喷雾干燥对人溶菌酶转基因山羊乳汁的影响

【目的】揭示奶粉制备过程对转基因山羊乳汁中表达的重组人溶菌酶(recombinant human lysozyme,rhLYZ)的影响。【方法】对表达有2mg/mL rhLYZ的转基因山羊乳汁进行了喷雾干燥,对获得的奶粉样品进行了溶解性,乳汁成分,蛋白组分以及溶菌酶活性的测定,对测定结果进行统计分析。【结果】喷雾干燥引发非脂固形物的损失率为42.05%;整个热处理过程引发可溶性蛋白损失率为25.3%;乳汁中rhLYZ的损失为51.1%,扣除总干物质的损耗,喷雾干燥过程引发了约17.7%的rhLYZ生物学活性损失。【结论】制备奶粉过程对转基因山羊乳汁中表达的人溶菌酶影响较小,喷雾干燥是人溶菌酶羊奶的一种可行的保存和加工方式。

转hLF基因山羊血液生理生化指标检测分析

[目的]本试验旨在研究人乳铁蛋白(human lactoferrin,h LF)基因的整合对转基因山羊代谢和血液学指标的影响。[方法]选择出生日期相近,饲养条件相同,健康、无病的转h LF基因山羊(试验组)30只,非转基因山羊(对照组)20只,公、母各半,分别在不同时期检测血液常规指标白细胞(WBC)、红细胞(RBC)、血红蛋白(HGB)、红细胞压积(HCT)等,血液生化指标直接胆红素(DBIL)、肌酐(CREA)、甘油三酯(TG)、丙氨酸氨基转移酶(ALT)、门冬氨酸氨基转移酶(AST)、总蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、葡萄糖(GLU)、尿素等,并对指标进行品种(转h LF基因羊和非转基因羊)和性别间的比较分析。[结果]各时期转h LF基因羊与正常非转基因羊的白细胞数、红细胞数、血红蛋白含量和红细胞压积差异均不显著(P>0.05),18月龄雄性转h LF基因羊总蛋白水平显著高于非转基因羊(P<0.05)。各时期性别间的比较结果显示:直接胆红素、甘油三酯、丙氨酸氨基转移酶、门冬氨酸氨基转移酶和尿素等指标在不同性别之间存在显著差异(P<0.05),其他各项生化指标在各时期的转基因羊和非转基因羊之间、性别之间差异均不显著(P>0.05)。[结论]h LF基因对山羊的代谢和血液学指标无显著影响。

利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控，也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法，在体细胞克隆前后两个时段内，利用Cre／LoxP系统删除SMGs的可行性，同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除，但两次遗传修饰导致细胞严重老化，无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题，成功率高，缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs，但有超过30％的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因，SMGs删除率达到43．9％～72．8％，是一种较佳的SMGs删除手段。