PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌的研究

近年来,金黄色葡萄球菌引起的食品安全事件频发,这就需要建立一种快速准确地检测食品中金黄色葡萄球菌的方法。传统方法检测食品中金黄色葡萄球菌活菌存在很多缺点。由于细胞死亡后其DNA依然能够存活许久,所以传统方法不能有效区分DNA来自死菌还是活菌。通过荧光染料PMA与快速检测技术LAMP相结合的方法快速、灵敏的检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌,并对死/活菌进行区分。根据金黄色葡萄球菌nuc基因设计引物,并对LAMP反应体系及PMA-LAMP方法进行优化,同时优化了灭菌乳中提取DNA的方法。在纯培养的金黄色葡萄球菌中,PMA-LAMP方法检测灵敏度为3.2CFU/mL,PMA-PCR方法的检测灵敏度为3.2×102CFU/mL;对人工污染灭菌乳中的金黄色葡萄球,PMA-LAMP方法检测灵敏度为5×101CFU/mL,而PMA-PCR方法检测灵敏度为5×103CFU/mL。整个反应需要大约6h,说明PMA-LAMP方法检测灭菌乳中金黄色葡萄球菌特异性强、灵敏度高、时间短且操作简便,有望成为快速检测金黄色葡萄球菌活菌的新方法。

一株降胆固醇乳酸菌的筛选及其在模拟消化环境活性的研究

通过对来自实验室保藏及分离自西藏地区传统乳制品中的25株乳酸菌体外降胆固醇能力进行比较,筛选出一株降胆固醇能力相对较强的植物乳杆菌TD109,并通过菌落计数,测定了其在模拟消化环境中的耐受性。结果表明:植物乳杆菌TD109的胆固醇脱除率可达47.89%;在pH值为3.0的条件下处理3 h,活菌数可达10~8mL^(-1)以上;在含有1%胆盐的培养基中处理4 h后存活率可达24.06%;在7 g/100 mL的高盐浓度下,菌落总数可达到10~7 cfu/mL以上;并且能够通过胃的消化,耐受肠道环境,在人工胃液、人工肠液分别处理3 h和8 h之后,存活率分别可达13.41%和47.66%,能够顺利定植胃肠道。所以,该菌可用作降胆固醇的潜在益生菌。

一株植物乳杆菌的鉴定及其抑菌特性研究

从内蒙古传统发酵乳制品中分离筛选到1株具有抑菌活性的乳酸菌。通过API生化反应和16S rDNA、16S-23S rDNA间隔(IGS)序列同源性分析,鉴定该乳酸菌为植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum),并命名为植物乳杆菌NDC 75017。利用杯碟法,通过蛋白酶K和胰蛋白酶实验,确定该乳酸菌产生的抑菌物质为蛋白质类。理化性质分析表明该抑菌物质具有良好的热稳定性,100℃处理120 min后仍有较好的抑菌活性;其抑菌活性最适pH值范围为2～4;通过排除有机酸、过氧化氢的干扰,该菌的发酵上清液对单增李斯特菌、藤黄微球菌、蜡样芽孢杆菌及福氏志贺氏菌的生长具有良好的抑制作用。

一株植物乳杆菌的粘附能力及免疫调节作用研究

从西藏地区传统乳制品中分离得到的4株乳杆菌中筛选出一株粘附能力较强的植物乳杆菌TD109,选取不同剂量的菌悬液给小鼠灌服,于30 d后测定相关的免疫指标。实验结果表明:灌服植物乳杆菌TD109后,小鼠的胸腺指数由对照组的2.46提高到了高剂量组的2.93,脾脏指数由对照组的2.84提高到高剂量组的3.54;IL-2含量由对照组的126.01 ng/mL提高到高剂量组的295.08ng/mL、IFN-γ水平由对照组的122.66 ng/mL提高到高剂量组的149.81 ng/mL,TNF-α质量浓度由对照组的113.30 ng/mL降低到高剂量组的72.96ng/mL;同时MTT实验的结果也从对照组的0.994提高到高剂量组的1.868。初步证明了植物乳杆菌TD109对机体免疫能力有增强的作用。

一株植物乳杆菌高密度培养的研究

通过单因素实验、Plackett-Burman法、最陡爬坡试验对分离自内蒙古传统发酵乳制品中高产γ-氨基丁酸的植物乳杆菌NDC75017培养基成分及培养条件进行优化研究。确定影响菌体生长的显著因素为葡萄糖、硫酸锰、柠檬酸氢二铵。利用Box-Behnken设计确定了植物乳杆菌NDC 75017的增殖培养基配方。结果表明,菌体在最优条件下进行培养,活菌数可达6.48×1010mL-1。细胞干重可达3.93 g/L。

气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇的研究

建立了气相色谱-质谱法检测牛初乳中β-雌二醇质量浓度的方法.牛初乳经过β-葡萄糖醛酸酶/芳香基硫酸酯酶水解后,经过乙腈超声提取、沉淀蛋白,正己烷去除脂肪,HLB固相萃取柱富集净化后,氮气流下吹干,N,O-双（三甲基硅烷基）三氟乙酰胺（BSTFA）衍生,N-甲基-N-三甲基硅基三氟乙酰胺（TMCS）辅助催化,气相色谱-质谱（GC-MS）对衍生物进行检测分析.β-雌二醇质量浓度在5～200 μg/L之间线性关系良好,相关系数（R2）大于0.999;加标回收率在85.13％～104.78％之间,相对标准偏差在4.74％～5.97％之间.该方法操作简便、灵敏,精密度好,适用于牛初乳中β-雌二醇的测定.

乳酸菌免疫调节作用的研究进展

乳酸菌是一类对人体具有多种益生功能的微生物,因其具有良好的发酵特性,目前广泛应用于发酵食品中。在乳酸菌众多益生功能中,其对机体免疫系统的调节作用是人们关注的热点之一。本文综述了乳酸菌对免疫系统的调节作用,主要从乳酸菌对机体的非特异性和特异性免疫系统的调节作用出发,论述其相关的研究进展,最后展望了乳酸菌在免疫调节方面的应用前景。

嗜酸乳杆菌NCFM对IL-6ST调控作用研究

研究了嗜酸乳杆菌NCFM作用于Caco-2和灌服小鼠后对免疫相关细胞因子白细胞介素6受体(IL-6ST)表达的影响,确定其免疫调节作用。在Caco-2细胞与嗜酸乳杆菌NCFM作用后,采用Real Time PCR方法检测il-6st基因的表达,il-6st基因的表达量呈现下降的趋势;嗜酸乳杆菌NCFM灌服小鼠后,肠道上皮细胞中il-6st基因短暂性上调后下降的趋势。通过特异性抑制剂PDTC证明il-6st基因的表达受到p38 MAPK途径的调控。因此,嗜酸乳杆菌NCFM能够诱导细胞因子il-6st短暂性的表达,进一步增加了其具有免疫调节作用的证据。

乳酸菌离心工艺条件优化的研究

优化了嗜酸乳杆菌发酵液的离心力、离心时间和离心温度等离心参数。最终确定最佳离心工艺条件为:离心力6000g,离心时间30min,离心温度为4℃。在此条件下,嗜酸乳杆菌KLDS1.8701的离心存活率可达95.37%。

嗜酸乳杆菌NCFM黏附定植能力的研究

采用实时定量(Real-time)PCR的方法对嗜酸乳杆菌NCFM在小鼠肠道中的定植情况进行了评价。通过研究发现,实时定量(Real-time)PCR用来菌数的评估具有非常好的线性关系和稳定性。小鼠灌胃一周的过程中,在小鼠的十二指肠、回肠、空肠、盲肠、结肠和粪便中菌体的数量并没有出现数量级上的增长或减少,说明我们灌胃的菌体浓度适当,并没有引起小鼠体内的菌群失调。而在灌胃第1 d,基本上各部分的肠组织和粪便中菌体的数量都有增加,说明灌胃初期菌体在肠道中有较好的定植。而第3、5和7 d小鼠肠道和粪便中的菌体数量上下波动,但并没有显著地增加或减少,说明小鼠体内的菌群数量达到了一个平衡,并不会因为持续灌胃就打破这个平衡。因此,嗜酸乳杆菌NCFM具有良好的定植能力。

PCR技术结合试纸条法快速检测乳粉中的克鲁诺杆菌

建立了一种PCR结合试纸条的方式快速检测婴幼儿奶粉中的克罗诺杆菌的方法,利用克鲁诺杆菌的omp A基因进行PCR特异性检测,优化并建立了横向流动试纸条法特异性捕获PCR扩增产物,从而快速检测婴幼儿奶粉中的克鲁诺杆菌。结果表明,PCR技术结合试纸条方法针对7株菌进行特异性实验,特异性良好,在纯培养物中的检测限为5.6×10~1mL^(-1),人工污染婴幼儿配方奶粉中的克鲁诺杆菌的检测限为5.6×10~2g^(-1)。该方法具有特异性强,灵敏度高,操作简单,快捷,在致病菌的快速检测中具有潜在的研究价值。

缺铁乳铁蛋白体外抗HBsAg分泌的研究

研究缺铁乳铁蛋白体外抑制HBsAg作用,为乳铁蛋白应用于临床治疗乙肝病毒感染提供理论和实验依据。以天然HBV感染HepG2细胞为模型,通过应用ELISA法测定细胞上清中的HBsAg水平来检测缺铁乳铁蛋白抗HBsAg分泌效果,并用MTT法进行缺铁乳铁蛋白对HepG2细胞毒性研究。结果表明,缺铁乳铁蛋白对细胞的半数中毒剂量(TD50)为8.312 g/L,最大无毒剂量(TD0)为1.5 g/L;用乙肝病毒对HepG2细胞进行感染,分别加入不同浓度的缺铁乳铁蛋白,24,36,48 h测定HBsAg水平,各实验组蛋白对HBsAg分泌几乎没有抑制作用。当HepG2细胞感染乙肝病毒后,缺铁乳铁蛋白不能抑制HBsAg分泌,乳铁蛋白抗HBsAg分泌与其铁饱和度有关,但其机理有待进一步深入研究。

气相色谱-质谱联用法检测牛乳中乙草胺的研究

建立了牛乳中残留农药乙草胺的气相色谱-质谱联用（GC—Ms）检测方法。牛乳样品经乙腈振荡提取，氮吹浓缩，基质分散剂（基质分散剂由无水硫酸镁、PSA和Cleanert PestiCarbX；墨化炭黑组成）净化，气相色谱-质谱联用仪检测，外标法定量。结果表明，乙草胺在5-300μg／L质量浓度范围内线性关系良好，相关系数（R^2）为0．9991，平均回收率范围为93．42％-98．82％，相对标准偏差范围为2．00％-2．61％，乙草胺在4℃条件下30d内稳定性良好。该方法简单、灵敏、实用性强，适用于牛乳中乙草胺的检测分析。

植物乳杆菌NDC 75017的降胆固醇作用

植物乳杆菌NDC 75017分离自中国内蒙古传统发酵乳制品。本实验对其体外环境耐受性及其降胆固醇作用进行研究。采用活菌计数法检测植物乳杆菌NDC 75017在pH 2.0～3.0的酸性环境、胆盐质量浓度0.3g/100mL、NaCl质量浓度0～7g/100mL以及模拟人工消化液环境下的耐受情况;同时以邻苯二甲醛法测定其体外降胆固醇能力。结果表明:植物乳杆菌NDC 75017可耐受pH3.0及0.3g/100mL胆盐环境;在7g/100mL的高盐质量浓度条件活菌数仍可达108CFU/mL;可以通过胃进入肠道而保持活性,在肠道处理8h后存活率为58.73%。体外降胆固醇实验测得细菌发酵上清液、菌体洗涤液和细胞破碎液中的胆固醇脱除率分别为16.43%、26.35%和32.87%。植物乳杆菌NDC 75017环境耐受能力良好,具有体外降胆固醇作用,该菌株可以作为降胆固醇的潜在益生菌。

原料乳中金黄色葡萄球菌生长预测模型的建立

研究冬季、春季和夏季原料乳中金黄色葡萄球菌在15、25、37℃条件下的生长情况,并利用Logistic模型和Gompertz模型对生长数据进行建模。3个季节的原料乳中,金黄色葡萄球菌的Gompertz模型方根误差(RMSE)分别为0.0936(冬)、0.1057(春)和0.1032(夏),而Logistic模型相应的参数值为0.1498(冬)、0.1926(春)和0.1857(夏)。通过模型参数比较表明,Gompertz模型比Logistic模型更能准确的描述原料乳中金黄色葡萄球菌的生长情况;同时,建立以温度为自变量的平方根模型,以此来预测原料乳中金黄色葡萄球菌的生长速率。

植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)NDC75017产γ-氨基丁酸的影响因素及其代谢机制

为探索植物乳杆菌(Lactobacillus plantarum)NDC75017产γ-氨基丁酸(gamma-aminobutyric acid,GABA)的影响因素及相关代谢机制,首先采用响应面法,对菌体积累GABA的发酵条件进行优化。其次,分别采用高效液相色谱和实时荧光定量反转录聚合酶链式反应(real-time reverse transcript polymerase chain reaction)测定了不同时间点GABA产量和谷氨酸脱羧酶(glutamic acid decarboxylase,GAD)编码基因gad B的相对表达量。L.plantarum NDC75017发酵过程中产GABA的最佳底物(谷氨酸钠)、辅酶(5’-磷酸吡哆醛)的添加量和发酵初始p H值分别为68.03 mmol/L、20.92μmol/L和4.65。底物与辅酶之间、辅酶与发酵初始p H值之间的交互作用能够显著地影响GABA的积累(P<0.05)。发酵48 h内,基因gad B表达量呈现先升高后下降的趋势,与GABA产量的变化趋势并不完全一致。上述结果表明:底物、辅酶和发酵初始p H值以及它们之间的交互作用是影响L.plantarum NDC75017产生GABA的关键因素。同时GABA的积累不仅受到GAD和gadB的影响,其他与GABA支路(GABA shunt)相关的酶和基因也参与了GABA的代谢。

环介导等温扩增法快速检测乳中阪崎肠杆菌

利用环介导等温扩增方法的快速、简便等优点,建立一种检测乳中阪崎肠杆菌的方法。以阪崎肠杆菌的OmpA序列为靶基因,设计特异性引物。优化并建立LAMP检测乳中阪崎肠杆菌的方法。结果表明,LAMP检测阪崎肠杆菌纯培养物的灵敏度为3.7×101cfu/mL,其灵敏度是PCR方法的10倍。人工污染阪崎肠杆菌灭菌乳的检测限为4.3×101cfu/mL。对23株致病菌进行特异性实验,特异性良好。该方法具有特异性强、灵敏度高、设备简便、耗时短等优点,在食品检测中具有良好的应用前景。

三酰甘油Sn-2位上棕榈酸生理功能及研究概况

棕榈酸的代谢及生理功能与在三酰甘油上结合的位置有关。在代谢过程中通常是1,3位的脂肪酸首先被胃酶和胰酯酶水解下来形成2-棕榈酸单甘酯和游离脂肪酸,2-棕榈酸单甘酯可以直接被人体吸收。母乳脂肪酸的20%～25%是棕榈酸,而且70%的棕榈酸在Sn-2位置上被脂化;相反,存于植物油和非牛奶脂肪内的棕榈酸主要在Sn-1和Sn-3的位置上脂化,而结合在1,3位置上的棕榈酸不易被机体吸收,容易形成不溶性的皂化钙随粪便排出体外,导致能量和钙的流失。

原料乳中产β-内酰胺酶菌株的快速筛选和鉴定

利用青霉素-藤黄微球菌-TSA培养基建立一种快速筛选原料乳中产β-内酰胺酶细菌的方法,该筛选方法比常规方法更加便捷,易于观察,并且具有很高的特异性分离鉴别能力,同时通过细菌16S rDNA序列比对方法来鉴定所分离的产酶菌的种属。结果表明,原料乳中存在产β-内酰胺酶的菌株,主要产酶菌为大肠杆菌。

叶酸检测方法的研究现状及发展趋势

分析了国内外关于叶酸的各种检测方法,包括比色法、薄层层析法、微生物法、同位素放射免疫法、色谱法、离子捕获法等检测方法,以及对各种方法的原理、检测对象和优缺点进行了比较分析,并且对食品中低质量分数叶酸检测方法的发展趋势进行了讨论。