差异过筛法体外分离培养原代大鼠脑微血管内皮细胞及其鉴定

目的:采用差异过筛法培养纯度高、活性好的原代大鼠脑微血管内皮细胞(BMECs)。方法:取4周龄SD大鼠脑皮质,经剪碎、细胞筛网过滤、收集网下滤过物、Ⅱ型胶原酶消化后,置于CO_(2)培养箱中进行原代培养。通过细胞形态学观察、血管性血友病因子(vWF)免疫细胞化学染色鉴定所培养的目的细胞。结果:培养24 h后血管段周围爬出短梭形的细胞;48 h后岛屿状的细胞集落形成;72 h后细胞铺满瓶底,呈典型的单层、铺路石样、镶嵌式贴壁生长;免疫细胞化学染色显示,所培养细胞的细胞质呈现棕红色,vWF表达为阳性。结论:差异过筛法能够成功分离培养出原代大鼠BMECs。

PD-1/L1免疫检查点抑制剂用于EGFR-TKIs耐药后晚期非小细胞肺癌的疗效分析

目的探讨PD-1/L1免疫检查点抑制剂用于EGFR-TKIs耐药后晚期非小细胞肺癌的疗效与安全性。方法回顾性分析长征医院2019年1月至2021年1月期间收治的经一线EGFR-TKIs治疗失败后的Ⅳ期非小细胞肺癌患者。按照治疗方案分为3组:PD-1/L1抑制剂联合贝伐珠单抗联合化疗组、PD-1/L1抑制剂单药治疗组和抗血管生成药物联合化疗组,比较三组客观缓解率(objective response rate,ORR)、疾病控制率(disease control rate,DCR)、无进展生存期(progression-free survival,PFS)及三组的不良反应(adverse events,AEs)的差异。结果三组间ORR和DCR差异均无统计学意义。免疫四药联合组与免疫单药组相比,中位PFS(总体:6.2个月vs 3.2个月),差异具有统计学意义(P<0.001),而OS(总体:16.1个月vs 9.4月),差异不具有统计学意义(P=0.509)。免疫四药联合组与贝伐珠单抗联合化疗组比较,中位PFS(总体:6.2个月vs 4.0个月),差异具有统计学意义(P=0.001),而OS(总体:16.1个月vs 8.67个月),差异无统计学意义(P=0.25)。不良反应方面:相较于贝伐珠单抗联合化疗组,免疫治疗整体AEs发生率低,耐受性良好。结论PD-1/L1免疫检查点抑制剂联合贝伐珠单抗联合含铂双药化疗对于EGFR-TKIs耐药后晚期NSCLC患者有一定疗效,患者生存情况及毒性耐受性均优于传统含铂双药化疗的治疗方式。

PD-1抑制剂pembrolizumab停药后出现的免疫相关肺炎一例并文献复习

目的探讨程序性死亡蛋白1(PD-1)及程序性死亡配体1(PD-L1)抑制剂所致免疫相关肺炎的临床特征、诊断、治疗和预后。方法回顾性分析上海长征医院收治的1例晚期食管癌患者使用PD-1抑制剂pembrolizumab并在停药后出现免疫相关肺炎的临床资料,并对相关文献进行复习。结果患者男,64岁,食管癌术后出现腹腔淋巴结转移,二线给予Keytruda(200mg,静脉注射,每3周1次)治疗8个周期,腹腔转移性淋巴结缩小,用药期间未见明显不良反应。停用Keytruda4周后,出现胸闷、气急,胸部CT显示双肺弥漫磨玻璃影、网格状影。抗细菌治疗无效,使用足量激素2周仍未见明显改善,激素减量并加用吡非尼酮2个月后双肺间质性改变明显改善,但转移性腹腔淋巴结再次增大。文献复习PD-1抑制剂所致免疫相关肺炎,发病的中位时间为用药后28个月,最常见的临床表现为气短、呼吸困难,发热相对少见;最常见的影像表现为双肺多发磨玻璃影、网格状影、实变影;病理类型以机化性肺炎为主;轻症患者足量激素治疗后缓慢规律减量预后较好,重症患者可联合免疫抑制剂治疗,3级以上病例病死率高。结论需要提高对PD-1/PD-L1抑制剂所致免疫相关肺炎的认识,停药后仍需定期随访,监测各系统免疫相关不良反应。

不同显微CT成像在大鼠肺部形态及容积成像中的比较

目的应用常规Micro-CT及基于同步辐射相位衬度Micro-CT技术对大鼠肺脏进行成像,探讨两种检查方法显示鼠肺部细微结构的能力,并评价其优缺点。方法常规饲养Wistar大鼠7 d,适应环境后进行活体常规Micro-CT扫描。处死大鼠获取大鼠离体肺脏标本,标本经10%甲醛固定24 h后,梯度酒精脱水获得干燥标本,行离体成像。离体大鼠肺脏标本分别在SCANCO uCT80 Micro-CT及Skyscan1172 Micro-CT进行不同分辨率的常规Micro-CT成像,之后在上海光源(SSRF)X射线成像与生物医学应用光束线站(BL13W)进行基于同步辐射相位衬度Micro-CT成像。成像后将原位肺脏组织再次浸泡在10%甲醛中,行HE染色组织病理学检查评估。结果利用常规Micro-CT可行活体大鼠肺脏成像,高分辨率常规Micro-CT和基于同步辐射相衬Micro-CT成像技术可以清晰显示大鼠肺组织微结构,包括气管、各级支气管、肺泡及肺脏血管,与病理学图像所示结构特征相似,具有较好的一致性,经后处理可进一步对肺脏容积、支气管束、肺泡及血管束等进行测量,提供更多参考数据。结论常规Micro-CT成像技术可应用于实验动物的影像学动态监测,高分辨率的常规Micro-CT和基于同步辐射相衬Micro-CT成像技术一定程度上可替代病理学检查。

纳武利尤单抗单药后线治疗晚期EGFR合并TP53、RB1共突变肺腺癌1例

报道1例EGFR合并TP53、RB1共突变62岁晚期肺腺癌患者的诊治过程。本例患者一线阿法替尼靶向治疗无进展生存仅4个月,二线尝试奥希替尼无效,三线培美曲塞联合卡铂化疗病情持续进展并出现巨大腹腔转移灶及腹腔感染,四线免疫治疗获得部分缓解并持续至随访期结束。本例患者的诊治经验提示驱动基因敏感突变合并共突变的患者单纯靶向治疗效果欠佳,但后线可能会从免疫治疗中获益,短期内使用广谱抗生素不是延后免疫治疗的指征,免疫治疗的疗效预测体系有待进一步完善。

循环和肿瘤组织内中性粒细胞促肿瘤机制

中性粒细胞是人体内最常见的炎细胞,也是肿瘤微环境中最丰富的细胞种类。正常中性粒细胞来源于骨髓造血干细胞,具有清除病原、组织修复作用;而在肿瘤背景下,中性粒细胞会衍生出骨髓源性抑制细胞(MDSCs)亚群,这是一种未成熟中性粒细胞,具有强烈免疫抑制作用。循环MDSCs通过产生活性氧及精氨酸酶抑制T淋巴细胞抗肿瘤免疫,释放中性粒细胞胞外陷阱促进肿瘤细胞血运转移。肿瘤组织内MDSCs通过表达PD-L1抑制T细胞功能,还可释放血管内皮生长因子促进血管新生,释放金属基质蛋白酶引起上皮-间质转化,加剧肿瘤进展。中性粒细胞在肿瘤发生、发展中起到重要的诱导作用,本文就中性粒细胞的起源、循环和肿瘤组织内中性粒细胞促进肿瘤进展的机制作一综述。