喷雾干燥对人溶菌酶转基因山羊乳汁的影响

【目的】揭示奶粉制备过程对转基因山羊乳汁中表达的重组人溶菌酶(recombinant human lysozyme,rhLYZ)的影响。【方法】对表达有2mg/mL rhLYZ的转基因山羊乳汁进行了喷雾干燥,对获得的奶粉样品进行了溶解性,乳汁成分,蛋白组分以及溶菌酶活性的测定,对测定结果进行统计分析。【结果】喷雾干燥引发非脂固形物的损失率为42.05%;整个热处理过程引发可溶性蛋白损失率为25.3%;乳汁中rhLYZ的损失为51.1%,扣除总干物质的损耗,喷雾干燥过程引发了约17.7%的rhLYZ生物学活性损失。【结论】制备奶粉过程对转基因山羊乳汁中表达的人溶菌酶影响较小,喷雾干燥是人溶菌酶羊奶的一种可行的保存和加工方式。

利用Cre/LoxP系统删除转基因山羊体内的选择标记基因

在制备转基因家畜过程中的一个关键步骤是使用选择标记基因（Selectablemarkergenes，SMGs）将转基因整合细胞从大量的正常细胞中筛选出来，这导致了SMGs整合入家畜的基因组内持续传递给后代。SMGs已被证明能够显著影响基因组内整合位点处的基因调控，也增加了对转基因动物安全评价的复杂性。为了确定转基因山羊制备过程中SMGs的删除时机和删除方法，在体细胞克隆前后两个时段内，利用Cre／LoxP系统删除SMGs的可行性，同时比较了蛋白转导和质粒共转染两种Cre导入方式的删除效率。结果表明：尽管在首次对山羊成纤维细胞进行遗传修饰后即可进行SMGs删除，但两次遗传修饰导致细胞严重老化，无法用于后续的体细胞克隆羊制备。在转基因山羊的成体细胞中删除SMGs不存在上述问题，成功率高，缺点是试验周期长、耗资增大。Cre表达质粒瞬时转染能够删除SMGs，但有超过30％的无SMGs细胞克隆中整合有质粒序列。TAT-CRE蛋白质转导方法可以避免引入的新外源基因，SMGs删除率达到43．9％～72．8％，是一种较佳的SMGs删除手段。