CHO-K1细胞培养上清及其外泌体的蛋白质组分析

目的:确定CHO-K1细胞能否够分泌外泌体,运用液相色谱-质谱联用技术鉴定无血清培养条件下CHO-K1细胞培养上清中的蛋白质和外泌体中蛋白质的成分。方法:将CHO-K1细胞驯化至无血清培养基中,采用exoRNeasy血清/血浆试剂盒提取培养基中的外泌体,透射电镜复染法鉴定其大小和形态,质谱法鉴定标志蛋白;提取培养上清和外泌体中的蛋白,运用nanoLC-ESI-MS-MS技术进行鉴定,对鉴定到的蛋白质进行基因本体论(GO)注释分析。结果:从培养上清样本中鉴定到1243种蛋白质,分子质量范围在7~559 kDa,等电点(PI)在3~11;透射电镜下可见外泌体的双层膜小囊泡结构;从外泌体样本中鉴定到1259种蛋白质,分子质量范围在5~4007 kDa,等电点在3~12,其中鉴定到外泌体标志蛋白有膜连蛋白、肿瘤易感蛋白、Rab蛋白、热休克蛋白-90和热休克蛋白-60;GO注释结果显示上清蛋白和外泌体蛋白主要都来源于细胞器和细胞的膜结构。结论:形态学和标志蛋白的鉴定结果确认CHO-K1细胞的培养上清中存在外泌体,并初步构建了无血清条件下CHO-K1细胞的培养上清蛋白质和外泌体蛋白质的质谱数据集。

斑马鱼下颌芽基再生过程中巨噬细胞极化模式的研究

组织和器官的完全再生仍然是再生医学面临的重要课题。越来越多的证据显示巨噬细胞极化(分为M1和M2型)在创伤引起的炎症修复阶段扮演重要角色。该文研究斑马鱼下颌芽基再生过程中的巨噬细胞极化表现。首先通过巨噬细胞特异标记的转基因斑马鱼活体荧光拍照和免疫组化观察巨噬细胞分布情况。然后聚类分析下颌再生关键时间点的转录组数据,比对经典M1/M2型细胞/炎症因子的表达模式,并通过qRT-PCR进行检测。最后通过下颌显微注射和转录组测序分析(RNA seq),观察脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)+γ干扰素(IFN-γ)、白细胞介素4(interleukin 4,IL-4)、地塞米松和生理盐水对下颌再生的影响。结果证实了巨噬细胞动态参与下颌再生过程,并且在下颌芽基再生的炎症反应期混有经典M1型和部分M2型极化反应,而芽基组织再建期仅有部分M2型因子高表达。根据巨噬细胞极化型的多样化,该文提出了斑马鱼下颌芽基再生型巨噬细胞极化新的分类:M1.5型和M2(+)型,以及LPS/IFN-γ和IL-4信号通路调节模式。显微注射结果显示,单独注射LPS+IFN-γ、IL-4或地塞米松都不利于组织修复与再生。该文研究结果为巨噬细胞极化因子介导的组织再生治疗研究提供了新思路。