190CT3-myc融合多肽的制备及鉴定

目的通过基因重组的方法构建带有myc标签的190CT3功能多肽(190CT3-myc)。方法采用PCR技术对编码190CT3-myc融合多肽的cDNA序列进行扩增,克隆于T载体上,酶切及测序鉴定正确后构建带有myc标签的190CT3真核表达载体,通过脂质体转染入中国仓鼠卵巢癌(CHO)细胞中;经G418筛选,获得稳定表达目的基因的CHO细胞株,免疫荧光化学法鉴定。应用抗原抗体亲和层析柱纯化190CT3-myc融合多肽,SDS-PAGE后考马斯亮蓝染色和Westernblotting分析鉴定。结果 PCR扩增得到编码为190CT3-myc的cDNA片段,经酶切和测序鉴定正确。免疫荧光化学法鉴定显示,转染重组质粒的CHO细胞稳定表达190CT3-myc。考马斯亮蓝染色显示,融合多肽190CT3-myc表达量占细胞总蛋白的10%左右,纯度≥90%;Western blotting分析表明,纯化融合多肽的相对分子量约为17000,与目的蛋白大小相符。结论成功制备190CT3-myc重组多肽,为抗白血病分子医药研究提供了新的思路。