人参悬浮细胞系的建立及其生长特性的研究

从人参幼叶的培养中，筛选出了质地松疏、生长迅速、易于分散、可以长期进行继代培养的淡黄色半透明状愈伤组织系。将这种愈伤组织接种在液体培养基中进行振荡培养．建立起分散程度好的人参悬浮细胞系。在此基础上，测定了人参细胞悬浮培养物的生长曲线。实验表明，水解酪蛋白（ＬＨ）对人参悬浮细胞的生长有利。滋养培养可以使人参悬浮细胞的愈伤组织形成率提高，并在低密度下达到较高的植板率。这为有效地筛选出适合于工业化生产的高产人参细胞株提供了方便。

软枣猕猴桃悬浮细胞系的建立及其影响因素

以软枣猕猴桃(Actinidia arguta Planch)叶片为试材,以MS为基本培养基,附加生长素(2.4-D、NAA)和玉米素(ZT)成功地诱导出愈伤组织,结果表明:软枣猕猴桃叶片在MS^+ZT 1mg/1+2.4-D 3mg/1的情况下能诱导出适合于建立悬浮细胞系的愈伤组织。并研究了愈伤组织生长年龄、激素浓度、肌醇和蔗糖浓度四个方面对建立悬浮细胞系的影响。表明愈伤组织以生长10天时接种活细胞率最高;以MS培养基附加ZT1mg/1+2.4-D3mg/1较好;肌醇以200mg/1圆形细胞频率最高;蔗糖以5％最适。

狗枣猕猴桃叶片植株再生及无性系快速繁殖

本研究以东北地区野生猕猴桃—狗枣猕猴桃叶片为试材。以MS为基本培养基,附加2·4-D、NAA和ZT共组成55个处理。结果表明:狗枣猕猴桃叶片在MS+ZTzmg/1+NAA0.1mg/l的情况下培养十八天就出现大量的丛生不定芽。按相同成分的培养基继代转移后其增殖率达五倍以上。在1/2MS+IAA1.5mg/l+蔗糖1.5％的培养基中生根率可达100％,苗木移栽成活率达90％以上。

哺乳动物受精的生物学

哺乳动物的受精(Mammalian Fertilization)是两性配子(精子和卵子)相结合而形成合子的过程,它标志着胚胎发育的开始,也即是一个新生命的起点。受精是生物学家饶有兴味的课题。因为它不仅涉及到一个理论问题,更重要的是当今节育和不育的世界性问题尚未解决,因此,受精的重要性是不言而喻的。当然,受精是一个极其复杂的生命现象,涉及到两性配子的发育和成熟、精子获能、顶体反应、精卵激活。

牛体外受精卵在两种共同培养系统中发育的研究

为了使牛体外受精卵能通过体外早期发育阻滞期,我们建立了卵丘细胞单层(A)和输卵管上皮单层(B)两种共同培养系统。A1共同培养实验是在本实验室进行的,A2和B共同培养实验均在日本岗山大学农学部动物繁殖学研究室进行,牛输卵管组织的分离使用0.76％EDTA—PBS溶液,共同培养系统均使用含10％小牛血清的TCM—199(Earle's salts)作为培养液。培养的卵泡卵母细胞体外成熟率为100％,体外受精率为99—100％。在A1共同培养实验中,越过阻滞期发育到16—细胞以上的胚胎占卵裂胚的35.7％,与A2共同培养实验中越过阻滞期的发育率(40.1％)无显著差异(P<0.05)。A1和A2共同培养实验,在卵裂基础上得到的桑椹胚和囊胚发育率分别为23.7％和27.9％。每百枚培养的卵母细胞,在A1共同培养实验中可获得桑椹胚和囊胚15.1枚,在A2共同培养实验中可获桑椹胚和囊胚的20.5枚。B共同培养实验中桑椹胚和囊胚发育率为54.1％,显著高于A1或A2共同培养实验的相应发育率(P<0.001),使用B共同培养系统每百枚培养的卵母细胞可以获得37枚桑椹胚和囊胚。

山羊卵母细胞发育的超微结构研究

本研究用光镜和电镜观察山羊卵巢内发育不同时期卵母细胞的核及胞质成分,并发现其某些变化规律。作者认为,随着卵母细胞发育,高尔基体、线粒体、滑面内质网、皮质颗粒等细胞器不断丰富和增多,并逐渐移向皮质区。在直径1.5～3mm卵泡卵母细胞中,线粒体全都变为带帽状;核仁内出现的纤维中心最多,但尚未发生致密化。到直径3.5～5mm卵泡,颗粒细胞突起开始退化,卵母细胞微绒毛自透明带中退缩,此期卵母细胞可用于体外培养成熟。当卵母细胞成熟时,高尔基体和粗面内质网消失,皮质颗粒整齐排列在质膜下,线粒体分散在胞质中央,为受精作好了准备。

草鱼和鲤鱼线粒体 DNA 的分离纯化及其 COI 基因的分子克隆

本文报道配合使用差速离心和DNaseI核酸酶处理等步骤,从草鱼和鲤鱼新鲜肝组织分离线粒体DNA(mtDNA)的实验方法。这种方法经济简便,纯化的mtDNA产率多,纯度高,经限制性内切酶消化后进行琼脂糖凝胶电泳分离,可以得到清晰的DNA片段谱带,并可直接用于构建酶切图谱和线粒体基因的分子克隆。用这样的mtDNA,我们已克隆了草鱼和鲤鱼的细胞色素氧化酶亚基I基因(COI基因)。

山羊早期胚胎发育的初步研究

本实验以黑龙江地方山羊为材料,经FSH超数排卵后,在不同时间屠宰母山羊,并冲洗输卵管及子宫,获取新鲜卵及各发育时间的胚胎。实验中发现山羊的排卵时间为发情开始后约30小时。受精卵的第一次卵裂的发生在排卵24小时以后。2细胞、4细胞、8细胞、16细胞、桑椹及胚泡期胚胎所处的时间分别为排卵后约32～42、48～52、62、72、96小时以及7～8天。16细胞期以前的胚胎移行于输卵管中,桑椹胚及胚泡则移行于子宫中。在每一时间从每只羊中所收集的胚胎基本上处于几个相邻的发育时期。在桑椹胚的动物极有明显的突起,这可能是内细胞群已开始形成的标志。到胚泡期时,胚胎体积增大,透明带变薄。正在孵化或已经孵化的胚泡中,内细胞群外端无滋养层细胞包围。

绵羊同步发情和超数排卵的研究

应用国产激素于发情季节对90只东北细毛羊和半细毛羊进行超数排卵和同步发情,研究了不同激素、不同超排和同步发情方案、不同品种及重复超排对绵羊超排效果的影响。实验结果表明:方法Ⅰ用提纯FSH、PGF_(2α)和hCG与方法Ⅱ用孕酮、PMSG、FSH超排绵羊的排卵数差异不显著(p>0.05),但前者的获卵率明显高于后者的(p<0.05)。比较方法Ⅰ与方法Ⅱ发情26～48小时和66～90小时输卵管冲卵(胚)率说明,用方法Ⅱ超排时,卵(胚)进入子宫的速度明显快于方法Ⅰ;用方法Ⅱ超排时,排卵15个以上与排卵少于15个的绵羊其获卵率差异不显著(p>0.05);间隔2个情期再次超排的绵羊排卵数接近于初次超排绵羊的排卵数,但明显高于间隔、1个情期再次超排绵羊的排卵数;用方法Ⅱ超排的东北细毛羊与半细毛羊的排卵数无明显差异(p>0.05);用孕酮同步处理的绵羊超排后,绝大多数于最后1次注射孕酮后42～51小时开始发情,而经PGF_(2α)处理的超排绵羊发情时间很不集中,从注射PG的后18到42小时之间几乎均匀分布。

牛卵母细胞体外受精及体外发育的研究

本研究利用从屠宰场收集到的牛卵巢,获取卵母细胞,经体外成熟后进行体外受精,其受精率为73±2％。受精卵分别用发育培养基TCM—199+10％FCS(MA)、颗粒细胞单层(MB)和卵管上皮单层(MC)进行培养,其8—16细胞的发育率分别为52％、54％和61％;而囊胚的发育率分别为20％、28％和42％。相比较而言,MB和MC培养基内突破8—16细胞阻断发育到囊胚的发育率优于MA。

蝌蚪皮肤细胞中磷酸酶定位的电子显微镜研究

本实验以花背蟾蜍后肢芽期的蝌蚪为材料,研究酸性磷酸酶及碱性磷酸酶在表皮细胞中定位。酸性磷酸酶在细胞表面个别粘液泡、细胞间连接复合体及细胞间隙上都有分布。在细胞内此酶主要定位于溶酶体、高尔基复合体及内质网上。碱性磷酸酶主要定位于细胞表面的微绒毛、细胞间隙、连接复合体及胶原纤维上。

牛卵母细胞发育的超微结构研究

本实验根据卵细胞的数量及分布、透明带的变化,卵泡大小等把牛卵母细胞的整个发育过程分为六个阶段,在超微结构的水平上进行了研究。随着卵母细胞的发育,高尔基体、线粒体、滑面内质网、皮质颗粒等细胞器数量不断增加,且逐渐迁移到皮质区。卵母细胞成熟时。高尔基体及粗面内质网消失,皮质颗粒开始在质膜下呈线状排列,而线粒体又向胞质中央区扩散。直径2毫米以上卵泡卵母细胞中,少嵴圆形线粒体一律转变为带帽线粒体,核仁发生致密化。此外,牛卵母细胞中有带有界膜的、均匀分布的囊泡。皮质颗粒成团发生和分布也是牛卵母细胞的特点之一。实验事实证明,皮质颗粒的形成与滑面内质网关系更为密切。

哺乳动物卵母细胞的冷冻保存方法

卵母细胞的冷冻保存与精子和胚胎的冷冻保存一样,具有许多潜在的应用价值。八十年代以后,卵母细胞体外成熟、体外受精、核移植,基因转移等相继研究成功。把优良品种动物废弃卵巢中的大量卵母细胞冷冻保存,可为这些生物技术提供充足的材料。卵母细胞的冷冻保存也为稀有动物,濒危动物和其它有价值的雌性个体(如基因工程个体)的遗传资源的长距离国际间运输及长期保存提供了可能。在人,卵母细胞冷冻保存可以克服胚胎冷冻保存所引起的一系列伦理道德及法律问题。

奶(黄)牛卵母细胞体外受精及体外发育的研究

自屠宰场获得150头淘汰黑白花奶牛和19头黄牛的卵巢,取得优、良级卵母细胞2060枚,采用两种培养液(A.B.)和三种不同试剂(Aa、Ba、Bb),对解冻牛精子获能(capacitation)。在38.5℃和相对湿度为100％的5％CO_2箱中进行成熟、受精、发育培养至196小时,其结果表明A液所获得的效果优于B液,但差异不显著;Aa试剂获能优于Bb,差异显著。共获得桑椹胚和囊胚58枚、非手术移植10头牛16次,三头妊娠,其中二头受体在妊娠二月半月后返情,外阴流血,确认为胚胎早期死亡,一头受体妊娠产犊,于1990年4月10日产公犊1头,体长87公分、身高78公分、体重29公斤、妊娠284天,正常分娩。(移植天为0天)。

猪卵母细胞体外成熟和体外受精卵表面元素的研究

本文应用X-射线能量色散技术对猪卵泡内卵母细胞,培养不同时间卵母细胞和体外受精卵进行了表面元素的定性和定量分析,结果表明,(1)在卵母细胞和受精卵的表面均含有Na、Mg、Al、Si、S、Cl、K、Ca和Fe元素;(2)A级卵母细胞随着体外培养,Ca的含量逐渐升高,而K的含量逐渐降低;(3)B、C级卵母细胞随着其培养Al、Ca^(2+)降低;(4)受精后卵表面的Ca显著升高。

植物激素和蔗糖对山葡萄离体茎段腋芽及根发育的影响

以“左山一号”山葡萄品种试管苗为试材,探讨了植物激素和蔗糖对茎段腋芽发育和生根的影响。结果表明,腋芽的萌发必须有BA和蔗糖的存在,单独使用BA可促进腋芽的增殖,但不利于腋芽仲长。BA与IAA配合有利于腋芽增殖和仲长。蔗糖对腋芽增殖和生长有较为显著的影响,增殖培养中蔗糖浓度不宜低于2.5％,带叶嫩梢可在不添加生长素和蔗糖的条件下达到较高的生根率。

山羊早期胚胎发育的超微结构研究

本实验以促卵泡刺激素(FSH)进行超排处理所得的胚胎为材料,首次对山羊附植前胚胎发育过程中的超微结构变化进行了系统的研究。结果表明:(1)在桑椹期以前,胚胎中大都为带帽线粒体,从此期开始这种线粒体明显减少;从四细胞期开始,出现基质浅具横嵴的线粒体,且以后各期逐步增多。具横嵴的线粒体可能由带帽线粒体的帽状泡消失后转变而来。(2)核仁从四细胞期开始网状化,以后网状化程度逐步增强,颗粒部明显增加。(3)间隙连结最早形成于4细胞期,紧密连结和桥粒分别从8细胞期开始出现。

哺乳动物细胞电融合技术及其影响因素的研究进展

细胞电融合技术是指利用电脉冲促使两个或更多个不同的细胞融合在一起的过程。由于可以获得较高的融合率,而且可以在显微镜下定向诱导细胞融合和直接挑选杂种细胞,故电融合技术得到了广泛的应用。电融合技术对于哺乳动物杂种细胞的构建;哺乳动物四倍体发育的研究;以及胚胎细胞核移植都具有十分重要的意义。因此,人们对哺乳动物的电融合问题进行了大量的研究,现将这方面的研究进展做一综述。 (一)电融合技术的原理及方法 悬于平行电极之间的低电导率溶液中的细胞,在适当强度与持续时间的直流电脉冲的刺激下,其细胞膜可发生可逆电击穿,此时如两个具有膜微孔的细胞紧穿接触,可导致细胞质桥的形成,进而发生细胞融合。

樱桃砧木的茎尖培养和快速繁殖

以优良樱桃砧木品种“COLT”为试材,筛选出了适于茎尖分化和增殖的培养,增殖速(?)3—4倍。确定了良好的生根培养基,生根率达90％以上。试管苗移栽砂床,成活率可达80—90％。初步建立了茎尖培养快速繁殖“COLT”苗木的技术程序,为实际应用打下了基础。

水貂初级卵母细胞发育过程中细胞器变化的电镜观察

本实验将水貂卵巢内卵母细胞发育过程分成四个阶段,在卵母细胞恢复生长之前的第Ⅰ阶段,线粒体大而圆,缺乏嵴,卵母细胞恢复生长之后,许多线粒体变细变长,体积缩小,嵴增加,在第Ⅱ阶段晚期线粒体交圆,嵴减少,随着卵母细胞的发育,线粒体数量增加并逐渐移向皮层区.高尔基复合体始终位于质膜下的皮层区,粗面内质网罕见,滑面内质网不发达,以单个囊池形式存在,游离核糖体丰富,在第Ⅰ阶段卵母细胞中可见到不活跃贮藏形式的核糖体集团及成群的黑色嗜锇颗粒,卵母细胞恢复生长后消失,皮质颗粒出现,其数量不断增加,它们始终位于质膜下呈线状分布也是水貂卵母细胞的特点之一.在卵母细胞发育晚期,胞质中有大量脂滴.