实时荧光定量PCR技术在转基因检测中的应用

实时荧光定量PCR技术是一种新型的核酸定性、定量检测、分析技术。随着转基因产品大规模商业化,转基因生物的环境安全和食用安全性问题引起了全球范围内广泛的争论和关注。实时监测、定量准确、灵敏度高、反应速度快、重复性好及PCR反应后不需电泳检测等优点,使RQ-PCR逐步成为转基因检测的重要工具。

微生物产赖氨酸的研究进展

赖氨酸是人和动物营养的9种必需氨基酸中的第一必需氨基酸,广泛应用于医药、食品和饲料等领域。发酵法是目前生产赖氨酸最主要的方法。文章从赖氨酸的生产现状、生物合成途径、代谢调控,育种等方面阐述了微生物生产赖氨酸的研究进展。

实时荧光定量PCR技术在转基因大豆A5547-127检测中的应用

采用实时荧光定量PCR技术检测耐除草剂转基因大豆A5547-127,并对检测方法的精确度和准确度指标进行评估,分析检测方法的特异性和适用性。结果表明,定量PCR检测方法的LOD和LOQ分别是1和10copies.μL-1,检测方法试验得到的所有偏差值均在允许范围之内,表明建立的定量PCR检测方法能够为转基因大豆A5547-127提供科学的定量检测依据,为转基因作物的鉴定、检测提供新方法。

乳蛋白生物活性肽的药理学作用及应用前景

以乳蛋白生物活性肽中酪蛋白磷酸肽为重点,就乳蛋白生物活性肽的离子载体作用、细胞凋亡诱导作用、细胞免疫调节作用、DNA合成促进作用、抗菌作用、抗高血压作用和抗血栓作用进行了阐述,并对这些药理学作用的研究进展加以介绍,同时展望了乳蛋白生物活性肽在乳品和医药工业中的应用前景。

重组β酪蛋白磷酸肽二聚体基因的构建、表达及其生物活性分析

生物活性短肽 β酪蛋白磷酸肽 (β CPP)能够增加细胞对二价离子的吸收、促进受精过程并对细胞增殖产生影响 .为深入研究其生物学功能 ,采用基因工程方法得到β CPP的二聚体基因并构建真核表达载体 ,转染CHO细胞建立稳定表达细胞系 .鉴定纯化所表达产物 ,考察表达产物对精子细胞内游离Ca2 + 水平、细胞增殖和细胞凋亡等方面的影响 .结果表明 ,重组 β CPP二聚体能够显著增加精子细胞对Ca2 + 的吸收、促进脾细胞的增殖并诱导某些肿瘤细胞的凋亡 。

Taqman定量PCR技术检测转基因大豆中外源基因拷贝数

[目的]采用Taqman定量PCR技术检测转基因杂交大豆中外源nos终止子基因的拷贝数。[方法]以大豆凝集素基因为内参照基因,以非转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品,通过梯度稀释法分别求取了内参照基因和质粒DNA的Ct值与拷贝数对数值的相关性标准曲线方程,并通过将得到的Ct值代入标准曲线方程求取了样品的拷贝数。[结果]内参照基因标准曲线方程为y=-3.422x+35.201,R2=0.998;外源基因标准曲线方程为y=-3.348x+34.890,R2=0.999。nos终止子基因及其下游边界序列在转基因杂交大豆中为单拷贝。[结论]为确定转基因大豆外源基因拷贝数提供了理论依据。

果蔬保鲜技术及可食用膜技术在果蔬保鲜中的应用

本文综述目前国内外果蔬保鲜的主要技术,同时还阐述涂膜保鲜果蔬的发展,涂膜剂的种类以及涂膜方法。

土壤水分对麦蓝菜生物量及王不留行黄酮苷含量的影响

为探讨土壤水分条件对麦蓝菜生物量及王不留行黄酮苷（VR）含量影响,以盆栽麦蓝菜为材料,采用4种土壤水分（重度干旱、中度干旱、适宜水分和过湿水分）处理麦蓝菜,测定胁迫后15、30和45 d麦蓝菜根、茎、叶、种子生物量,以及VR含量和产量。结果表明,与适宜水分相比,土壤重度干旱、中度干旱、过湿水分均会降低麦蓝菜各器官生物量,而中度干旱能够显著提高麦蓝菜各器官中VR含量,当土壤水分为田间持水量的70%~75%时,可获得最佳的麦蓝菜生物量和VR产量。建议人工种植麦蓝菜时保持适宜土壤水分含量,以兼顾药材的产量和质量。

整合素生物学功能的研究进展

整合素是细胞黏附的跨膜蛋白,主要参与细胞和细胞外基质的结合反应。整合素将细胞外基质同细胞内的骨架网络连成一个整体,这就是整合素所起的细胞黏着作用,而且整合素将细胞外的信号传递到细胞内,反之亦然。作者对整合素的结构和功能、细胞黏附、信号转导的最新研究进展等方面进行综述。

东北红豆杉一株产三尖杉宁碱内生真菌Xylaria Primorskensis Y32的分离与鉴定

目的:从东北红豆杉中分离纯化出一种产三尖杉宁碱的内生真菌,为三尖杉宁碱的来源提供了新的途径。方法:采用组织块分离法分离东北红豆杉叶内生真菌,利用高效液相色谱法(HPLC)和超高效液相色谱-高分辨质谱(UPLC-Orbitrap-MS/MS)法对内生真菌发酵液提取物成分进行分析,并通过表面形态观察及真菌ITS序列对产三尖杉宁碱的内生真菌进行种属鉴定。结果:内生真菌Y32可特异性产三尖杉宁碱,菌落呈现花纹放射状,中心呈现棕色,边缘呈现白色;经ITS序列比对,该菌与Xylaria primorskensis ITS序列相似性为98%。结论:从东北红豆杉中分离到一株产三尖杉宁碱的内生真菌Y32,鉴定为滨海炭角菌(Xylaria primorskensis)。

饲料产品生产技术工艺与其质量的若干问题

自改革开放以来，我国的饲料工业从无到有、小到大，达到世界饲料大国的生产能力，也带动了关产业的发展，促进相关学科领域的发展。饲料产也面临着从产量型向质量型过渡，如何提高产品量，一方面要有科学的配方，另一方面要有精良的艺。一个产品的加工工艺是由相关技术和设备所定的。目前我国饲料加工设备已达到比较先进的平，

东北红豆杉内生真菌Fusarium tricinctum J8的鉴定及抗菌活性研究

目的:从东北红豆杉内生真菌中筛选出一株对常见致病细菌具有广谱拮抗活性的菌株。方法:以大肠杆菌、白色念珠菌、金黄色葡萄球菌、蜡样芽孢杆菌4种常见致病细菌为指示菌,采用滤纸片扩散法筛选具有广谱抗菌活性的内生真菌,基于形态观察与系统发育分析对该菌株进行种属鉴定,利用高效液相色谱(HPLC)分析该菌株不同发酵时间次级代谢产物的代谢情况,通过超高效液相色谱-四极杆-静电场轨道阱高分辨质谱(UPLC-Q-Orbitrap-MS/MS)分析该菌株可能产生的抗菌物质。结果:通过筛选获得一株广谱拮抗菌株J8,鉴定为三线镰刀菌(Fusarium tricinctum),根据HPLC色谱图对比,确定最佳培养时间为8天,通过mzCloud数据库比对分析其质谱数据,发现该菌株产生环(脯氨酸-亮氨酸)二肽、环(脯氨酸-苏氨酸)二肽、恩镰孢菌素B1、曲酸4种匹配度大于90%的抗菌物质。结论:从东北红豆杉中获得了一株对4种常见致病细菌均具有抑菌活性的菌株Fusarium tricinctum J8,为开发新型抗生素候选药物提供了菌种资源。

抗癌药物喜树碱的超声辅助PEG400绿色提取工艺研究

目的:建立使用表面活性剂PEG400结合超声辅助从喜树种子中提取抗癌药物喜树碱的绿色提取工艺。方法:通过对不同表面活性剂对喜树碱的溶解度的考察,确定适合喜树碱提取的表面活性剂及其最佳浓度,同时对提取过程中的液料比、超声功率、超声时间、温度进行单因素实验和正交试验。结果:采用13%的PEG400水溶液结合超声提取喜树碱的最佳工艺条件为液料比90∶1、超声功率540W、超声时间90min、温度25℃,在此条件下的喜树碱提取率为1174.59μg/g。结论:使用PEG400水溶液成功提取了喜树种子中的喜树碱,喜树碱的提取率为1174.59μg/g。

色谱法在糖类化合物分析中的应用

综述了适用气相色谱分析和高效液相色谱分析多糖的降解方法，单糖和寡糖衍生物的制备，色谱条件的选择以及色谱法在糖类分析中的应用。参考文献５８篇。

大鼠对氨基酸螯合铁吸收和转运特点的研究

试验用40日龄Wistar纯系雄性大鼠120只,设定两种日粮背景(纯合日粮和常规日粮),利用直接灌胃技术和放射性同位素示踪技术,通过与相应摩尔浓度的氨基酸与氯化亚铁混合物比较,研究了在正常生理条件下,大鼠对氨基酸螯合铁(以赖氨酸螯合铁和甘氨酸螯合铁为代表)的吸收和转运情况。试验结果表明:①赖氨酸和甘氨酸都能促进缺铁大鼠对铁的吸收、转运和利用。②与相应摩尔浓度的氨基酸和氯化亚铁混合物比较,缺铁大鼠更易于吸收、转运和利用氨基酸螯合铁中的铁,不同组织器官中59Fe的比放射性也支持上述结论。③体内铁营养状况良好的大鼠对氨基酸螯合铁中铁的吸收、转运和利用优于氯化亚铁。④综合分析整个试验得到的结果,可以认为氨基螯合铁是优秀的铁添加剂。⑤放射性同位素示踪结合直接灌胃技术,同时监测血液、红细胞、血清球蛋白和十二指肠中的比放射性的动态变化,能更直接反映被研究铁化合物中的铁被动物吸收、转运和利用情况。

SYBR Green实时定量PCR检测转基因大豆中外源基因拷贝数

采用SYBRGreen Ι real-time PCR方法检测转基因大豆中外源基因35S边界基因的拷贝数,以大豆凝集素基因(Lectin)作为内参照基因,以转基因大豆基因组DNA为内参照基因标准品,初始浓度为0.43μg·μL-1,进行5倍梯度稀释得到内参照基因CT值与起始模板量的相关性标准曲线:y=-2.9915x+22.3321,R2=0.996;以含35S边界序列的质粒DNA为目的基因为标准品,初始浓度为0.64μg·μL-1,同样进行5倍梯度稀释,建立目的基因CT与起始模板量的相关性标准曲线:y=-3.4021x+17.7219,R2=0.999。通过SYBR Green Ιreal-time PCR获得样本中目的基因和内参基因的CT值,将CT值分别代入标准曲线计算该样本中内参基因和目的基因起始模板量,目的基因与内参基因起始模板量比值即是目的基因在该转基因中的拷贝数。计算结果为4份样品中,2个拷贝的1个,3个拷贝的3个。

牛myf6基因真核表达载体的构建及在成肌细胞中的表达

【目的】构建牛myf6基因真核表达载体,并观察myf6真核表达载体转染鲁西黄牛成肌细胞后基因的表达和细胞形态的变化。【方法】在质粒pIRES2-EGFP的多克隆位点插入myf6基因构建真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6,用脂质体技术转染鲁西黄牛成肌细胞,通过G418筛选出稳定转染的细胞株。利用Western印记、Real-time PCR技术检测成肌细胞转染前后myf6基因、肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的表达量。【结果】与对照组相比,转染质粒的成肌细胞myf6蛋白和mRNA的表达量提高(P<0.01),肌肉肌酸激酶基因和肌球蛋白轻链基因的mRNA表达量提高(P<0.01)。细胞形态观察显示成肌细胞融合为肌管。【结论】构建的真核表达载体pIRES2-EGFP-myf6能在成肌细胞中高效表达,myf6基因促进了成肌细胞向肌肉细胞分化。

新型真菌源激活蛋白诱导水稻抗病性及其生理机制

为明确新型真菌源激活蛋白对水稻抗病性的诱导作用及其生理机制,研究了激活蛋白对水稻稻瘟病和白叶枯病的诱导抗病性,监测了激活蛋白处理后水稻过氧化物酶(POD)、多酚氧化酶(PPO)、过氧化氢酶(CAT)、超氧化物歧化酶(SOD)活性及过氧化氢(H2O2)含量变化。结果表明,1～6μg.mL-1激活蛋白对稻瘟病和白叶枯病的诱抗效果分别为45.2%～71.4%和47.6%～66.3%,以6μg.mL-1激活蛋白的诱抗效果最好。与对照相比,2μg.mL-1激活蛋白处理水稻后3～15 d内不同程度诱导了防御酶POD、PPO和SOD活性,抑制CAT活性,提高H2O2含量。新型真菌源激活蛋白能够诱导水稻产生对稻瘟病和白叶枯病的抗病性,其诱导抗性机制与水稻体内的活性氧代谢密切相关。

转基因大豆、玉米和水稻外源基因检测通用标准分子的构建

将转基因大豆、玉米和水稻的主要外源Cry1A(B)基因、BAR基因、CP4-EPSPS基因、PAT基因和内参RBCL基因目标片段分别克隆到克隆载体pMD18-T中,构建获得的质粒可作为定性检测3种转基因粮食作物的上述外源基因的通用标准分子质粒pMD18-T-PAT-CP4-EPSPS-Cry1 A(B)-BAR-RBCL,长约4.7 kb。经过双酶切、测序及PCR扩增,获得与预期片断大小及序列一致的目的基因片段,证明所构建的标准分子质粒是正确的,可以用来作为不同品种转基因粮食作物定性检测CP4-EPSPS基因、Cry1 A(B)基因、BAR基因和PAT基因的通用阳性标准分子。

以羊奶和牛奶为原料的新鲜干酪风味的对比研究

利用固相微萃取法富集,GC-MS分离与检测技术,研究以羊奶和牛奶为原料的新鲜干酪的挥发性风味化合物。共鉴定出66种挥发性化合物,其中新鲜羊奶31种,新鲜牛奶15种,新鲜羊奶干酪23种,新鲜牛奶干酪20种。新鲜原料奶与新鲜干酪中挥发性风味化合物的组成和含量排序大致相同,说明加工前后的挥发性风味物质总体组成相似,只是在种类和数量上有所变化。