超声破碎法联合应用DTT提取纯化Ca_V1.2钙通道CT3蛋白

目的探讨心肌Ca_V1.2钙通道CT3蛋白片段提取与纯化的方法。方法将CT3的cDNA插入pG EX-6p-3质粒载体后,转化大肠杆菌BL-21感受态细胞,大量培养并利用异丙基硫代-β-D半乳糖苷(IPTG)诱导CT3的GST融合蛋白表达,并采用超声破碎法进行分离纯化,在10mmol/L二硫苏糖醇(DL-dithiothreitol,DTT)存在的情况下,PreScission蛋白酶切除GST标签,凝胶电泳鉴定CT3蛋白,检测蛋白纯度和相对分子质量。结果 SDSPAGE结果显示,超声破碎法可以纯化得到GST-CT3融合蛋白,且单纯应用PreScission蛋白酶酶切GST-CT3,得到的CT3蛋白片段浓度较低,而采用PreS cission蛋白酶联合应用DTT则可以成功提取纯化出浓度较高的CT3蛋白片段。结论超声破碎法联合应用DTT与PreScission蛋白酶能够提取纯化出高浓度和纯度的CT3蛋白片段,为深入研究CT3的生物学功能奠定了基础。