腺病毒介导HGF转染脂肪干细胞复合温敏型可注射水凝胶对兔颞下颌关节骨关节病髁突软骨的修复作用

目的:探讨肝细胞生长因子(HGF)转染脂肪干细胞复合水凝胶支架材料对促进兔颞下颌关节炎病理状态微环境中受损软骨修复的意义。方法:培养兔脂肪干细胞,利用腺病毒介导对其进行HGF转染并制备ADSCs/HGF/水凝胶支架材料。兔颞下颌关节上腔为注射区并分为5组,A组为空白对照组,B组为模型组,C组为单纯细胞治疗组,单纯脂肪干细胞腔内注射,D组为干细胞复合材料组,为造模后腔内注射干细胞复合可注射水凝胶支架材料,E组为转染后干细胞复合水凝胶注射。所有材料移植成功后各组动物分别于用药第3、9周后取材,制备标本并行髁突软骨扫描电镜、组织学观察及实时定量PCR检测,采用SPSS17.0软件包对数据进行方差分析及t检验。结果:扫描电镜与组织学观察可见,D、E组软骨病变区改善情况优于B、C组。与模型组比较,实时定量PCR结果显示,E组MMP-13表达与空白组相对持平但低于C、D组,差异有显著性(P<0.05);E组TIMP-1表达与空白组相对持平但高于C、D组,差异有显著性(P<0.05)。结论:腺病毒介导HGF转染脂肪干细胞复合可注射型水凝胶对兔颞下颌关节骨关节病受损软骨具有明显修复作用。

小型猪下颌骨放射性骨坏死动物模型的建立

目的探讨利用小型猪建立下颌骨放射性骨坏死（ORN）动物模型的可行性。方法应用三维适形放疗（3D-CRT）技术,采用电子直线加速器照射源对24只小型猪右侧下颌骨进行25 Gy和28 Gy一次性照射,于照射结束后2个月拔除双侧下颌第一磨牙,通过定期局部观察、X线、CT检查和组织病理学方法诊断下颌骨ORN的发生。结果照射结束后3～4个月,拔牙后的小型猪先后全部发生了下颌骨ORN,28 Gy＋拔牙组症状较重。结论 25 Gy单一剂量放射小型猪下颌骨＋拔牙能建立有效的、可信的下颌骨ORN模型,可用于ORN病因学及治疗等方面的进一步研究。

下颌骨放射性骨坏死骨组织的电镜观察

目的:在建立小型猪下颌骨放射性骨坏死动物模型基础上,应用电镜技术研究下颌骨放射性骨坏死形成、发展的超微结构动态变化过程。方法:对6只小型猪右侧下颌骨进行25 Gy和28 Gy一次性照射,建立小型猪右侧下颌骨放射性骨坏死动物模型,分别于照射结束后3、4、5个月切取右侧下颌骨放射性骨坏死部位死骨,制备标本,进行电镜检查分析。结果:照射后的早期骨胶原纤维即受到破坏,骨细胞先出现细胞膜破坏,随后胞质出现空泡,细胞器裂解,最后出现核变化。大剂量照射后骨细胞的破坏出现早而重,并且加速了骨细胞的裂解、死亡。结论:骨细胞细胞膜及细胞质较细胞核对放射线更为敏感,照射后骨细胞死亡过程首先发生在细胞膜及细胞质内,与以往认为细胞核损伤在先的观点不同。

SDF-1/NELL-1双基因转染促进脂肪干细胞体外成骨

[目的]观察腺病毒载体转染基质细胞衍生因子-1 (stromal cell-derived factor-1, SDF-1)和尼尔样-1型分子(Nellike molecule-l, NELL-1)基因对兔脂肪干细胞(adipose stem cells, ADSCs)体外成骨分化能力的影响。[方法]自兔分离培养ADSCs,分为单纯细胞组(original cell control, OCC)、空质粒转染组(empty vector control, EVC)、SDF-1组、NELL-1组和SDF-1/NELL-1组,给予相应体外处理。成骨诱导14 d后,茜素红染色检测钙结节形成及碱性磷酸酶活性,Western blot检测和RT-PCR检测相应蛋白与m RNA表达水平。[结果]单纯SDF-1或NELL-1转染,或SDF-1/NELL-1两者共同转染均显著增加目标基因的蛋白表达水平(P<0.05),特别是共同转染同时增加两种基因标目蛋白的表达。茜素红染色钙结节计数和ALP活性检测方面,SDF-1组、NELL-1组和SDF-1/NELL-1组均显著高于OCC组和EVC组(P<0.05),其中,SDF-1/NELL-1组最高。RT-PCR检测方面,SDF-1组、NELL-1组和SDF-1/NELL-1组的OPN和OCN m RAN表达水平高于OCC组和EVC组(P<0.05),其中SDF-1/NELL-1组的OPN和OCN m RAN表达水平最高。[结论] SDF-1、NELL-1单独转染,或两者共转染ADSCs均可获得目标蛋白的高表达,以上两种基因单独转染,特别是两种基因共同转染,可显著增强ADSCs的体外成骨。