一种制备糖化白蛋白校准品的新方法

建立了一种制备糖化白蛋白校准品的新方法。该方法首先配制pH值7.0-8.0磷酸盐缓冲液,其中含有一定量的糖基化加速剂、氯化钠、EDTA、叠氮钠、葡萄糖;然后加入重组人血清白蛋白,糖基化反应数小时;将所制备的溶液转移至切向流过滤系统,脱除糖化多肽、糖化氨基酸、葡萄糖;稀释至所需校准品浓度,加入赋形剂,分装后冷冻干燥。按该法制备糖化白蛋白校准品,不含糖化多肽、糖化氨基酸、葡萄糖,适合糖化白蛋白校准品的批量生产。

一种快速酶解糖化白蛋白的方法

建立了一种快速酶解糖化白蚤白的方法，通过在含有低浓度蛋白酶和蛋白变性剂的酶解液中添加一定浓度的离子液体用于提高蛋白酶的活性和稳定性，使糖化白蛋白在180—600s内快速酶解。该方法特别适合FAOD法测定糖化白蛋白的方法学及测定试剂开发。

一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法

建立了一种快速纯化糖化白蛋白粗溶液的方法,首先通过低温离心的方法去除糖化白蛋白粗溶液中可能含有的悬浮性杂质,取上清液备用,然后将上清液转移至切向流过滤系统,选择合适的中空纤维膜组件、泵速、剪切力,进行浓缩和洗脱操作,去除糖化白蛋白粗溶液中大部分糖化多肽、糖化氨基酸、葡萄糖,达到快速纯化糖化白蛋白粗溶液的目的。按该法进行糖化白蛋白粗溶液的纯化,可快速去除糖化多肽等小分子杂质,具有操作简单、方便、快捷等特点,适合大规模的糖化白蛋白粗溶液纯化。

以金属离子为增稳剂的酶法终点法测定MPT-NAG含量

建立了快速、简便、灵敏地测定MPT-NAG含量的酶法终点法。以金属离子为增稳剂,N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷酶(NAG)催化6-甲基-2-硫代吡啶-N-乙酰-β-D-氨基葡萄糖苷(MPT-NAG)水解,生成产物6-甲基-2巯基吡啶(MPT),MPT在340 nm处有吸收峰,通过测定340 nm处吸光度值计算MPT含量。结果表明,该法线性范围0～50 mmol/L,平均回收率为101.5%,批内变异系数(CV)和批间变异系数分别为0.010 5～0.026 4、0.013 2～0.031 6,与高效液相法比较具有良好的相关性,线性回归方程和相关系数分别为y=1.02 1 x+0.882 1,r=0.998 9,简便、灵敏、可靠,适合实际推广应用。