现代水产高等教育课程体系的构建

现代渔业的飞速发展,要求水产高等教育对传统教育观念和人才培养模式不断进行改革,研究新形势下人才培养目标和课程体系。本文探讨了在推动内涵式发展的前提下,提出了由"创新精神的复合性应用型人才"的培养目标,通识教育、专业教育和实践教学"三维渗透式"的课程体系,"3+4"模式的专业课程结构,"1个中心+5个环节"的实践教学体系等板块组成的特色鲜明的人才培养模式。

浅析过氧化钙在水产养殖中的应用

一、过氧化钙在水产养殖业中的应用 1．作为释氧剂增加水体溶氧过氧化钙作为释氧剂增加水体溶氧，典型地应用于有限的水域内、提高饲养密度而增加单位产量，并解决养殖水体缺氧而导致水产动物浮头或泛池现象，特别是在水产动物越冬期。

原位杂交技术在水产动物育种与疾病诊断中的应用

原位杂交技术作为分子杂交的基本原理和免疫组织化学两者相结合的一项技术,有很高的应用价值,其中地高辛标记物凭借其系统安全、方便、省时,敏感性和质量控制优于生物素标记和放射性物质标记技术,被广大研究者认可。本文重点介绍了地高辛原位杂交的原理,概括了其在水产动物育种与疾病诊断中的应用现状。

哲罗鱼(♀)与细鳞鱼(♂)杂交种胚胎及仔稚鱼发育

通过性激素药物诱导和人工繁育技术对哲罗鱼(♀)(Hucho taimen)与细鳞鱼(♂)(Brachymystax lenok)进行属间远缘杂交,并对杂交种胚胎及仔稚鱼的发育进行初步研究。结果表明:在水温6.2～8.9℃条件下,哲罗鱼(♀)×细鳞鱼(♂)的杂交受精卵完成胚胎期发育所需的有效积温为5806.70℃·h,整个胚胎发育过程可分为6个阶段,24个发育分期。刚破膜的仔鱼不具有游泳能力,全身透明,体循环清晰可见;7d后卵黄囊期仔鱼口裂明显,头顶部和腹部开始变得浅黄,尾鳍分化不断完成;17d后,仔鱼开始上浮,卵黄囊基本吸收完全,仔鱼具有游泳能力,鳍条和腹部鳞片开始不断分化。上浮40d后仔鱼发育成稚鱼,脂鳍分化和身体两侧鳞片覆盖基本完毕,幼鲑斑开始出现。根据研究结果可以初步断定,该杂交种的胚胎发育速度介于双亲之间,稚鱼期基本具备成鱼形态特征,早期杂交种外部形态略偏向于哲罗鱼,但仔稚鱼期生长较双亲快,推断这种杂交优势的贡献力可能来源于母本。

哲罗鲑与细鳞鲑属间远缘杂交的初步研究

通过性激素药物诱导和全人工繁育技术对野生哲罗鲑(Hucho taimen)与细鳞鲑(Brachymystax lenok)进行远缘杂交。结果表明,哲罗鲑(♀)×细鳞鲑(♂)(HB,正交实验组)杂交的受精率、发眼率、孵化率和仔鱼上浮率与其双亲自群繁育效果无显著性差异(P>0.05),而且在胚后的不同发育时期HB杂交子代的死亡率和畸形率均低于哲罗鲑自繁(HH)和细鳞鲑自繁(BB)对照组。在内源性营养时期(卵黄囊吸收早期),HB、HH和BB的仔鱼体质量分别呈负增长、正增长、零增长趋势变化;在混合营养时期(开口-转口时期),HB和BB组鱼体质量呈正增长趋势变化,HH组体质量呈负增长趋势变化;在外源性营养时期(驯化时期),HB、HH和BB的鱼体质量均呈正增长趋势变化;无论在哪个时期实验组和对照组的体长均呈正增长趋势变化。细鳞鲑(♀)×哲罗鲑(♂)(BH,反交实验组)的杂交经过2年多批次实验均未得到成活杂交子代,但在胚胎发育阶段BH的杂交受精率、发眼率均显著高于双亲(BB、HH)自繁对照组(P<0.05),但其孵化率显著低于双亲对照组(P<0.05),BH杂交子代在破膜后1～2h内即死亡,刚破膜的仔鱼尾干中后段至尾鳍部分盘绕于卵黄囊表面不能伸展,且所有破膜仔鱼的尾干中后段均存在充血点,本研究认为,这种反交[细鳞鲑(♀)×哲罗鲑(♂)]子代不能成活的原因可能是由远缘杂交受精卵核质不相容所导致。

沉性大卵径鱼卵的观察方法与虹鳟的胚胎发育

虹鳟等冷水性鱼类产沉性卵,由于卵膜较厚,不作特殊处理,肉眼无法直接观察其胚胎发育的过程.该研究分别采用0.6%～1.0%胰蛋白酶酶解透明、透明液处理和5%甲醛固定剥膜的方法对虹鳟的受精卵进行处理,在显微镜下比较3种处理方法并对虹鳟胚胎发育进行观察.结果表明,用胰蛋白醇适度处理以后,卵膜呈透明状态,可以用显微镜清楚的观察到各个发育时期;用透明液处理以后,卵膜仍然较厚,在发眼前期,仅可观察到胚胎的大致发育时期,发眼期以后,虽然可以观察到每一个发育时相,但效果较差;采用甲醛固定后卵膜及卵内物质变性,胚胎固化形态稳定,发育时相得以固定,机械去除卵膜以后,各发育时相清晰可见,进而可以深入研究其胚胎发育.通过对甲醛固定以后的胚胎观察,可以将虹鳟的胚胎发育分为囊胚期、原肠期、神经胚期、眼球色素出现期和循环期等21个时期.

细鳞鱼气单胞茵的分离、鉴定及药敏试验

从患病细鳞鱼Brachymystax lenok体内分离出两种菌株（记为BAS和BAH），均属于革兰氏阴性短杆菌，无芽孢，元荚膜，多数呈单个排列，极端有单鞭毛。对两种菌株的菌落形态鉴定结果表明：BAS的菌落呈圆形，为浅黄色，半透明，无水溶性色素；BAH的菌落也呈圆形，中央微高，为灰白色。经API20NE细菌生化鉴定，BAS和BAH菌株分别为温和气单胞菌Aeromonas，sobria血和嗜水气单胞菌A．hydrophila，其鉴定率分别为98．1％和99．3％。注射剂量为1×10^7 CFU／mL时表现出较强的致病性，感染12d时，细鳞鱼的死亡率为100％。药物敏感试验结果表明：两种菌株对妥布霉素（TOB）、四环素（TET）、庆大霉素（GEN）、卡那霉素（KiN）、氟哌酸（NOR）、环丙沙星（CIP）、左氧氟沙星（LVX）高度敏感；对呋喃唑酮（FUR）、呋喃那斯、氯霉素（CHL）、复方新诺明（TST）中度敏感；对阿奇霉素（AZI）、红霉素（ERY）不敏感。

尖吻细鳞鲑胚胎及仔、稚、幼鱼发育的研究

通过活体观察和Bouin＇s液固定对乌苏里江尖吻细鳞鲑Brachymystax lenok的胚胎及仔、稚、幼鱼的发育进行观察,确定尖吻细鳞鲑的发育过程,详细描述了胚胎各发育时期的时序、形态特征以及仔、稚、幼鱼的发育特点,并将尖吻细鳞鲑与其它几种鱼类进行比较,探讨破膜所需时间与卵子性质和孵化水温的关系。结果表明：尖吻细鳞鲑成熟卵呈淡黄色,圆球形,卵径为（4.32±0.21）mm,含有大量卵黄,卵的比重大于水,属端黄卵,卵膜厚,无黏性,有弹性;受精卵在水温6.0~10.7℃条件下,历时597 h孵出,有效积温为190.79℃.d;尖吻细鳞鲑胚胎发育过程包括受精卵、卵裂、囊胚、原肠胚、神经胚、器官形成等6个阶段、26个发育时期。初孵仔鱼全长为（10.67±0.02）mm,破膜第13天仔鱼出现鳔并开始上浮,第14天仔鱼卵黄囊吸收完全,仔鱼期结束,进入稚鱼期;破膜后第25天稚鱼体侧出现幼鲑斑,第35天各鳍发育完全,进入幼鱼期,此时鱼体外观与成鱼无异。

兴凯湖翘嘴红鲌生长式型的研究

对兴凯湖翘嘴红鲌Erythroculter ilishaeform is(B leeker)的生长式型进行了研究,经统计分析表明:翘嘴红鲌的体长与鳞径的关系为L=0.7960×10-3R1.9060(r=0.9729);体长与体重的关系为W=8.9047×10-3L3.0427(r=0.9153),属等速生长类型;用Von Bertalanffy生长方程拟合了兴凯湖翘嘴红鲌的生长,其渐近体长和渐近体重分别为98.05 cm和10.21 kg,拐点年龄出现在10.42龄,拐点体长为65.81 cm,体重为3.03 kg,与长江水系翘嘴红鲌的生长式型不同。

三倍体和二倍体银鲫精巢组织学的比较

通过光学显微镜对染色体数为150±的三倍体和染色体数为100的二倍体银鲫(Carassius auratus gibelio Bloch)的精巢组织学结构进行了比较观察。三倍体和二倍体银鲫的精巢组织学结构基本相同,属于小叶型,都是由外膜和实质构成,各精小叶呈辐射状分布,一个小叶由数个精小囊组成。其精原细胞存在于精小叶内壁上,精母细胞和未成熟的精子细胞位于精小囊中,精子成熟后从精小囊进入小叶腔。三倍体银鲫成熟精子的体积为(11.8±2.8)μm3,二倍体平均为(6.8±1.8)μm3,二者的比例接近3:2。结果表明三倍体银鲫的精巢能够发育成熟,其精子发生过程正常,经过减数分裂,能产生正常的精子;因此三倍体的黑龙江银鲫是具有双倍性特征的多倍体群体。

黑龙江上游3种茴鱼分类地位的线粒体D-loop序列变异分析

基于茴鱼属(Thymallus)鱼类的线粒体D-loop片段全序列变异,对分布于黑龙江上游中国境内的呼玛河、额木尔河等水系中形态特征差异显著且同域分布的3种茴鱼共24个个体进行分子系统发育关系研究,以探讨其在属内的分类学地位。结果显示,分布于黑龙江上游的茴鱼群体在属内显著分为3个独立进化分支,平均序列分歧为0.048～0.062,已达到种间分化水平。经形态学鉴定,其中2个分支分别为黑龙江茴鱼(T.grubii)和下游黑龙江茴鱼(T.tugarinae),而另外1个分支应为1个新种;且该种与分布于勒拿河上游的勒拿河茴鱼(T.sp.)构成单系群,平均序列分歧仅为0.006,即黑龙江上游和勒拿河上游的待定名茴鱼为同一种,结合文献,该茴鱼被确定为北极茴鱼(T.arcticus)的1个亚种。综合3种茴鱼在黑龙江水系的地理分布现状,对其起源及演化进行了初步推测。

荧光染色法检测虹鳟精子质量

本实验运用三种荧光染色方法对虹鳟精子的质量进行检测,并探讨荧光染色对虹鳟精子质量评价的可性及意义。在生殖季节采集虹鳟精液,分别进行Hoechst33342/碘化丙啶双染,吖啶橙染色及罗丹明123/碘化丙啶双染,然后将其制成涂片荧光显微镜下观察。经荧光染色的虹鳟精子质膜完整,DNA完整,可明显分辨出活体和死亡精子,线粒体膜功能正常精子的比率分别为90.7%、98.7%和96.4%。综上所述,结合三种检测方法可以简便快速地测定虹鳟精子的质量。

细鳞鱼卵子发生过程中细胞器的形态变化与作用

通过组织学方法和透射电镜技术对细鳞鱼(Brachymystax lenok)卵子发生过程中细胞器的变化与作用进行了研究。结果表明,从刚分化的卵原细胞至成熟卵母细胞时期(Ⅰ～Ⅴ时相)胞质内均能观察到线粒体,其形态最初为圆形,随着其大量增殖,形态变为棒状、弯曲状或长形(Ⅱ时相),并导致线粒体簇形成,其嵴也由单个变为多个,电子密度呈由低到高的规律变化;但到Ⅲ时相末期线粒体又退化为圆形,个别线粒体还通过对分或牙分进行裂变,线粒体嵴被不断释放,形成空泡,其基质电子密度呈降低的规律变化;在此过程中线粒体主要参与各种囊泡的形成,为后期卵黄前体物质进入、积累创造条件。在Ⅱ时相卵母细胞早期的细胞核附近开始出现内质网和高尔基体,但数量少,结构简单,随着它们的大量增殖(Ⅲ～Ⅳ时相),这两种细胞器将对卵黄物质的合成与加工起到关键作用。内质网主要呈弓形,少数呈圆形或杯形,早期与高尔基体相伴出现,但随着内质网大量增殖,其合成功能也随之增强。早期高尔基体也呈弓形,但随着其高度发育,几个分散的高尔基体聚集形成高度发育的高尔基体复合体,其加工与修饰功能也不断增强,同时其周围伴有大量潴泡或电子密度不同的囊泡体(多层结构)出现,且这些多泡体常常与环形片层(annulate lamellae,AL)一同出现。AL与核膜结构相似,早期呈弧形排列,本研究推测环形片层起源于核膜,其主要作用可能是膜的储藏地。

虹鳟杂交胚胎(2n♀×3n♂)的发育状况及其DNA倍性分析

雄性三倍体虹鳟(Oncorhyncus mykiss)可以发育至生理成熟并表现出较强的雄性副性征,性腺发育基本正常;雌性三倍体虹鳟性腺几乎不发育,并且存在着类雄性化的发育趋势。本研究拟通过对虹鳟杂交胚胎(2n♀×3n♂)发育状况及其DNA倍性的分析,进而确认三倍体虹鳟是否具有与二倍体虹鳟类似的生育能力并分析其原因。选取经两个世代家系选育的虹鳟优良品系二倍体雌性虹鳟作为母本,以热休克方法人工诱导的优质雄性三倍体虹鳟为父本,常规人工采集精卵授精,获得三倍体雄性与二倍体雌性杂交胚胎,观察杂交胚胎的发育进程,通过流式细胞仪检测杂交胚胎的DNA含量,进而与二倍体雌雄交配获得的胚胎对照确定杂交胚胎的倍性。结果表明,杂交胚胎的受精率、发眼率和孵化率均显著地低于对照组,杂交胚胎多数在发眼期之前死亡,破膜的胚胎在仔鱼期上浮前全部死亡。杂交胚胎的DNA含量分布范围较大,大致可以分为两个水平,接近84%的胚胎的DNA含量介于二倍体与三倍体之间,约为对照组DNA含量的2.5倍;约有16%的胚胎的DNA含量在三倍体和四倍体之间。本研究认为,染色体非整倍体化可能会引起杂交胚胎细胞核质不相容,进而导致基因表达调控紊乱,从而使杂交胚胎不能正常发育,无法完成由母体卵黄供给的内源营养向外源营养的转换,成为导致杂交胚胎发育过程中大量死亡,以及杂交仔鱼在破膜之后开始进食之前全部死亡的一个重要原因。

虹鳟胚胎组织单细胞悬液制备方法的研究

采用0.01MPBS等渗液配制的浓度为70%的乙醇固定液对虹鳟活体胚胎进行固定,并以蒸馏水配制的浓度为70%乙醇固定液作为对照,探讨用于流式细胞术分析的胚胎组织单细胞悬液制备方法。实验结果表明:PBS-乙醇和蒸馏水-乙醇固定液均可获得分散良好的单细胞悬液,但蒸馏水-乙醇固定液制备的胚胎细胞悬液中细胞数量相对较少,细胞碎片明显增多,流式细胞仪检测G0/G1峰较宽。而PBS-乙醇固定液制备的细胞悬液,细胞形态完整、背景较干净,细胞粘连少,几乎没有细胞碎片,流式上机检测各参数值较理想;以PBS-乙醇固定液制备2n虹鳟胚胎单细胞悬液作为材料检测,其结果与以红细胞为对照的样品检测DNA相对含量结果相一致,均为50AU。本研究表明利用PBS-乙醇固定液制备鱼类胚胎组织单细胞悬液方法是可行的。

不同pH人工精浆对性逆转金鳟雄鱼精子活力的影响

研究了性逆转金鳟雄鱼（XX，伪雄鱼）精子在不同pH的人工精浆（ artificial seminal plasma,ASP）溶液中的活动情况。结果显示，随着pH的提高精子活力不断增强。伪雄鱼精子在不同ASP—pHs中培养1h后，pH9．5～10．5培养组精子活力超过正常雄鱼精子（XY）活力水平，且正常雄鱼精子与pH8．5～9．5培养组的精子活力不存在显著性差异（P〉0．05）。将金鳟伪雄鱼精液培育在pH8．5～10．5的ASP中，0～180min内，pH10．5中的精子寿命和激活比例都最佳，180min之后的精子寿命超过80s，激活比例在90％以上，显著好于其他pH组（P〈0．05）。在低温储藏12h后，正常雄鱼精子在ASP—pH10．5溶液中寿命时间最长，为（284．05±78．37）S，其次是同等稀释条件下的伪雄鱼精子寿命，其时间为（203．89±43．68）s，正常雄鱼精液原浆精子寿命最短，为（122．19±37．61）s。直接用金鳟伪雄鱼精液受精，发眼率和仔鱼上浮率仅为12．50％和8．77％，而通过pH10．5的ASP培养后，其发眼率和孵化率分别提高到了52％和49．95％。因此，在高pH的ASP中培养金鳟伪雄鱼精子能提高其活力和延长寿命。通过这种处理也能够显著的提高金鳟全雌和全雌三倍不育后代的育苗生产效率。

呼玛河3种茴鱼遗传分化及属内地位的微卫星分析

茴鱼属(Thymallus)是黑龙江水系特有的珍稀濒危冷水性鱼类,本研究利用6对微卫星引物,对采自黑龙江上游呼玛河同域分布的黑龙江茴鱼(T.grubii)、下游黑龙江茴鱼(T.tugarinae)及待定名种(T.sp.)3种茴鱼的遗传多样性进行了比较研究,以探讨其种群遗传结构、分化水平及分类学地位,为制定保护管理策略提供遗传学理论依据。结果显示,黑龙江茴鱼、下游黑龙江茴鱼和待定名种的平均等位基因数(Na)分别为17.3、18.2和15.3,平均杂合度(H)分别为0.9112、0.9190、0.8492,多态信息含量(PIC)为分别为0.8900、0.8980和0.8250,种群中的特有等位基因数分别为34、37和43。黑龙江茴鱼与下游黑龙江茴鱼的遗传距离(Ds)最小(0.9617),下游黑龙江茴鱼与待定名种最大(1.8427),3种茴鱼的Fst为0.1575(P<0.01),远大于黑龙江茴鱼、下游黑龙江茴鱼的不同地理种群间的遗传分化水平。研究表明,黑龙江上游3种茴鱼具有很高的遗传多样性水平,3个种间产生显著的遗传分化,结合3种茴鱼种间稳定而显著的形态学特征差异及其地理分布现状,支持黑龙江上游呼玛河同域分布的3种茴鱼在属内各为独立种的分类学地位。

黑龙江野鲤生物学特性与人工繁殖技术的研究

黑龙江野鲤是我国淡水养殖业主要种类之一,也是黑龙江水系的主要经济鱼类。由于黑龙江野鲤具有高蛋白、低脂肪、氨基酸种类丰富、人体必需氨基酸含量高等特点,已成为黑龙江省乃至北方地区的优良养殖品种。

黄颡鱼的精子发生

利用透射电镜封黄颡鱼的精于发生过程中各级生殖细胞的形态结构进行了研究。结果表明：黄颡鱼精子发生的过程与其他硬骨鱼类相似，均经历精原细胞、初级精母细胞、次级精母细胞、精子细胞和成熟精子几个时期。精原细胞分为两种类型，即A型和B型，其中，A型精原细胞又分为A1型和A2型。精子细胞经过变态後成为成熟精于，依据细胞核和细胞质所发生的变化，可将精子形成分为3个时期，即早期、中期和晚期。