双酚A体外诱导雄性小鼠生殖细胞凋亡及其分子机制

目的采用双酚A(BPA,一种典型的环境雌激素)体外诱导雄性小鼠生殖细胞凋亡,并探讨其分子机制。方法对体外培养的雄性小鼠生殖细胞以不同剂量的BPA(10-7、10-6和10-5mol/L)进行诱导,检测细胞的凋亡状况;并应用RT-PCR和免疫蛋白印记技术检测凋亡相关基因(Bax/Bcl-2、Fas/FasL)的表达变化。结果低剂量的BPA(10-7mol/L)即能够引起支持细胞和精子细胞凋亡,但精原细胞对于BPA的作用却不敏感;随着BPA处理浓度的升高,支持细胞和精子细胞中Fas/FasL、Bax表达上调,Bcl-2表达下调,而精原细胞中基因表达变化不明显。结论BPA诱导的睾丸生殖细胞凋亡,不仅是依靠调节Fas/FasL系统起作用,Bax/Bcl-2基因也能够参与这一过程的调节。

mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响

为了探讨mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖的影响,试验将分离培养的牛骨骼肌卫星细胞接种在6孔板中,待细胞汇合度为70%时,用Lipofectamine 2000转染mir-133b的过表达载体进入牛骨骼肌卫星细胞,48 h后实时定量检测RNA表达水平,并用EDU试剂盒检测细胞增殖状况,实时定量PCR检测mir-133b的靶基因sp1的RNA表达情况。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,作EDU增殖过表达mir-133b以后细胞增殖数量显著增多。说明mir-133b对牛骨骼肌卫星细胞增殖具有促进作用。

miR-103在牛骨骼肌卫星细胞中的分化调节作用

为了阐明miR-103对牛骨骼肌卫星细胞的分化调节作用,试验将miR-103的过表达载体和miR-103抑制剂分别转染到分离培养的卫星细胞中,利用EDU功能检测试验、Real-time PCR和免疫荧光试验来分析miR-103对卫星细胞增殖和分化的调控作用,并用Western-blot和实时定量PCR检测miR-103对靶基因CCNE1的蛋白和mRNA水平表达情况的影响。结果表明:在牛骨骼肌卫星细胞中,miR-103能促进卫星细胞的分化并抑制细胞的增殖。说明miR-103是牛骨骼肌卫星细胞分化的一种重要的调控因子。

MyoG转基因小鼠模型制作、鉴定及组织学分析

为了研究MyoG基因对小鼠肌肉形成的影响,研究构建了MogG转基因小鼠并采用荧光定量RT-PCR方法检测转基因小鼠中外源基因拷贝数;H.E.染色后统计了转MyoG基因小鼠肌纤维数目以及直径。结果表明:转MyoG基因小鼠比目鱼肌的肌纤维直径相对于对照组明显增大(P<0.05)。说明MyoG基因对慢肌纤维数目无影响而对直径有影响。