘草酸、泼尼松对慢性AAN肾损害的干预作用。方法雄性Wistar大鼠98只,SPF级,随机分为4组:正常对照组20只,模型组、甘草酸组、泼尼松组每组26只;实验组按马兜铃酸(AA)20 mg／(kg·d)关木通浸膏灌胃,正常对照组灌胃等体积饮用水;2 h后按分组灌胃给药:甘草酸25 mg／(kg·d),泼尼松3．15 mg／(kg·d);正常对照组、模型组灌胃饮用水。各组每周测量体重,于第4、8、12周测定相关肾功能指标;取肾组织进行形态学检查。结果随着喂饲时间延长,正常对照组大鼠体重稳定性增长,而马兜铃酸给药各组体重增长缓慢。马兜铃酸用药后各组血肌酐／体重水平明显增高,甘草酸组、泼尼松组血肌酐／体重水平显著降低。肾脏组织形态学改变:甘草酸、泼尼松治疗组形态结构损害程度较模型组(纤维化程度约30％)轻微,纤维化程度约15%-20%。电镜结果:马兜铃酸可引起肾小管上皮细胞损伤、变性、坏死,线粒体等细胞器损伤明显,有细胞核变异。甘草酸、泼尼松组以小管损伤为主,线粒体等细胞器正常,细胞核变异少见,间质胶原纤维较少。结论甘草酸、泼尼松对大鼠慢性马兜铃酸肾损害有一定的保护作用,能降低血肌酐,改善肾功能,在一定程度上减轻马兜铃酸造成的肾组织形态学改变,并减少肾间质纤维化程度。

肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除对慢性肾脏病骨骼肌消耗的影响

目的:内源性糖皮质激素水平异常升高可引起和加重慢性肾脏病(CKD)引起的骨骼肌消耗。本研究观察肌肉特异性糖皮质激素受体基因敲除(MGRKO)对CKD状态下小鼠骨骼肌消耗的影响。方法:采用5/6肾切除制作CKD小鼠模型,以假手术组(CTL组)为对照组。组织病理学检测胫骨前肌横截面积并计算肌纤维面积分布图;荧光定量PCR检测肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)和肌环指蛋白1(MuRF-1)mRNA水平;Western Blot检测其蛋白表达及Akt/FoxO1信号通路;ELISA方法检测血清皮质酮水平。结果:造模1月后,lox/lox-CKD和MGRKO-CKD小鼠的血尿素氮和皮质酮水平均明显升高;lox/lox-CKD的体重明显下降胫骨前肌湿重明显降低。而MGRKO-CTL和MGRKO-CKD两组间体重无明显差异,胫骨前肌湿重仅轻微降低。组织学观察到lox/lox-CKD胫骨前肌肌纤维明显萎缩,横截面积减少,肌纤维面积分布图明显左移。而MGRKO-CKD组的体重下降不明显,胫骨前肌仍较饱满,肌肉湿重略降低,横截面积略降低,与MGRKO-CTL组比较,肌纤维面积分布图仅轻度左移。荧光定量PCR和Western Blot结果显示lox/lox-CKD组的腓肠肌Atrogin-1和MuRF-1的mRNA和蛋白表达水平显著升高,同时其Akt磷酸化水平(pAkt/Akt)较lox/lox-CTL组显著降低3.1倍,FoxO1磷酸化水平(pFoxO1/FoxO1)较lox/lox-CTL组降低2.3倍;而MGRKO-CKD组的Atrogin-1表达仅轻微上调,MuRF-1则无明显变化;MGRKO-CKD组Atrogin-1蛋白表达水平仅比MGRKO-CTL组升高,同时pAkt/Akt、pFoxO1/FoxO1水平较对照组仅轻微降低。结论:内源性糖皮质激素水平升高在CKD肌肉消耗中发挥重要作用;MGRKO可减轻/阻止CKD状态下的体重下降和肌肉萎缩,下调肌萎缩关键基因Atrogin-1和MuRF-1表达水平;该效应与阻断糖皮质激素影响Akt/FoxO1信号途径有关,抑制糖皮质激素信号通路可能改善CKD肌肉消耗。

马兜铃酸对肾小管上皮细胞释放ET、Ang-Ⅱ的影响及甘草酸干预作用的实验研究

为探讨马兜铃酸 (AA)对体外培养的肾小管上皮细胞释放内皮素 (ET)、血管紧张素(Ang II)的影响 ,以及甘草酸的干预作用 ,以不同浓度AA作为刺激物 ,观察AA对体外培养的肾小管上皮细胞系 (LLC PK1)分泌和释放Ang II、ET的影响 ;另各培养体系中分别加入AA (4 0 μg/ml)和不同浓度甘草酸 ,观察甘草酸对AA作用下LLC PK1释放AngII、ET的干预作用。各组培养 2 4h后 ,提取培养上清 ,用放射免疫法测定ET、Ang II的浓度。结果显示 :①AA(4 0、80、16 0 μg/ml)可明显刺激细胞释放ET、Ang II(P <0 0 1)。②甘草酸在 5 0 μg/ml、10 0 μg/ml、2 0 0 μg/ml浓度时可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 (P <0 0 5或P <0 0 1)。提示 :AA可刺激肾小管上皮细胞分泌和释放ET、Ang II ,此作用可能与AA的细胞毒性损害有关 ;甘草酸可使AA刺激细胞分泌和释放ET、Ang II水平下降 ;甘草酸的保护作用可能与抑制AA作用下细胞分泌和释放ET、Ang II有关。

血液透析患者蛋白质-能量消耗与内源性糖皮质激素水平和胰岛素抵抗的临床研究

目的探讨并发蛋白质能量消耗(protein-energy wasting.PEW)的维持性血液透析患者临床营养指标与内源性糖皮质激素水平及胰岛素抵抗的关系。方法采用改良主观营养评价法(MQSGA),对解放军第四五五医院2010年3月至2011年2月在血液净化中心行维持性血液透析的患者进行营养评分,选择MQSGA>10分者共70例,以30例健康成人为对照组。观察体质量指数等人体测量学指标、生化指标及血常规等;EIA法检测血清皮质酮浓度(透析前、空腹静脉血);ELISA法检测透析前空腹胰岛素浓度,计算胰岛素抵抗指数(HOMA-IR),并分析营养指标与血清皮质醇及HOMA-IR的相关性。结果 70例血液透析患者MQSGA平均评分为12.97±2.36;患者的体质量及体质量指数(BMI)、肱三头肌皮褶厚度、中臂围、中臂肌围等均低于健康对照组,血清白蛋白和总蛋白水平略低于对照组;皮质酮浓度显著高于对照组[(2.35±3.68)ng/L比(10.82±14.52)ng/L,P<0.01];空腹胰岛素水平明显升高[(6.4±1.3)mmol/l比(25.2±9.9)mmol/l,P<0.001],胰岛素抵抗指数HOMA-IR也明显升高[(91.39±0.49)比(5.3±2.70),P<0.001]。Spearman相关性分析显示血清皮质酮水平与MQSGA显著正相关,相关系数(r=0.684,P<0.001),与透析龄、血清未饱和铁、总铁结合力及转铁蛋白饱和度呈一定程度正相关,与中臂围、中臂肌围显著负相关;空腹胰岛素水平和HOMA-IR指数与MQSGA正相关,与体质量指数、中臂围、中臂肌围负相关。结论并发PEW的血液透析患者,虽然其血浆白蛋白在正常水平,但患者仍然存在较低体质量指数、肌肉含量较低等;内源性糖皮质激素水平升高和胰岛素抵抗可能与血液透析患者蛋白质能量消耗有关。

肌肉萎缩蛋白Fbox-1基因沉默对糖皮质激素作用下肌管萎缩的影响

目的:研究糖皮质激素地塞米松(dexamethasone,DEX)对体外培养肌管的形态、蛋白质合成/分解代谢及肌肉萎缩蛋白Fbox-1(Atrogin-1)的表达,Atrogin-1基因沉默是否可减轻肌管萎缩。方法:体外培养小鼠肌纤维细胞株C2C12细胞并分化为肌管后,用DEX处理48h,同位素3H-酪氨酸掺入法检测蛋白合成,3H-酪氨酸释放率检测蛋白分解代谢;荧光显微镜观察肌管形态并拍照;Northern blot检测Atrogin-1mRNA水平;应用小分子干扰RNA片段(siRNA)技术使Atrogin-1基因沉默后,观察DEX作用下肌管形态的改变。结果:DEX5μmol/L作用后,肌管酪氨酸(tyrosine)掺入率下降17.4%,同时tyrosine释放率升高24.7%,使肌管形态变细、萎缩;剂量依赖性地升高Atroign-1蛋白表达水平,使Atroign-1mRNA表达升高3倍;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌管萎缩。结论:DEX促进肌管蛋白质分解代谢,并抑制蛋白合成代谢,导致肌肉萎缩;Atrogin-1基因沉默可改善DEX引起的肌肉萎缩,Atrogin-1基因可能是逆转肌肉消耗性营养不良的有效靶点。

营养不良血透患者骨骼肌消耗的临床研究

目的研究并发蛋白质能量消耗性（protein—energy wasting，PEW）营养不良的维持性血液透析患者骨骼肌消耗的临床表现及MRI改变。方法70例在我院血液净化中心行维持性血液透析、改良主观营养评价（MQSGA）评分〉10分的患者，观察体重指数等人体测量学指标、生化指标及血常规等，核磁共振（MRJ）测定右下肢骨骼肌肌肉面积和脂肪面积，分析营养指标与肌肉含量的相关性。以30例健康成人为对照组。结果70例血透患者MQSGA评分为12．97±2．36，患者的体重及BMI、肱三头肌皮褶厚度、中臂围、中臂肌围等均低于对照组，血清白蛋白和总蛋白水平略低于对照组；MRI结果显示血透患者与对照组股骨长度基本一致，但营养不良透析患者的右下肢横截面积（cross—sectional area，CSA）明显减少（P〈0．01）；患者肌肉／总面积比值均低于对照组（P〈0．01）；但脂肪面积／肌肉面积比值高于对照组（P〈0．05～0．01）。相关分析结果提示这与患者的胰岛素抵抗有关。结论并发PEW的血透患者，存在体重指数下降和肌肉量丢失，下肢骨骼肌肌肉含量降低，而相对脂肪含量较高，胰岛素抵抗可能与血透患者PEW的肌肉消耗有关。