2型糖尿病气阴两虚证大鼠模型证候表现与血清代谢组学的相关性

目的探讨2型糖尿病气阴两虚证大鼠模型证候表现与血清代谢组学的关系。方法将SD大鼠随机分为对照组、模型组、消渴灵组,对照组用普通饲料喂养,模型组和消渴灵组用高糖高脂饲料喂养;第4周末,模型组和消渴灵组腹腔注射链脲佐菌素35 mg/kg,1 w后选取空腹血糖>11.1 mmol/L的大鼠用作后续研究,消渴灵组于第6周开始给予消渴灵2.2 g/(kg·d)。实验期间监测大鼠运动、精神状态、体质量、进食量、饮水量、抓力及空腹血糖等体征与生理状态。实验持续至第21周,末次给药后,禁食12 h,麻醉大鼠,采血,采用试剂盒测定大鼠血清中CD4^(+)、CD8^(+)、环腺苷酸(cAMP)、环鸟苷酸(cGMP)、丙二醛(MDA)、超氧化物歧化酶(SOD)及谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-Px)含量。通过高效液相色谱串联质谱联用(LC-MS/MS)的代谢组学技术对大鼠血清样本检测,并结合主成分分析(PCA)等多元统计分析方法筛选潜在的生物标志物及代谢通路。结果与对照组比较,模型组体征表现符合2型糖尿病气阴两虚证中医临床表现,CD4^(+)、cGMP、SOD、GSH-Px含量降低,CD4^(+)/CD8^(+)降低,cAMP、MDA含量升高,cAMP/cGMP升高,差异均有统计学意义(均P<0.05)。与模型组比较,消渴灵组精神运动状态、抓力明显改善,CD4^(+)、cGMP含量升高,CD4^(+)/CD8^(+)升高,cAMP/cGMP降低,差异均有统计学意义(均P<0.05)。对照组、模型组和消渴灵组共有27个显著性差异代谢物,包括L-谷氨酸、花生四烯酸等,主要涉及的代谢通路为D-谷氨酰胺与D-谷氨酸代谢,花生四烯酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢,精氨酸生物合成。结论2型糖尿病气阴两虚证病证结合大鼠模型证候表现可能与D-谷氨酰胺和D-谷氨酸代谢,花生四烯酸代谢,丙氨酸、天冬氨酸、谷氨酸代谢,精氨酸生物合成相关。

白屈菜红碱对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化的影响

目的:探讨白屈菜红碱(CHE)对人卵巢癌SKOV3细胞迁移、侵袭和上皮-间质转化(EMT)的抑制作用,阐明其相关作用机制。方法:体外培养SKOV3细胞,分为对照组和2.5、5.0、10.0、20.0及40.0μmol·L^(-1)CHE组,采用噻唑蓝(MTT)法检测各组细胞增殖抑制率。体外培养SKOV3细胞,分为对照组、转移生长因子β1(TGF-β1)组、TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组,采用细胞划痕实验检测各组细胞迁移率,Transwell小室实验检测各组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数,Westren blotting法检测各组细胞中E-钙黏蛋白(E-cadherin)、N-钙黏蛋白(N-cadherin)和波形蛋白(Vimentin)蛋白表达水平,免疫荧光染色法检测各组细胞中E-cadherin和N-cadherin荧光强度。结果:MTT法,与对照组比较,5.0、10.0、20.0和40.0μmol·L^(-1)CHE组细胞增殖抑制率明显升高(P<0.05或P<0.01)。细胞划痕实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞迁移率明显升高(P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞迁移率明显降低(P<0.01)。Transwell小室实验,与对照组比较,TGF-β1组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显增加(P<0.05);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中迁移细胞数和侵袭细胞数明显减少(P<0.01)。Westren blotting法,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显降低(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01);与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin蛋白表达水平明显升高(P<0.01),N-cadherin和Vimentin蛋白表达水平明显降低(P<0.01)。免疫荧光染色,与对照组比较,TGF-β1组细胞中E-cadherin荧光强度明显降低,N-cadherin荧光强度明显升高;与TGF-β1组比较,TGF-β1+5μmol·L^(-1)CHE组和TGF-β1+10μmol·L^(-1)CHE组细胞中E-cadherin荧光强度明显升高,N-cadherin荧光强度明显降低。结论:CHE能够抑制人卵巢癌SKOV3细胞增殖、迁移、侵袭和EMT。

鹿茸多肽对骨质疏松模型大鼠的改善作用及对SIRT1/FOXO1信号通路的影响

目的:探讨鹿茸多肽(VAP)对骨质疏松(OP)模型大鼠的保护作用,并阐明其可能的作用机制。方法:60只12周龄SD大鼠随机分为对照组、模型组、阳性药组(1 mg·kg^(-1)·d^(-1)阿仑膦酸钠灌胃)、低剂量(100 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组、中剂量(200 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组和高剂量(300 mg·kg^(-1)·d^(-1))VAP组,每组10只。除对照组外,其余各组大鼠肌肉注射地塞米松(2 mg·kg^(-1))复制OP大鼠模型,对照组大鼠肌肉注射等体积生理盐水,每周2次,连续11周。双能X射线骨密度仪检测各组大鼠股骨骨密度(BMD),酶联免疫吸附试验(ELISA)法检测各组大鼠血清中血钙(Ca^(2+))、血磷(P)、骨保护素(OPG)、碱性磷酸酶(ALP)和骨钙素(OCN)水平,生化法检测各组大鼠血清中丙二醛(MDA)水平和超氧化物歧化酶(SOD)活性,HE染色观察各组大鼠骨组织病理形态表现,Western blotting法检测各组大鼠骨组织中沉默信息调节因子1(SIRT1)、过氧化氢酶(CAT)、Runt相关转录因子2(RUNX2)和叉头框蛋白O1(FOXO1)蛋白表达水平。结果:与对照组比较,模型组大鼠股骨BMD明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠股骨BMD明显升高(P<0.05或P<0.01)。与对照组比较,模型组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显降低(P<0.05),ALP、OCN和MDA水平明显升高(P<0.05);与模型组比较,低剂量VAP大鼠血清中OPG水平明显升高(P<0.05),阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠血清中Ca^(2+)、P和OPG水平及SOD活性明显升高(P<0.05或P<0.01),阳性药组和各剂量VAP组大鼠血清中ALP、OCN和MDA水平明显降低(P<0.05或P<0.01)。HE染色,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中骨细胞数量减少且排列混乱,骨小梁纤细,出现大片断裂,髓腔扩大;与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中骨小梁粗壮,排列紧密。Western blotting法,与对照组比较,模型组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显降低(P<0.05);与模型组比较,阳性药组、中剂量VAP组和高剂量VAP组大鼠骨组织中SIRT1、CAT、RUNX2和FOXO1蛋白表达水平明显升高(P<0.05或P<0.01)。结论:VAP对OP模型大鼠具有保护作用,其作用机制可能与介导SIRT1/FOXO1信号通路抗氧化应激作用有关。

鹿茸多肽对肾阳虚证心肌损伤大鼠心肾功能的保护作用

目的分析鹿茸多肽(VAP)对肾阳虚证心肌损伤大鼠心肾功能的保护作用。方法48只SD大鼠随机分为空白组、模型组、阳性药组〔盐酸贝那普利片0.5 mg/(kg·d)〕、低、中、高剂量VAP组〔100、200、300 mg/(kg·d)VAP〕,每组8只。除空白组外,各组连续21 d肌肉注射氢化可的松〔25 mg/(kg·d)〕并同时腹腔注射阿霉素〔2.2 mg/(kg·d)〕造模,造模成功后进行灌胃给药28 d。观察各组体征及状态,检测各组心电图ST段变化,苏木素-伊红(HE)染色法观察各组心肌和肾脏组织纤维化和微血管损伤情况,生化法检测血清超氧化物歧化酶(SOD)活性、乳酸脱氢酶(LDH)和丙二醛(MDA)水平,酶联免疫吸附试验(ELISA)检测各组血清环磷酸腺苷(cAMP)、环磷酸鸟苷(cGMP)和磷酸肌酸同工酶(CK-MB)水平,Western印迹检测各组肾脏组织中血管内皮生长因子(VEGF)、低氧诱导结合蛋白(HIF)-1和转化生长因子(TGF)-β1蛋白表达水平。结果与空白组比较,模型组两眼无神,精神萎靡,行动迟缓,活动耐力下降,皮毛干枯易脱落,相互扎堆,足背水肿,体质量下降,食欲不振,尿量减少等明显变化;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组眼睛有神,动作敏捷,毛发光泽浓密,紧贴躯体,食量和排泄均接近于空白组。与空白组比较,模型组ST段显著抬高;与模型组比较,阳性药组和低、中、高剂量VAP组ST段抬高的水平显著降低。与空白组比较,模型组心肌纤维排列混乱,纤维化明显,有大量炎症细胞浸润,间隔变大;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组心脏组织的侵袭及纤维化程度均明显降低;与空白组比较,模型组肾小球萎缩、基膜增厚及管腔狭窄或闭塞,小管萎缩及纤维化,可见上皮细胞肿胀、增殖,可见瘢痕形成;与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组肾小球萎缩及纤维化均有所减轻。与空白组比较,模型组LDH、MDA和cGMP水平、TGF-β1、HIF-1蛋白表达明显升高,SOD活性、cAMP和CK-MB水平、VEGF蛋白表达明显降低(P<0.01);与模型组比较,阳性药组、中、高剂量VAP组LDH、MDA和cGMP水平、TGF-β1、HIF-1蛋白表达明显降低,SOD活性、cAMP和CK-MB水平、VEGF蛋白表达明显升高(P<0.05,P<0.01)。结论VAP对肾阳虚证心肌损伤模型大鼠心肾功能有明显保护作用,该作用机制可能是通过抑制氧自由基产生,改善心肌过氧化损伤,调节心肌细胞内外离子浓度,延长动作电位来达到抗心肌损伤的效果,并通过下调TGF-β1蛋白表达水平延缓肾间质纤维化,介导HIF-1/VEGF信号通路减轻肾阳虚证心肌损伤模型大鼠心脏及肾脏的微血管损伤。