东北农业大学动物医学专业实践教学设计效果分析

本文介绍了东北农业大学动物医学专业实践教学设计的实施情况及效果。东北农业大学动物医学专业建立了以基础课、专业基础课、专业课理论教学为主,课程实验、课程综合实验、课程实习、临床教学实习、毕业生产实习实践教学为辅的理论实践并重的教学体系,重点加强了实践教学。通过几年的建设取得了理想的效果,学生就业率高,并得到了社会的认可,多数家长对动物医学学院的师资队伍、专业设置、实验室建设感到满意。

东北农业大学兽医专业实践教学平台建设效果分析

实践教学平台可为实践教学提供有力的技术支撑,随着科研在高校中的比重不断增加,相关的前沿科技不断地渗透到实践教学中,而传统的实验设计中还存在着内容单一、与毕业设计衔接不够等缺点。本文针对实践教学平台的必要性、建设情况进行了介绍,提出了在已有的课程体系下,多研究方向、多平台的实践教学方法。该方法已经在实践教学的课程设计环节中实施,本文详细讨论了该方法的实施基础和实施办法,并对基于该方法搭建完成的实践平台做出了详细描述。

HIF-1α信号通路对脂多糖诱导鸡巨噬细胞炎症的调节作用研究

【目的】探究鸡巨噬细胞(HD11)在脂多糖(LPS)诱导条件下,缺氧诱导因子-1α(HIF-1α)信号通路和线粒体功能对细胞炎症反应的影响。【方法】试验以HD11细胞为研究对象,分别用不同浓度LPS作用于细胞,培养24 h后检测细胞活力,筛选LPS最佳作用浓度;同时在最佳LPS作用浓度下,筛选LPS最佳作用时间。将HD11细胞分为对照组和模型组,模型组加入最佳作用浓度LPS培养,对照组加等量的完全培养液,按照LPS最佳作用时间培养后,提取细胞总RNA进行转录组测序,并对差异表达基因进行GO功能注释和KEGG通路富集分析。利用实时荧光定量PCR和Western blotting分别检测HIF-1α信号通路相关因子mRNA和蛋白表达量;通过流式细胞术检测线粒体膜电位和活性氧(ROS)水平变化。【结果】LPS诱导的HD11细胞炎症模型中最适条件为1μg/mL LPS培养12 h,以此条件成功建立了细胞炎症模型。与对照组相比,模型组共检测到2063个差异表达基因,其中1319个上调,744个下调。GO功能注释结果显示,差异表达基因显著富集到免疫系统应答、对外部刺激的反应和细胞因子受体结合等过程。KEGG通路富集分析结果显示,差异表达基因显著富集在50条信号通路,主要涉及免疫细胞介导的炎症反应和Toll样受体、核转录因子-κB(NF-κB)、HIF-1α等信号通路。其中有13个显著上调表达的基因集中在HIF-1α相关信号通路,包括Toll样受体4(TLR4)、NF-κB、HIF-1α、血管内皮生长因子(VEGF)基因等。实时荧光定量PCR和Western blotting结果显示,NF-κB p65、HIF-1α、VEGF等mRNA和蛋白表达水平均显著上调(P<0.05)。流式细胞术检测结果显示,与对照组相比,模型组线粒体膜电位极显著下降(P<0.01),ROS水平显著升高(P<0.05)。【结论】成功建立LPS诱导鸡巨噬细胞炎症模型,HIF-1α与NF-κB信号通路相互串扰共同参与LPS诱导的细胞炎症过程。同时,细胞线粒体功能下降,导致ROS生成增多,进而促进HIF-1α的表达,共同加重了炎性反应和代谢紊乱。

东北地区规模化奶牛场牛病毒性腹泻/黏膜病血清学调查

为了解东北地区牛病毒性腹泻/黏膜病病毒(BVDV)的流行情况,本研究采用间接ELISA试验与套式RT-PCR分型检测方法对东北地区19个规模化奶牛场的1 198份血清进行了BVDV的抗体与核酸检测。结果表明,BVDV在东北地区呈散发性流行,抗体阳性率为23.5%,各奶牛场抗体阳性率在0～40%之间;BVDV核酸阳性的奶牛场均包括在抗体阳性的奶牛场中,并且均为BVDV I型。结果提示,东北地区大部分奶牛场中存在BVDV污染,并且可能存在有持续性感染牛,应采取相应的净化措施对该病进行控制。

东北地区猪链球菌对大环内酯类药物耐药机制的研究

采用微量稀释法及双纸片扩散法测定了28株猪链球菌(S.suis)对大环内酯类药物的耐药性和耐药表型,红霉素、阿奇霉素和泰乐菌素耐药率分别为92.8%、92.8%和89.3%,耐药表型以内在型(cMLSB)为主。利用聚合酶链反应(PCR)检测红霉素耐药基因erm和mef,对ermA/B/C分型扩增、克隆、测序,26株菌扩增到ermB基因,16株菌扩增到ermA基因,其中15株同时扩增到ermB和ermA基因,1株未扩增到这两种基因的任一种;28株猪链球菌中均未扩增到ermC和mef基因。16株菌的ermA基因核苷酸序列与GenBank中同源序列同源性为83%～100%,氨基酸序列与参照序列(X03216.1)相比突变点较多,有11株菌在34个位点处同时发生了改变;26株菌的ermB基因核苷酸序列与GenBank中同源序列相似性为98%～100%,氨基酸序列与参照序列(AY183117.1)相比突变点较少,与参照序列完全一致的有7株,其余株仅1～3个氨基酸不同。说明本地区猪链球菌对大环内酯类药物耐药情况很严重,耐药基因为甲基化酶ermA和/或ermB,ermA基因突变点较多,ermB基因相对稳定。

20种燕麦及青贮饲草农艺性状及营养成分分析

为了鉴选出优质的饲用燕麦品种,本试验测定了白城市农科院种植的20个燕麦品种乳熟期的株高、叶长、叶宽、叶片数、茎粗、粗蛋白(CP)、中性洗涤纤维(NDF)、酸性洗涤纤维(ADF)、粗脂肪、粗灰分、碳水化合物、木质素,并采用灰色关联度分析评价方法进行综合评价。结果表明,(1)‘白燕8号’‘Rus25’‘1425’的农艺性状最优,产量最高。(2)营养成分与饲草品质上,供能方面最适宜选育的品种为‘3695’‘3916’‘1279(2014Rus-14)’,适口性方面‘3916’‘3695’‘Ca89’三个品种最佳,‘白燕8号’‘太8-1’‘Rus25’这三种燕麦综合性评价最优,更适合制作饲草。(3)青贮品质上‘Rus25’和‘3916’灰色关联系数最大,与理想指标最接近,且各项指标排名靠前,品质最优秀。(4)结合20个品种在生产性能、营养成分与饲用品质以及青贮营养成分的表现,‘Rus25’综合表现及单项指标表现均处于前列,品质最好。

高脂饮食诱导胰岛素抵抗过程中肝脏能量代谢特征的研究

本研究旨在通过建立胰岛素抵抗全过程的小鼠模型,研究在这个过程中,肝内线粒体功能和能量代谢的变化情况。试验选取60只雄性C57BL6小鼠,随机选取30只饲喂普通维持饲料作为对照组(Con组),另外30只饲喂高脂饲料作为高脂饮食组(HFD组)进行造模,分别于饲喂的第4、6、8、10和12周,各组随机选取6只小鼠进行处理,经胰岛素抵抗评估和病理组织学检查确认成功建立胰岛素抵抗全过程的模型。在第8和12周,采集鼠尾血液,进行葡萄糖耐受试验(glucose tolerance tests,IGTT)和胰岛素耐受试验(insulin tolerance tests,ITTs)。在第4、6、8、10和12周,采集小鼠的血清和肝组织样品进行试验:1)检测空腹血糖和血清含量;2)ELISA法检测肝组织中的Srebp-1c酶、PFK1和COX-Ⅰ含量;3)生化检测血清中的ALT和AST含量;4)Western blot法检测肝组织中的PI3K、Akt、P-Akt、GLUT4、GSK-3β、P-GSK-3β、FOXO1、P-FOXO1、SIRT1、AMPK、P-AMPK、PGC-1α蛋白表达量;5)采用透射电镜、HE染色、油红O染色、PAS染色检测肝病理组织和结构的变化。结果表明:1)12周的高脂日粮引起小鼠肥胖、HOMA-IR增加,油红O染色显示,明显的脂肪沉积,成功诱导小鼠胰岛素抵抗全过程模型;2)胰岛素抵抗过程中,小鼠ALT和AST增加,HE结果显示,明显的脂滴空泡、肝细胞结构紊乱;3)在饲喂高脂日粮的第4周之后,肝胰岛素上游信号开始受到影响;4)与Con-6组相比,HFD-6组小鼠肝内的GLUT4蛋白表达量和P-FOXO1/FOXO1比值、PFK1含量显著下降(P<0.01);与Con-4组相比,HFD-4组小鼠肝内的GSK-3β磷酸化、Srebp-1c酶水平逐渐降低(P<0.05);PAS结果显示从第8周开始,HFD组小鼠肝细胞内糖原含量减少;5)与Con-4组相比,HFD-4组小鼠肝的AMPK、P-AMPK、SIRT1含量显著降低(P<0.01和P<0.001);6)HFD组小鼠肝中Mfn2在第10周出现上升,Drp1蛋白的表达呈现先降低后升高的趋势;7)与HFD-6组相比,HFD-6组小鼠肝中的PINK1和Parkin蛋白明显下降(P<0.05)。综上表明,肝作为代谢的主要器官,在饲喂60%高脂饲料后,会发生选择性胰岛素抵抗,在抵抗后整体上能量分解代谢减弱、线粒体损伤增强,而清除损伤线粒体的自噬功能却减弱,另外在第8、10周时出现了短暂的线粒体生物发生与融合增强现象,说明由于肝能量缺乏导致了短暂的代偿作用。本研究从发生全过程的角度阐释肝胰岛素抵抗中的能量代谢特征和规律,为进一步深入研究营养过剩影响细胞能量代谢的机制提供参考。

如何利用现代教育技术提高兽医学教学质量

就如何合理利用现代教育技术提高兽医学教学质量进行了相关分析与思考,提出了利用现代教育技术提高兽医学教学质量的两种途径。

农业院校兽医专业实践教学与专业人才培养的分析

通过分析农业院校兽医专业实践教学与专业人才培养情况,根据兽医专业的特点,在实践教学中有必要增加实验课教学课时比例,提高学生实践动手能力;提前谋划,让学生了解行业发展实际需求;设计综合实验课程,形成实战训练项目;抓好教学实习环节,锻炼学生的临床实战经验。只有突出上述几方面的建设,才能培养出具有实践能力强、容易就业、适应社会发展的人才。

浅析我国农业信息化现状及对策

总结了我国农业信息化发展现状,分析了我国农业信息化存在的问题,并提出了积极推进农业信息服务体系建设、加强农业信息化网络建设、加强农业数据库建设、加强农业信息队伍建设、加强信息化应用的引导、带动农民应用信息服务的对策。

犬支气管败血波氏杆菌的分离鉴定和灭活疫苗初步应用

某实验比格犬养殖场部分犬出现咳喘和口鼻流血等症状,严重者死亡。为了调查发病原因并采取针对性措施,本试验采集临床发病犬的鼻腔拭子、死亡犬的肺脏和气管分泌物等,进行细菌分离培养;通过形态观察、革兰染色、16S rRNA和ptxA基因测序,对分离细菌进行鉴定,并对部分菌株进行药敏试验。选取1株致病性强的分离菌株制备支气管败血波氏杆菌蜂胶佐剂灭活疫苗,进行免疫保护试验,分别采用1.0和0.5 mL剂量免疫小鼠,免疫后21 d攻毒;对养殖场临床发病犬和同群健康犬进行紧急免疫接种,剂量为4月龄以上犬每只1.0 mL、2~4月龄犬每只0.5 mL。对临床病死犬和攻毒死亡小鼠进行组织病理学观察。结果显示,从临床发病犬的鼻腔拭子、肺脏、气管和鼻腔黏液状分泌物共分离鉴定获得30株支气管败血波氏杆菌。药敏试验结果显示,临床分离菌株对环丙沙星和米诺环素高度敏感,但临床治疗效果不明显。免疫保护试验中,1.0 mL和0.5 mL蜂胶佐剂灭活疫苗对小鼠的保护率均可达100%;紧急免疫接种后,临床发病犬逐渐恢复,同群健康犬无新发病个体,疫苗免疫效果良好。组织病理学观察发现,临床病死犬和攻毒死亡小鼠均表现典型的支气管肺炎和肺气肿病变,肝细胞呈水泡样变。结果表明,支气管败血波氏杆菌是导致该场部分犬出现呼吸道疾病的病原体,蜂胶灭活疫苗可有效防控实验用比格犬支气管败血波氏杆菌感染。

浅析中兽医学对母猪繁殖障碍综合征的认识;防治

母猪繁殖障碍综合征对母猪本身及幼崽的产出质量有着较为直接的影响,现对引起母猪繁殖障碍综合征的原因进行了总结及分析,并从中延伸出对其病症的深刻认识,运用中兽医学的药物机理对综合征进行防治措施研究,以期为提高养殖场的经济利益提供参考意见。

动物医学仪器的干扰分析

随着动物诊疗水平的提高,各种医学仪器不断地被应用在动物疾病诊断和诊疗中。但是动物诊疗的环境大多十分简陋,投资较少,特别是个体动物诊所,虽然能够购入一些医学仪器,但由于忽视环境的干扰因素,得出的结果往往是不准确的,或者甚至是错误的,或者无法进行测量。

熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用研究

【目的】研究熟地黄多糖对环磷酰胺诱导的免疫抑制小鼠的免疫调节作用,为熟地黄多糖用于临床治疗免疫低下疾病或开发相关保健食品提供科学依据。【方法】选用36只昆明系小鼠,随机分为6组:空白对照组、免疫抑制模型组、黄芪多糖组及熟地黄多糖低、中、高(分别灌胃熟地黄多糖50、100、200 mg/kg)剂量组(PRRPL、PRRPM、PRRPH),每组6只。除空白对照组外,其余各组小鼠均腹腔注射80 mg/kg环磷酰胺,建立免疫抑制模型。造模后各组小鼠分别灌胃相应药物,1次/d,连续15 d,测定小鼠体重、腹腔巨噬细胞吞噬能力、免疫器官系数、脾淋巴细胞增殖及细胞周期、血清细胞因子含量,观察脾脏和胸腺组织形态学、肠道派氏节数目等免疫指标。【结果】与空白对照组相比,模型组脾脏指数极显著升高(P<0.01),脾脏红髓、白髓界限不清,脾淋巴细胞数量减少;胸腺指数降低,皮质、髓质不清,结构破坏;脾淋巴细胞增殖能力、小鼠腹腔巨噬细胞吞噬能力及血清白细胞介素1β(IL-1β)、IL-6、γ-干扰素(INF-γ)水平均显著或极显著降低(P<0.05;P<0.01);脾淋巴细胞滞留在G0/G1期。与模型组相比,熟地黄多糖能极显著降低小鼠的脾脏指数(P<0.01),缓解环磷酰胺造成的脾脏组织损坏,熟地黄多糖各剂量组对脂多糖(LPS)诱导的脾淋巴细胞增殖具有极显著的促进作用(P<0.01),熟地黄多糖各剂量组能显著或极显著提高免疫抑制小鼠血清IL-1β、IL-6、肿瘤坏死因子α(TNF-α)、INF-γ水平(P<0.05;P<0.01),缓解淋巴细胞周期滞留,且高剂量组熟地黄多糖能显著提高小鼠腹腔巨噬细胞吞噬功能(P<0.05)。造模前后及熟地黄多糖对肠道派氏结数量均无显著影响(P>0.05)。【结论】熟地黄多糖能提高免疫抑制小鼠的免疫功能,可用于治疗免疫低下类疾病药物和保健品的开发。

动物医学仪器的干扰屏蔽

随着科学技术的发展,越来越多的检查仪器被使用在动物临床上。但在使用时会存在很多干扰,常常影响检测的准确性,甚至得出错误的结论。防止对医学仪器的干扰是目前动物医院使用仪器的难题,其实防止干扰最有效的措施就是屏蔽。

邻苯二甲酸二-2-乙基己酯通过ROS/PTEN/PI3K/AKT轴诱导HD11细胞凋亡和程序性坏死

旨在探究邻苯二甲酸二-2-乙基己酯[di(2-ethylhexyl)phthalate,(DEHP)]暴露通过ROS/PTEN/PI3K/AKT通路诱导细胞凋亡和程序性坏死的作用机制。本试验以HD11细胞为研究对象,设置对照组(C组)、30μmol·L^(-1)DEHP组(L组)、60μmol·L^(-1)DEHP组(M组)和90μmol·L^(-1)DEHP组(H组)。用不同浓度的DEHP处理HD11细胞24 h后,采用CCK-8检测细胞存活情况,生化试剂盒检测氧化应激指标,包括活性氧(ROS)水平,丙二醛(MDA)含量与总抗氧化能力(T-AOC)水平,以及总超氧化物歧化酶(T-SOD)和谷胱甘肽过氧化物酶(GSH-PX)活性。采用AO/EB染色和流式细胞术检测凋亡率和坏死率,荧光定量RT-PCR和Western blot法检测PTEN/PI3K/AKT通路基因及凋亡与坏死相关基因的mRNA和蛋白表达,结果表明,与对照组相比,DEHP暴露可显著抑制HD11细胞的活力,且半数抑制浓度(IC_(50))为180.644μmol·L^(-1)。与对照组相比,L、M、H DEHP组AO/EB染色和流式细胞术结果显示DEHP暴露导致HD11细胞具有典型的凋亡和坏死特征。与对照组相比,L、M、H DEHP组ROS水平呈现上升趋势(P<0.01),L、M、H DEHP组MDA含量显著升高(P<0.01),而T-AOC水平显著降低(P<0.01),T-SOD和GSH-PX活性显著降低(P<0.01),提示DEHP暴露诱导HD11细胞发生氧化应激损伤。此外,与对照组相比,DEHP暴露上调了PTEN/Bax/Caspase-3/Caspase-9/RIPK1/RIPK3/MLKL的mRNA和蛋白表达(P<0.01),而PI3K/AKT/BCL-2的mRNA和蛋白表达显著降低(P<0.01),提示DEHP暴露通过PTEN/PI3K/AKT信号通路诱导HD11细胞凋亡和程序性坏死。综上所述,DEHP可以通过调控ROS/PTEN/PI3K/AKT轴诱导HD11细胞凋亡和程序性坏死,并存在明显的剂量-效应关系。

辅酶Q10改善LPS诱导小鼠急性肺损伤的效应分析

本研究旨在探究辅酶Q10(coenzyme Q10,CoQ10)对脂多糖(lipopolysaccharide,LPS)致小鼠急性肺损伤的保护作用及机制。选取8周龄的健康雄性C57BL/6小鼠72只,随机均分为6组:空白对照组(CON组,100μL玉米油)、CoQ10干预组(CHQ组,50 mg·kg^(-1) CoQ10)、模型组(LPS组,100μL玉米油+LPS)、低剂量CoQ10处理组(LDQ组,2 mg·kg^(-1) CoQ10+LPS)、中剂量CoQ10处理组(LMQ组,10 mg·kg^(-1) CoQ10+LPS)和高剂量CoQ10处理组(LHQ组,50 mg·kg^(-1) CoQ10+LPS)。通过灌胃的方式连续给予小鼠不同剂量的CoQ10或玉米油14 d,然后鼻内滴入50μL 1 mg·mL^(-1) LPS溶液建立小鼠急性肺损伤模型。24 h后,处死小鼠,摘取左肺称重并烘干,计算肺组织湿干质量比(W/D);检测肺泡灌洗液(BALF)蛋白浓度、肺组织丙二醛(MDA)含量、活性氧(ROS)浓度、总超氧化物歧化酶(SOD)活性和还原型谷胱甘肽(GSH)水平;苏木素伊红(HE)染色观察肺组织病理变化;TUNEL染色法检测肺组织细胞凋亡率;RT-PCR技术检测线粒体细胞凋亡途径相关基因表达;Western blot法检测肺组织MKP-1/Nrf2通路相关蛋白表达。结果表明,与CON组相比,LPS组小鼠肺组织W/D和BALF蛋白浓度极显著升高(P<0.01);肺组织出血、肺泡壁增厚、炎性细胞浸润;MDA和ROS含量极显著升高(P<0.01),SOD活性和GSH含量极显著降低(P<0.01);TUNEL凋亡率和线粒体凋亡途径相关基因表达均极显著升高(P<0.01);MKP-1和Nrf2蛋白表达极显著降低(P<0.01)。低剂量、中剂量和高剂量CoQ10均显著或极显著地逆转了LPS诱导的上述指标的变化(P<0.05,P<0.01),且高剂量CoQ10效果更显著(P<0.01)。此外,CHQ组与CON组相比,所有指标均无显著性差异(P>0.05)。结果提示,CoQ10可通过激活MKP-1/Nrf2信号通路,增强小鼠抗氧化应激能力,减少ROS产生,抑制线粒体细胞凋亡,从而改善LPS诱导的小鼠急性肺损伤。