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狂犬病新型基因工程疫苗研究进展
被引量:
7
1
作者
柴本杰
黄菲
+4 位作者
裴捷
周明
田大勇
傅振芳
赵凌
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期75-84,共10页
狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领...
狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。
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关键词
狂犬病
狂犬病病毒
灭活疫苗
弱毒疫苗
核酸疫苗
亚单位疫苗
病毒样颗粒疫苗
口服疫苗
基因工程
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职称材料
H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗稳定性研究
被引量:
3
2
作者
沈吉友
吴晓鑫
+4 位作者
陈磊
李方仲
苏波
周雨晴
姚伟
《微生物学免疫学进展》
2019年第4期22-26,共5页
目的评价H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗的稳定性。方法采用国内自主构建的重组H7N9禽流感病毒疫苗株毒种制备单价疫苗原液,制备含MF59佐剂的成品疫苗。按照企业注册质量标准进行检定,分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和(5...
目的评价H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗的稳定性。方法采用国内自主构建的重组H7N9禽流感病毒疫苗株毒种制备单价疫苗原液,制备含MF59佐剂的成品疫苗。按照企业注册质量标准进行检定,分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和(5±3)℃环境下,观察不同时间疫苗的稳定性。结果经检定,成品疫苗的外观、装量、无菌检查、异常毒性检测、细菌内毒素含量、渗透压质量摩尔浓度及其他检定项目均符合企业注册质量标准。H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗在(37±2)℃保存3 d、在(25±2)℃保存3个月、在(5±3)℃保存30个月,疫苗各项指标均符合企业注册质量标准。结论 H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗具有良好的稳定性。
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关键词
H7N9禽流感病毒
佐剂
MF59
裂解疫苗
稳定性
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职称材料
冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺研究
3
作者
詹刚
刘珍珍
田大勇
《生物化工》
2020年第5期76-81,共6页
目的:确定人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺离心力参数。方法:通过镜检和颗粒数统计判定不同离心力澄清后收获液中颗粒物去除情况;通过Lorry和UV值法检测不同离心力对澄清液中可溶性蛋白的影响;通过病毒滴定和G蛋白定量检测确定...
目的:确定人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺离心力参数。方法:通过镜检和颗粒数统计判定不同离心力澄清后收获液中颗粒物去除情况;通过Lorry和UV值法检测不同离心力对澄清液中可溶性蛋白的影响;通过病毒滴定和G蛋白定量检测确定不同离心力对抗原回收率的影响程度。结果:随着离心力的增大,澄清液中颗粒物总数、病毒滴度和抗原量均逐步减少,而可溶性蛋白总量没有显著降低;当离心力超过8050 g时,病毒滴度和抗原含量显著降低。结论:冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)收获液的最佳澄清离心力为8050 g。
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关键词
狂犬病疫苗
澄清工艺
离心力
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职称材料
重组猪胰蛋白酶在制备狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)中的应用
被引量:
7
4
作者
顾玉林
牛彪
+5 位作者
阮俊程
张亚静
解丽霞
陈磊
苏波
田大勇
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期5-9,共5页
目的探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)]中的应用。方法采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪胰酶及猪胰酶;用1.25 mg/mL猪胰酶及1、0.25、0.0625、0.015625 m...
目的探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)]中的应用。方法采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪胰酶及猪胰酶;用1.25 mg/mL猪胰酶及1、0.25、0.0625、0.015625 mg/mL重组猪胰酶分别消化制备原代CEF,比较细胞活率、单胚细胞收获量、体外培养48 h的细胞增殖比及培养96 h的细胞形态,筛选最适重组猪胰酶工作浓度;用最适浓度重组猪胰酶及1.25 mg/mL猪胰酶消化后原代CEF对狂犬病病毒滴度的影响。结果重组猪胰酶仅有1条蛋白条带,纯度100%,而猪胰酶有多条蛋白杂带,纯度33%;与1.25 mg/mL猪胰酶比较,0.0625 mg/m L重组猪胰酶消化的CEF细胞活率、单胚细胞收获量及培养48 h的细胞增殖比差异均无统计学意义(P均>0.05),且其细胞形态相当,其最适工作浓度为0.0625 mg/mL;2种胰酶制备CEF的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组猪胰酶可代替猪胰酶用于狂犬病疫苗(CEF细胞)的生产。
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关键词
猪胰蛋白酶
狂犬病疫苗
鸡胚成纤维细胞
原文传递
狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发
被引量:
3
5
作者
刘珍珍
田大勇
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期25-33,共9页
目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质...
目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150~200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。
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关键词
狂犬病病毒疫苗
纯化工艺
连续流蔗糖密度梯度离心
原文传递
四价流感病毒裂解疫苗稳定性研究
6
作者
李方仲
沈吉友
+2 位作者
姚伟
苏波
陈磊
《药物生物技术》
CAS
2019年第3期223-228,共6页
评价四价流感病毒裂解疫苗[Quadrivalent influenza vaccine(split virion),QIV]的稳定性,为确定疫苗质量和有效期提供依据。用WHO当年推荐的流行性感冒病毒株A1(H1N1)型、A3(H3N2)型和两株B型分别制备4批原液,检测合格后配制3批半成品...
评价四价流感病毒裂解疫苗[Quadrivalent influenza vaccine(split virion),QIV]的稳定性,为确定疫苗质量和有效期提供依据。用WHO当年推荐的流行性感冒病毒株A1(H1N1)型、A3(H3N2)型和两株B型分别制备4批原液,检测合格后配制3批半成品,经检测合格后即为成品疫苗,将成品放置在不同温度,并在规定时间取出按四价流感病毒裂解疫苗稳定性研究方案检测,同时将成品送中国食品药品检定研究院(NIFDC)进行法定检测。四价流感病毒裂解疫苗在(37±2)℃保存3 d、在(25±2)℃保存1个月、在(6±2)℃保存12个月,疫苗各项检测指标均符合企业注册标准要求。3批疫苗经NIFDC检定均符合质量标准。四价流感病毒裂解疫苗具有良好的稳定性,可以替代现有三价流感病毒裂解疫苗,疫苗的有效期可定为12个月。
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关键词
流感病毒
四价
裂解疫苗
血凝素
稳定性
检测
原文传递
自研培养基在人用鸡胚狂犬病疫苗中的应用
被引量:
1
7
作者
陈磊
苏波
+5 位作者
牛彪
阮俊程
郭跃
王德慧
顾玉林
田大勇
《微生物学免疫学进展》
2020年第1期56-62,共7页
目的评估自主研发培养基QS作为首选培养基用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)生产过程的可行性。方法分别制备基于自主研发培养基QS和其他3种商业化培养基(X1、X2、X3)的鸡胚成纤维细胞悬液,观察和比较细胞形态和生长特性;以Flury ...
目的评估自主研发培养基QS作为首选培养基用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)生产过程的可行性。方法分别制备基于自主研发培养基QS和其他3种商业化培养基(X1、X2、X3)的鸡胚成纤维细胞悬液,观察和比较细胞形态和生长特性;以Flury HEP株接种鸡胚成纤维细胞(MOI=0.003),分别通过直接免疫荧光法、蛋白质印迹法(Western blotting)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)比较不同培养基条件下收获液中病毒滴度和G蛋白含量。结果在细胞浓度1×10~6个/mL条件下,4种培养基培养的鸡胚成纤维细胞在形态上均无显著区别;但是自主研发培养基QS和X2的病毒收获液的G蛋白含量在第4天时分别为0.66 IU/mL和0.63 IU/mL,高于X1的0.5 IU/mL和X3的0.3 IU/mL。在第6天时分别为0.92 IU/mL和0.88 IU/mL,高于X1的0.64 IU/mL和X3的0.52 IU/mL,说明基于自主研发培养基QS和X2的病毒收获液在G蛋白含量方面具有明显优势。结论自主研发培养基QS可以用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的生产。
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关键词
培养基
狂犬病疫苗
病毒滴度
G蛋白
原文传递
题名
狂犬病新型基因工程疫苗研究进展
被引量:
7
1
作者
柴本杰
黄菲
裴捷
周明
田大勇
傅振芳
赵凌
机构
华中农业大学农业微
生物
学国家重点实验室/华中农业大学动物医学院
上海青赛生物科技有限公司
出处
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第3期75-84,共10页
基金
国家自然科学基金青年科学家基金项目(31702248)。
文摘
狂犬病是由狂犬病病毒感染中枢神经系统引起的一种古老的人兽共患传染病,人和动物感染后一旦出现临床症状,死亡率几乎100%,至今仍无有效的治疗方法。当前,接种疫苗是预防狂犬病最为有效的途径。因此,狂犬病疫苗研发一直是狂犬病研究领域的热点之一,进而不断涌现出新型疫苗。本文对近期狂犬病新型灭活疫苗、弱毒疫苗、核酸疫苗、亚单位疫苗、病毒样颗粒疫苗、口服疫苗等基因工程疫苗研究进展进行系统梳理,以期把握狂犬病疫苗研究现状,为研发更为有效的狂犬病新型疫苗提供新思路。
关键词
狂犬病
狂犬病病毒
灭活疫苗
弱毒疫苗
核酸疫苗
亚单位疫苗
病毒样颗粒疫苗
口服疫苗
基因工程
Keywords
rabies
rabies virus
inactivated vaccine
attenuated vaccine
nucleic acid vaccine
subunit vaccine
virus-like particle vaccine
oral vaccine
genetic engineering
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗稳定性研究
被引量:
3
2
作者
沈吉友
吴晓鑫
陈磊
李方仲
苏波
周雨晴
姚伟
机构
浙江天元
生物
药业
有限公司
技术开发部
浙江大学医学院附属第一医院感染科传染病诊治国家重点实验室
上海青赛生物科技有限公司
研发部
出处
《微生物学免疫学进展》
2019年第4期22-26,共5页
基金
“重大新药创制”科技重大专项(2015ZX09101044)
文摘
目的评价H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗的稳定性。方法采用国内自主构建的重组H7N9禽流感病毒疫苗株毒种制备单价疫苗原液,制备含MF59佐剂的成品疫苗。按照企业注册质量标准进行检定,分别放置于(37±2)℃、(25±2)℃和(5±3)℃环境下,观察不同时间疫苗的稳定性。结果经检定,成品疫苗的外观、装量、无菌检查、异常毒性检测、细菌内毒素含量、渗透压质量摩尔浓度及其他检定项目均符合企业注册质量标准。H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗在(37±2)℃保存3 d、在(25±2)℃保存3个月、在(5±3)℃保存30个月,疫苗各项指标均符合企业注册质量标准。结论 H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗具有良好的稳定性。
关键词
H7N9禽流感病毒
佐剂
MF59
裂解疫苗
稳定性
Keywords
H7N9 avian influenza virus
Adjuvant
MF59
Split vaccine
Stability
分类号
R392 [医药卫生—免疫学]
下载PDF
职称材料
题名
冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺研究
3
作者
詹刚
刘珍珍
田大勇
机构
上海青赛生物科技有限公司
出处
《生物化工》
2020年第5期76-81,共6页
文摘
目的:确定人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺离心力参数。方法:通过镜检和颗粒数统计判定不同离心力澄清后收获液中颗粒物去除情况;通过Lorry和UV值法检测不同离心力对澄清液中可溶性蛋白的影响;通过病毒滴定和G蛋白定量检测确定不同离心力对抗原回收率的影响程度。结果:随着离心力的增大,澄清液中颗粒物总数、病毒滴度和抗原量均逐步减少,而可溶性蛋白总量没有显著降低;当离心力超过8050 g时,病毒滴度和抗原含量显著降低。结论:冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)收获液的最佳澄清离心力为8050 g。
关键词
狂犬病疫苗
澄清工艺
离心力
Keywords
Rabies vaccine
Clarification Process
Centrifugal force
分类号
TQ464 [化学工程—制药化工]
S855.3 [农业科学—临床兽医学]
下载PDF
职称材料
题名
重组猪胰蛋白酶在制备狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)中的应用
被引量:
7
4
作者
顾玉林
牛彪
阮俊程
张亚静
解丽霞
陈磊
苏波
田大勇
机构
上海青赛生物科技有限公司
出处
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021年第1期5-9,共5页
基金
国家自然科学基金资助(31702248)。
文摘
目的探索重组猪胰蛋白酶(简称重组猪胰酶)在制备狂犬病疫苗[鸡胚成纤维细胞(chicken embryo fibroblast,CEF)]中的应用。方法采用SDS-PAGE及Western blot法分析鉴定重组猪胰酶及猪胰酶;用1.25 mg/mL猪胰酶及1、0.25、0.0625、0.015625 mg/mL重组猪胰酶分别消化制备原代CEF,比较细胞活率、单胚细胞收获量、体外培养48 h的细胞增殖比及培养96 h的细胞形态,筛选最适重组猪胰酶工作浓度;用最适浓度重组猪胰酶及1.25 mg/mL猪胰酶消化后原代CEF对狂犬病病毒滴度的影响。结果重组猪胰酶仅有1条蛋白条带,纯度100%,而猪胰酶有多条蛋白杂带,纯度33%;与1.25 mg/mL猪胰酶比较,0.0625 mg/m L重组猪胰酶消化的CEF细胞活率、单胚细胞收获量及培养48 h的细胞增殖比差异均无统计学意义(P均>0.05),且其细胞形态相当,其最适工作浓度为0.0625 mg/mL;2种胰酶制备CEF的狂犬病病毒滴度差异无统计学意义(P>0.05)。结论重组猪胰酶可代替猪胰酶用于狂犬病疫苗(CEF细胞)的生产。
关键词
猪胰蛋白酶
狂犬病疫苗
鸡胚成纤维细胞
Keywords
Porcine trypsin
Rabies vaccine
Chicken embryo fibroblasts
分类号
R373 [医药卫生—病原生物学]
原文传递
题名
狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发
被引量:
3
5
作者
刘珍珍
田大勇
机构
上海青赛生物科技有限公司
出处
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020年第4期25-33,共9页
基金
国家自然科学基金(31702248)资助项目.
文摘
目的:开发冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的连续流蔗糖密度梯度离心纯化工艺。方法:分别比较两种不同初始蔗糖浓度和不同上样速度对纯化效果的影响,初步确定纯化工艺;通过多批次实验确定样品收集范围;比较不同浓缩倍数条件下杂质去除和抗原回收情况,确定合适的收获液浓缩比例;比较不同批次样品纯化后的杂质去除率和重复性,判定本纯化工艺的稳定性。结果:选取60%作为初始蔗糖浓度,在上样速度为150~200ml/min时,可以有效地对10倍浓缩的病毒收获液进行纯化;卵清蛋白、牛血清白蛋白和庆大霉素去除率分别达到99%,95%和95%,且工艺具有极好的稳定性。结论:开发的连续流蔗糖密度梯度离心技术可以作为冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的产业化纯化工艺。
关键词
狂犬病病毒疫苗
纯化工艺
连续流蔗糖密度梯度离心
Keywords
Rabies virus vaccine
Purification process
Continuous flow sucrose density gradient centrifugation
分类号
Q81 [生物学—生物工程]
原文传递
题名
四价流感病毒裂解疫苗稳定性研究
6
作者
李方仲
沈吉友
姚伟
苏波
陈磊
机构
浙江天元
生物
药业
有限公司
上海青赛生物科技有限公司
出处
《药物生物技术》
CAS
2019年第3期223-228,共6页
文摘
评价四价流感病毒裂解疫苗[Quadrivalent influenza vaccine(split virion),QIV]的稳定性,为确定疫苗质量和有效期提供依据。用WHO当年推荐的流行性感冒病毒株A1(H1N1)型、A3(H3N2)型和两株B型分别制备4批原液,检测合格后配制3批半成品,经检测合格后即为成品疫苗,将成品放置在不同温度,并在规定时间取出按四价流感病毒裂解疫苗稳定性研究方案检测,同时将成品送中国食品药品检定研究院(NIFDC)进行法定检测。四价流感病毒裂解疫苗在(37±2)℃保存3 d、在(25±2)℃保存1个月、在(6±2)℃保存12个月,疫苗各项检测指标均符合企业注册标准要求。3批疫苗经NIFDC检定均符合质量标准。四价流感病毒裂解疫苗具有良好的稳定性,可以替代现有三价流感病毒裂解疫苗,疫苗的有效期可定为12个月。
关键词
流感病毒
四价
裂解疫苗
血凝素
稳定性
检测
Keywords
Influenza virus
Quadrivalent
Split vaccine
Hemagglutinin (HA)
Stability
Testing
分类号
R511.7 [医药卫生—内科学]
R186.3 [医药卫生—流行病学]
原文传递
题名
自研培养基在人用鸡胚狂犬病疫苗中的应用
被引量:
1
7
作者
陈磊
苏波
牛彪
阮俊程
郭跃
王德慧
顾玉林
田大勇
机构
上海青赛生物科技有限公司
研发部
出处
《微生物学免疫学进展》
2020年第1期56-62,共7页
基金
国家自然科学基金(31702248).
文摘
目的评估自主研发培养基QS作为首选培养基用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)生产过程的可行性。方法分别制备基于自主研发培养基QS和其他3种商业化培养基(X1、X2、X3)的鸡胚成纤维细胞悬液,观察和比较细胞形态和生长特性;以Flury HEP株接种鸡胚成纤维细胞(MOI=0.003),分别通过直接免疫荧光法、蛋白质印迹法(Western blotting)和酶联免疫吸附测定(enzyme-linked immunosorbent assay,ELISA)比较不同培养基条件下收获液中病毒滴度和G蛋白含量。结果在细胞浓度1×10~6个/mL条件下,4种培养基培养的鸡胚成纤维细胞在形态上均无显著区别;但是自主研发培养基QS和X2的病毒收获液的G蛋白含量在第4天时分别为0.66 IU/mL和0.63 IU/mL,高于X1的0.5 IU/mL和X3的0.3 IU/mL。在第6天时分别为0.92 IU/mL和0.88 IU/mL,高于X1的0.64 IU/mL和X3的0.52 IU/mL,说明基于自主研发培养基QS和X2的病毒收获液在G蛋白含量方面具有明显优势。结论自主研发培养基QS可以用于冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)的生产。
关键词
培养基
狂犬病疫苗
病毒滴度
G蛋白
Keywords
Medium
Rabies vaccine
Virus titer
G protein
分类号
R392-33 [医药卫生—免疫学]
原文传递
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
狂犬病新型基因工程疫苗研究进展
柴本杰
黄菲
裴捷
周明
田大勇
傅振芳
赵凌
《华中农业大学学报》
CAS
CSCD
北大核心
2021
7
下载PDF
职称材料
2
H7N9禽流感病毒裂解佐剂(MF59)疫苗稳定性研究
沈吉友
吴晓鑫
陈磊
李方仲
苏波
周雨晴
姚伟
《微生物学免疫学进展》
2019
3
下载PDF
职称材料
3
冻干人用狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)澄清工艺研究
詹刚
刘珍珍
田大勇
《生物化工》
2020
0
下载PDF
职称材料
4
重组猪胰蛋白酶在制备狂犬病疫苗(鸡胚成纤维细胞)中的应用
顾玉林
牛彪
阮俊程
张亚静
解丽霞
陈磊
苏波
田大勇
《中国生物制品学杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2021
7
原文传递
5
狂犬病疫苗蔗糖密度梯度离心纯化工艺开发
刘珍珍
田大勇
《中国生物工程杂志》
CAS
CSCD
北大核心
2020
3
原文传递
6
四价流感病毒裂解疫苗稳定性研究
李方仲
沈吉友
姚伟
苏波
陈磊
《药物生物技术》
CAS
2019
0
原文传递
7
自研培养基在人用鸡胚狂犬病疫苗中的应用
陈磊
苏波
牛彪
阮俊程
郭跃
王德慧
顾玉林
田大勇
《微生物学免疫学进展》
2020
1
原文传递
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