上海地区原发性男性不育症患者Y染色体AZF基因微缺失的检测

目的探讨上海地区原发性男性不育症患者无精子因子(AZF)基因微缺失情况及其微缺失特点。方法运用聚合酶链反应(PCR)结合琼脂糖凝胶电泳等方法,对上海地区269例原发性男性不育症患者(无精子症38例、严重少精子症231例)以及10名已生育的正常男性进行了AZFa、AZFb和AZFc微缺失筛查。结果 269例男性不育症患者中发现18例AZF基因STS位点存在缺失,其中14例为AZFc区存在缺失、2例为AZFb+c区存在缺失、1例为AZFa+b+c均缺失、1例为AZFa区存在缺失,总缺失率为6.7%。结论 AZFc区为原发性不育症患者AZF基因筛查的主要候选基因,临床上对原发性不育患者进行AZF基因缺失筛查仍是十分必要的。

PS-TaqMan PCR检测巯基嘌呤甲基转移酶基因多态性

目的为临床开展巯基嘌呤类药物的个体化用药需要,发展一种适合临床实验室检测TPMT的基因多态性的方法。方法改进TaqMan错配扩增突变检测法(TaqMAMA),建立引物特异性TaqMan聚合酶链反应(PS-TaqManPCR),检测245例临床样本的TPMT*3C突变,结果用双向测序方法验证。结果 PS-TaqManPCR能够准确检测TPMT*3C突变,TMPT*1/*3C基因型频率是2.4%。结论成功发展PS-TaqManPCR作为临床检测TPMT基因多态性的方法 ,该方法可靠、高通量且效率高,适合临床实验室对样本大规模检测的需要。

普伐他汀治疗AMI急诊PCI术后CHF患者血浆NT-proBNP和MMP-2的变化及与左室重构的关系

目的观察他汀类药物普伐他汀对急性心肌梗死(AMI)急诊经皮冠状动脉介入术(PCI)后较为稳定的慢性心力衰竭(CHF)患者氨基末端脑钠肽前体(NT-proBNP)、基质金属蛋白酶-2(MMP-2)和左室重构的影响及相关性。方法96例AMI急诊PCI术后CHF患者(NYHA分级Ⅱ/Ⅲ)随机分为普伐他汀20 mg组(普伐他汀20 mg/d治疗,n=52)和普伐他汀40 mg组(普伐他汀40 mg/d治疗,n=44),比较两组治疗前一般资料、两组治疗前和治疗18个月后血浆NT-proBNP和MMP-2水平以及左室重构相关指标的变化,并分析其相关性。结果两组治疗后血浆NT-proBNP和MMP-2水平均较治疗前显著降低(P<0.05),治疗后普伐他汀40 mg组血浆NT-proBNP和MMP-2水平显著低于普伐他汀20 mg组(P<0.05)。普伐他汀治疗后,两组左室质量指数(LVMI)、左室舒张末期内径(LVEDD)、舒张末左室后壁厚度(LVPWT)较治疗前均显著降低(P<0.01),普伐他汀40 mg组LVMI、LVEDD、LVPWT显著小于普伐他汀20 mg组(P<0.01);两组舒张末室间隔厚度(IVST)、左室短轴缩短率(FS)、左室平均周径缩短率(MVCF)、二尖瓣口多普勒舒张早期最大流速与舒张末期最大流速比率(E/A)较治疗前均显著增加(P<0.01),普伐他汀40 mg组IVST、FS、MVCF、E/A显著大于普伐他汀20 mg组(P<0.01)。两组治疗前后血浆NT-proBNP和MMP-2的下降水平均与LVMI、LVEDD、LVPWT减少呈正相关,均与IVST、FS、MVCF、E/A增加呈负相关;NT-proBNP、MMP-2下降水平两者呈正相关(均P<0.05)。结论他汀类药物普伐他汀对AMI急诊PCI术后较为稳定的CHF患者心功能改善有益,这可能与其抑制MMP-2、减轻左室重构作用相关。

曲古抑菌素A对CNE2鼻咽癌细胞增殖及凋亡的影响

目的研究曲古抑菌素A(TSA)在体外对人鼻咽癌细胞的影响,为鼻咽癌的药物治疗提供依据。方法将鼻咽癌CNE2细胞经0.125%胰酶处理制成细胞悬液,培养24 h。试验设TSA1～TSA5组及对照组,TSA1～TSA5组分别加入TSA200、300、400、500、600 nmol/L,对照组加入等量生理盐水;6、12、24、36 h后MTT法计算细胞抑制率。将CNE2细胞接种于25 ml培养瓶中,分为TSA1～TSA3组及对照组,TSA1～TSA3组分别加入300、400、500nmol/L TSA处理24 h;对照组加入等量生理盐水;流式细胞仪检测分析细胞周期及细胞凋亡率。结果 TSA可明显抑制CNE2细胞生长,同时点细胞抑制率对照组<TSA1组<TSA2组<TSA3组<TSA4组<TSA5组,并呈剂量时间效应关系,P均<0.05。TSA干预后CNE2细胞G2/M期细胞明显增多,出现G2/M期阻滞,细胞凋亡率明显升高,且呈浓度依赖性。结论 TSA能明显抑制CNE2细胞增殖,诱导细胞凋亡,并具有G2/M期阻滞效应,是治疗鼻咽癌的潜在药物。

190CT3-myc融合多肽的制备及鉴定

目的通过基因重组的方法构建带有myc标签的190CT3功能多肽(190CT3-myc)。方法采用PCR技术对编码190CT3-myc融合多肽的cDNA序列进行扩增,克隆于T载体上,酶切及测序鉴定正确后构建带有myc标签的190CT3真核表达载体,通过脂质体转染入中国仓鼠卵巢癌(CHO)细胞中;经G418筛选,获得稳定表达目的基因的CHO细胞株,免疫荧光化学法鉴定。应用抗原抗体亲和层析柱纯化190CT3-myc融合多肽,SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色和Westernblotting分析鉴定。结果 PCR扩增得到编码为190CT3-myc的cDNA片段,经酶切和测序鉴定正确。免疫荧光化学法鉴定显示,转染重组质粒的CHO细胞稳定表达190CT3-myc。考马斯亮蓝染色显示,融合多肽190CT3-myc表达量占细胞总蛋白的10%左右,纯度≥90%;Western blotting分析表明,纯化融合多肽的相对分子量约为17000,与目的蛋白大小相符。结论成功制备190CT3-myc重组多肽,为抗白血病分子医药研究提供了新的思路。

曲古抑菌素A对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及机制研究

目的探讨曲古抑菌素A(TSA)对鼻咽癌CNE2细胞凋亡的影响及作用机制。方法以不同浓度(300、400、500 nmol/L)TSA作用鼻咽癌CNE2细胞株,采用流式细胞术测定TSA作用前后鼻咽癌细胞凋亡情况;逆转录聚合酶链反应(RT-PCR)分析TSA作用后鼻咽癌细胞中细胞周期素依赖性蛋白激酶抑制因子1A(P21)表达的变化。结果以300、400、500 nmol/L TSA分别诱导CNE2细胞凋亡,作用24 h后凋亡率分别为12.52%±1.57%、19.69%±3.00%、19.63%±2.68%;48 h后凋亡率为24.50%±4.45%、36.24%±3.92%、34.82%±6.45%;与对照组(0 nmol/L TSA)比较,差异均有统计学意义(P<0.05)。RT-PCR检测发现,TSA可诱导CNE2细胞内p21基因表达明显增加(P<0.01)。结论 TSA能明显诱导CNE2细胞凋亡,其作用机制可能与p21基因的异常表达有关。

AMI紧急PCI治疗后非梗死相关动脉不同治疗策略对血炎症因子和主要心血管事件的影响

目的研究急性心肌梗死（AMI）多支血管病变急诊经皮冠状动脉介入治疗（PCI）后非梗死相关动脉采用药物或药物＋PCI治疗后的血炎症因子[可溶性C1MO配体（sCD40L）、白细胞介素-6（IL-6）、肿瘤坏死因子-α（TNF-α）]和主要心血管事件（MACE）发生率。方法入选2007—08～2008—05接受PCI治疗的50例AMI多支病变患者，根据对非梗死相关动脉是否再次PCI将患者分为两组，其中PCI治疗组20例（40％），药物治疗组30例（60％）。对比分析治疗12个月时两组sCD40L、IL-6、TNF—a水平的变化和MACE发生率及其相关性。结果①两组性别、年龄、病因构成比、冠心病易患因素、心功能分级、肝肾功能指标、治疗用药、植入支架类型、血管病变支数、病变类型、完全闭塞病变的比例比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。②两组治疗前sCD40L、IL-6、TNF-α水平比较差异无统计学意义，治疗后两组sCD40L、IL-6、TNF-仪水平均下降（P均〈0．01），而治疗后两组sCD40L、IL-6、TNF-α水平比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。③PcI治疗组心绞痛复发率、再次因心源性疾病人院率明显低于药物治疗组（P均〈0．01），但继发心力衰竭、再次非致命性心肌梗死、靶血管再次血管化、严重心律失常、全因死亡及心源性死亡率等两组比较差异无统计学意义（P均〉0．05）。④两组炎症因子水平下降差值与MACE发生率呈负相关（P均〈0．01）。结论AMI后非梗死相关动脉采取PCI治疗较单纯药物治疗减少了心绞痛复发率、再次因心源性疾病人院率，但并不减少MACE发生率。

自发性破裂大出血的纵隔混合型生殖细胞瘤伴肺转移性绒毛膜癌一例

患者 男性，28岁。2009年4月25日因心慌、气促2周就诊。体检：皮肤白净，双乳明显肿大；窦性心律，心率110次／min；双侧呼吸音清；腹部未见异常；双侧睾丸较小，质地硬。胸部CT检查提示：前上纵隔巨大占位，右肺上、下叶结节（图1）。腹部CT检查未见异常。B超提示双侧睾丸形态明显缩小，包膜完整。