小白鼠胚胎简易分割技术的研究

哺乳类的胚胎分割实验在国内外都有人做过,最先取得成功的是有关小鼠的实验。但是,由于影响成功的因素比较复杂,几十年来,哺乳类的胚胎分割仍处于实验阶段。Nagashima(1981,1984)对16细胞和8细胞的小鼠桑椹胚分割,得到了一卵双生的双胞胎,又对兔的胚胎分割实验也得到了同样的结果。羊和牛的一卵双生及牛的一卵三生也已成功(Willadsen,1979,1980,1981)。马和猪的胚胎分割同样得到了双胞胎(W R Allen et al.,1984)等等。胚胎分割方法较多,但基本归于两类,一类是去透明带后再分割,包括机械地去透明带和酶消化去透明带(张涌等,1987)。虽然以上这些胚胎分割方法各有优点,但均较复杂,需要的辅助工具也较多,较难掌握,不易推广。本实验只用分割针,或碎玻片所做的显微小刀,或手工直接分割,方法简单,平均每分割一个胚胎只需2分钟。

小鼠早期胚胎体外培养的实验研究

本试验采用国产化学试药和哈尔滨地区的天然水,制备了 Brinster 化学合成培养液。把160枚通过超数排卵获得的2-细胞期小鼠胚胎放在添加适量牛血清白蛋白或胎牛血清的 Brinster 化学合成培养液内,并在适当湿度、5%CO_2和95%空气的气相环境、37℃温度条件下培养。58小时后,大约67%4小鼠2-细胞期胚胎发育到桑椹胚阶段;大约32%的小鼠桑椹胚发育到囊胚期阶段。试验证明,用国产化学药品和哈尔滨地区水配制的培养液可以对早期小鼠胚胎进行体外培养研究。

克服昆明白小鼠胚胎发育阻滞的初步研究

为克服昆明白小鼠胚胎的2—细胞阻滞并使受精卵发育到囊胚期,本研究设两个实验组和一个对照组。第1实验组所用培养液为Brinster氏化学合成培养液与输卵管上皮和输卵管液混合的协同培养液;第2实验组用改良Brinster氏化学合成培养液;对照组用经典的Brinster培养液。培养是在5％CO_2和95％空气,37℃的CO_2箱内进行。3次体外培养试验结果是:第1实验组小鼠胚胎从受精卵发育到囊胚期平均发育率为43.7±7.76％;第2实验组的平均发育率为17.1±5.06％;对照组的平均发育率是15.3±3.06％。统计学分析表明,添加输卵管上皮和输卵管液的Brinster培养液对克服昆明白小鼠胚胎2—细胞阻滞具有一定作用。

牛卵母细胞发育过程的细胞核变化

本实验把牛卵母细胞的整个发育过程分为4个阶段,对每个阶段卵母细胞的细胞核微细结构进行了研究。静止期卵母细胞的核仁是由颗粒性染色丝缠绕形成。卵泡腔形成时,核仁中出现纤维中心。直径2毫米以上卵泡中的卵母细胞核仁变得致密、均质,在一端形成纤维帽。体外培养24小时的卵泡卵母细胞已经成熟,生发泡崩解。在卵母细胞的发育过程中,核孔越来越明显,密度增加,而核周隙则越来越难以分辨。

培养过程中温度对猪卵母细胞发育的影响(脂滴部分)

猪成熟的卵母细胞在体外20℃和37℃的条件下,以M—199为培养基,以未培养的卵母细胞做对照,分别培养24和48小时,观察和分析不同温度下猪卵母细胞的发育以及超微结构的变化。结果表明,不同温度对细胞内脂滴的数量没有影响,对脂滴内容物的致密度无显著影响,但对脂滴大小有影响。与对照组比较,实验组的脂滴明显增大。在37℃培养时,脂滴的大小与时间呈正比,20℃时,则先增大后缩小。形态上的差别:20℃培养时一些细胞的部分脂滴出现相变现象,未见脂滴的外排;37℃时脂滴的变化不同。猪卵母细胞不耐低温,可能由于猪卵母细胞含有大量脂类,低温时由液晶态的脂类变成晶态,使细胞失去正常功能,甚至死亡。