小鼠同源异型盒基因hex的克隆与序列分析

同源异型盒基因hex在动物个体发育过程中具有重要的作用。为了解小鼠hex基因在乳腺发育中的作用,研究中提取细胞总RNA,采用RT-PCR方法扩增hex基因,并克隆到pMD18-T载体后测序。结较保守,表明在进化中具有重要的作用。结果表明:小鼠的hex基因开放阅读框由816个核苷酸组成,编码271个氨基酸,相对分子质量为30kD。与已发表的小鼠该基因序列完全一致。与禽类、人和其他动物相比氨基酸序列的同源性在69.8%～97.0%之间。进化树显示,小鼠与大鼠的hex基因在同一分支内,只有7个氨基酸的差异,该蛋白在物种的进化中较保守,标明在进化中具有重要的作用。

大鼠同源异型盒基因hex的克隆与序列分析

Hex基因作为同源异型盒基因超家族的成员,在造血细胞的分化和发育中发挥着重要的作用。为研究该基因在乳腺发育和分化中的作用,本研究采用RT-PCR方法扩增大鼠hex基因,并克隆到pMD18-T载体后测序。结果表明,大鼠的Hex基因读码框由816 bp组成,编码271 aa,分子质量为30 ku。与已发表的大鼠该基因序列完全一致,与小鼠、禽类、人、非洲爪蟾和斑马鱼相比氨基酸序列的同源性在70.7%-97.0%之间。进化树显示,大鼠与小鼠的Hex基因在同一分支内,表明该蛋白保守,在物种进化中具有重要的作用。

免疫荧光双重标记检测奶牛乳腺整联蛋白α5、β1亚基表达

屠宰健康荷斯坦奶牛,制备乳腺组织冰冻切片,免疫荧光双重标记检测,比较单克隆和多克隆α5、β1亚基一抗的特异性(FITC标记二抗),用SMMHC多克隆一抗,TRITC标记二抗特异标识肌上皮细胞来辅助定位靶信号,Hoechst33258复染细胞核,在激光共聚焦显微镜下连续断层扫描并拍照。结果表明,借助对肌上皮细胞和细胞核染色定位清晰可见乳腺结构,α5、β1亚基主要分布在导管和腺泡腔上皮细胞膜、外围肌上皮细胞膜和间质中的成纤维细胞膜上,前者在面向腔和靠近基膜的细胞顶侧和基底侧表达均较强,后者仅在基底侧细胞膜上。对于具有极性分布的细胞膜抗原单克隆一抗定位更准确。α5、β1亚基定位在相同区域表明,α5β1异二聚体具有在导管和腺泡基底侧极性分布的表达特点,α5亚基在面向导管和腺泡腔的上皮细胞顶膜上表达,而β1亚基不表达或弱表达,显示该区域存在非α5β1异二聚体形式的α5亚基。