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农杆菌介导大豆子叶节转化系统的优化
被引量:
23
1
作者
李文霞
宁海龙
+1 位作者
吕文河
李文滨
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期971-977,共7页
【目的】研究影响大豆(Glycine maxL.)子叶节外植体遗传转化的因素。【方法】以农杆菌转化系统为平台,用直接筛选法和延迟筛选法确定卡那霉素的筛选方法和浓度,以GUS基因的瞬时表达计算子叶节区GUS阳性率。【结果】延迟7d进行Km选择、...
【目的】研究影响大豆(Glycine maxL.)子叶节外植体遗传转化的因素。【方法】以农杆菌转化系统为平台,用直接筛选法和延迟筛选法确定卡那霉素的筛选方法和浓度,以GUS基因的瞬时表达计算子叶节区GUS阳性率。【结果】延迟7d进行Km选择、筛选压力为75mg·L-1时选择效果最好;菌株培养阶段和侵染浓度分别在OD600为0.6和0.5时子叶节区GUS阳性率最高;黑农35、绥农14和合丰35为易感的大豆基因型;农杆菌菌株EHA101对大豆的转化能力好于LBA4404和AGL1;共培养培养基中添加的硫醇类化合物对T-DNA的转移有极强的影响效应。【结论】本实验方法可以优化农杆菌介导的大豆子叶节转化系统。
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关键词
大豆
子叶节
农杆菌
转化系统
T-DNA
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职称材料
利用农杆菌介导法转化大豆子叶节的影响因素研究
被引量:
12
2
作者
陈李淼
田星星
+3 位作者
单志慧
沙爱华
李文滨
周新安
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期17-23,共7页
以3个大豆品种为材料,采用GUS瞬时表达的方法,对适合于大豆子叶节和胚尖转化的基因型进行筛选,结果表明:适合大豆子叶节转化的品种为东农50,适合胚尖转化的品种为黑农41。在子叶节转化系统中,摸索了农杆菌侵染浓度与侵染时间的最佳配比...
以3个大豆品种为材料,采用GUS瞬时表达的方法,对适合于大豆子叶节和胚尖转化的基因型进行筛选,结果表明:适合大豆子叶节转化的品种为东农50,适合胚尖转化的品种为黑农41。在子叶节转化系统中,摸索了农杆菌侵染浓度与侵染时间的最佳配比组合、乙酰丁香酮浓度和超声波辅助处理对大豆转化效率的影响。优化后的条件为:农杆菌侵染的浓度OD600=0.6,侵染时间30~40 min,乙酰丁香酮浓度200μmol.L-1,超声波辅助转化时间5 s。在上述条件下,成功获得了转基因植株,转化效率为2.3%。
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关键词
子叶节
胚尖
基因型
侵染浓度
侵染时间
乙酰丁香酮
超声波
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职称材料
来源于嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802的类膨胀素基因鉴定及功能探究
3
作者
顾源
寻子琦
+3 位作者
郑菲
涂涛
姚斌
罗会颖
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第10期172-181,共10页
挖掘新颖的类膨胀素基因,丰富类膨胀素基因资源,探究其功能,加深我们对类膨胀素及其作用机制的认识,促进其工业应用。通过RT-PCR的方法从嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802中克隆得到了一个1 196 bp的类膨胀素基因Tlexlx1,并与...
挖掘新颖的类膨胀素基因,丰富类膨胀素基因资源,探究其功能,加深我们对类膨胀素及其作用机制的认识,促进其工业应用。通过RT-PCR的方法从嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802中克隆得到了一个1 196 bp的类膨胀素基因Tlexlx1,并与大多数真菌来源的膨胀素相比,Tl EXLX1缺少一个N端的CBM结构域。Tl EXLX1与来源于Penicilliopsis zonata的假定蛋白ASPZODRAFT_140583具有最高的序列相似性81%,与Penicillium digitatum Pd1来源的Expansin-like protein 1相似性为56%。同时构建野生型Tl EXLX1和含有Tl SWO1的N端CBM区的突变型CBM-Tl EXLX1重组质粒并在毕赤酵母中表达纯化,并对其基本性质进行分析。该基因含有1个内含子(83 bp),编码370个氨基酸和一个终止密码子。Tl EXLX1推导氨基酸序列包括一个22个氨基酸的N端信号肽序列,一个类GH45结构域和一个类膨胀素结构域。结果表明,重组蛋白Tl EXLX1和融合蛋白CBMTl EXLX1具有较高的葡聚糖酶活性(地衣多糖:7.2 U/mg和17.2 U/mg;大麦葡聚糖:4.4 U/mg和9.4 U/mg)和微弱的微晶纤维素水解活性。以地衣多糖为底物时,二者的最适作用温度和pH一致(60℃和6.0)。Tl EXLX1可以破坏微晶纤维素整齐光滑的表面结构,与商业纤维素酶有一定的协同效果。获得新型的类膨胀素蛋白,有一定的水解活性,在木质纤维素降解等工业中存在潜在的应用价值。
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关键词
类膨胀素
TALAROMYCES
leycettanus
JCM12802
基因克隆
异源表达
CBM融合蛋白
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职称材料
题名
农杆菌介导大豆子叶节转化系统的优化
被引量:
23
1
作者
李文霞
宁海龙
吕文河
李文滨
机构
东北农业大学
农学院
东北农业大学
出处
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008年第4期971-977,共7页
基金
黑龙江省科技攻关项目(GB04B101)
文摘
【目的】研究影响大豆(Glycine maxL.)子叶节外植体遗传转化的因素。【方法】以农杆菌转化系统为平台,用直接筛选法和延迟筛选法确定卡那霉素的筛选方法和浓度,以GUS基因的瞬时表达计算子叶节区GUS阳性率。【结果】延迟7d进行Km选择、筛选压力为75mg·L-1时选择效果最好;菌株培养阶段和侵染浓度分别在OD600为0.6和0.5时子叶节区GUS阳性率最高;黑农35、绥农14和合丰35为易感的大豆基因型;农杆菌菌株EHA101对大豆的转化能力好于LBA4404和AGL1;共培养培养基中添加的硫醇类化合物对T-DNA的转移有极强的影响效应。【结论】本实验方法可以优化农杆菌介导的大豆子叶节转化系统。
关键词
大豆
子叶节
农杆菌
转化系统
T-DNA
Keywords
Soybean
Cotyledonary node
Agrobacterium
Transformation system
Transfer-DNA
分类号
S565.1 [农业科学—作物学]
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职称材料
题名
利用农杆菌介导法转化大豆子叶节的影响因素研究
被引量:
12
2
作者
陈李淼
田星星
单志慧
沙爱华
李文滨
周新安
机构
中国
农业
科学院油料作物研究所
农业
部油料作物
生物学
重点
开放
实验室
东北农业大学国家教育部大豆生物学重点实验室
出处
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012年第1期17-23,共7页
基金
转基因生物新品种培育重大专项(2008ZX08004-005)
中国农业科学院公益性院所科研基金(1610172011005)
文摘
以3个大豆品种为材料,采用GUS瞬时表达的方法,对适合于大豆子叶节和胚尖转化的基因型进行筛选,结果表明:适合大豆子叶节转化的品种为东农50,适合胚尖转化的品种为黑农41。在子叶节转化系统中,摸索了农杆菌侵染浓度与侵染时间的最佳配比组合、乙酰丁香酮浓度和超声波辅助处理对大豆转化效率的影响。优化后的条件为:农杆菌侵染的浓度OD600=0.6,侵染时间30~40 min,乙酰丁香酮浓度200μmol.L-1,超声波辅助转化时间5 s。在上述条件下,成功获得了转基因植株,转化效率为2.3%。
关键词
子叶节
胚尖
基因型
侵染浓度
侵染时间
乙酰丁香酮
超声波
Keywords
Cotyledonary node
Embryonic tip
Genotype
A.tumefacines concentration
Infection time
Acetosyringone
Sonication
分类号
S565.1 [农业科学—作物学]
下载PDF
职称材料
题名
来源于嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802的类膨胀素基因鉴定及功能探究
3
作者
顾源
寻子琦
郑菲
涂涛
姚斌
罗会颖
机构
中国
农业
科学院饲料研究所
东北农业大学国家教育部大豆生物学重点实验室
出处
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018年第10期172-181,共10页
基金
中国农业科学院基本科研业务费专项(Y2017JC31)
文摘
挖掘新颖的类膨胀素基因,丰富类膨胀素基因资源,探究其功能,加深我们对类膨胀素及其作用机制的认识,促进其工业应用。通过RT-PCR的方法从嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802中克隆得到了一个1 196 bp的类膨胀素基因Tlexlx1,并与大多数真菌来源的膨胀素相比,Tl EXLX1缺少一个N端的CBM结构域。Tl EXLX1与来源于Penicilliopsis zonata的假定蛋白ASPZODRAFT_140583具有最高的序列相似性81%,与Penicillium digitatum Pd1来源的Expansin-like protein 1相似性为56%。同时构建野生型Tl EXLX1和含有Tl SWO1的N端CBM区的突变型CBM-Tl EXLX1重组质粒并在毕赤酵母中表达纯化,并对其基本性质进行分析。该基因含有1个内含子(83 bp),编码370个氨基酸和一个终止密码子。Tl EXLX1推导氨基酸序列包括一个22个氨基酸的N端信号肽序列,一个类GH45结构域和一个类膨胀素结构域。结果表明,重组蛋白Tl EXLX1和融合蛋白CBMTl EXLX1具有较高的葡聚糖酶活性(地衣多糖:7.2 U/mg和17.2 U/mg;大麦葡聚糖:4.4 U/mg和9.4 U/mg)和微弱的微晶纤维素水解活性。以地衣多糖为底物时,二者的最适作用温度和pH一致(60℃和6.0)。Tl EXLX1可以破坏微晶纤维素整齐光滑的表面结构,与商业纤维素酶有一定的协同效果。获得新型的类膨胀素蛋白,有一定的水解活性,在木质纤维素降解等工业中存在潜在的应用价值。
关键词
类膨胀素
TALAROMYCES
leycettanus
JCM12802
基因克隆
异源表达
CBM融合蛋白
Keywords
expansin-like
Talaromyces leycettanus JCM12802
gene cloning
heterologous expression
CBM-fusion protein
分类号
Q933 [生物学—微生物学]
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职称材料
题名
作者
出处
发文年
被引量
操作
1
农杆菌介导大豆子叶节转化系统的优化
李文霞
宁海龙
吕文河
李文滨
《中国农业科学》
CAS
CSCD
北大核心
2008
23
下载PDF
职称材料
2
利用农杆菌介导法转化大豆子叶节的影响因素研究
陈李淼
田星星
单志慧
沙爱华
李文滨
周新安
《大豆科学》
CAS
CSCD
北大核心
2012
12
下载PDF
职称材料
3
来源于嗜热真菌Talaromyces leycettanus JCM12802的类膨胀素基因鉴定及功能探究
顾源
寻子琦
郑菲
涂涛
姚斌
罗会颖
《生物技术通报》
CAS
CSCD
北大核心
2018
0
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职称材料
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