谷氨酰胺对脂多糖诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用

目的观察谷氨酰胺(Gln)对脂多糖(LPS)诱导鼠心肌细胞损伤的保护作用及可能机制。方法乳鼠心肌细胞原代培养分成四组:G组,给予5mMGln;GL组,给予5mMGln+4μg/mlLPS;L组,给予4μg/mlLPS;C组(对照组)给予等量双蒸水。细胞干预处理6h后,测定各组心肌细胞生存率、心肌细胞培养液乳酸脱氢酶(LDH)活力、心肌细胞热休克蛋白(HSP)70及胞核热休克因子(HSF)-1蛋白水平和心肌细胞核HSF-1转录活性。结果四组心肌细胞生存率差异无统计学意义。GL组、L组细胞培养液LDH活力明显高于C组(P<0.05),L组高于GL组。G、GL、L组细胞HSP70蛋白表达水平、细胞核HSF-1蛋白表达水平及转录活性明显高于C组(P<0.05),GL组明显高于G组和L组(P<0.05)。结论Gln减少LPS诱导鼠心肌细胞的损伤,可能与Gln增加心肌细胞核内HSF-1水平及转录活性,进而促进HSP70蛋白表达有关。

O-GlcNAc修饰在谷氨酰胺诱导LPS干预的大鼠心肌细胞HSP70表达中的作用

目的 探讨O位-N-乙酰葡萄糖胺（O-GlcNAc）修饰在谷氨酰胺（Gln）诱导LPS干预的大鼠心肌细胞热休克蛋白70（HSP70）表达中的作用.方法 出生48 h的SD大鼠,原代培养心肌细胞,随机分为6组,每组11瓶（1×106个,瓶）：对照组（C组）加入双蒸水25 μl;Gln组加入Gln,终浓度5 mmol/L;LPS组加入LPS,终浓度4 μg/ml;Gin＋LPS组依次加入Gln和LPS,Gin终浓度5 mmol/L,LPS 终浓度4 μg/ml;Gln＋LPS＋Alloxan组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖转移酶抑制剂Alloxan,Gln和LPS终浓度与Gln＋LPS组相同,Alloxan终浓度1 mmol/L;Gln＋LPS＋PUGNAc组依次加入Gln、LPS和O位-N-乙酰氨基葡萄糖苷酶抑制剂PUGNAc,Gln和LPS终浓度与Gln＋LPS组相同,PUGNAc终浓度100 μmol/L.各组孵育6 h后测定心肌细胞存活率、O-GlcNAc和HSP70的表达水平.结果 各组大鼠心肌细胞存活率比较差异无统计学意义（P〉0.05）;与C组比较,其余组心肌细胞0.GlcNAc和HSP70的表达上调（P〈0.05）;与LPS组比较,Gln＋LPS组和Gln＋LPS＋PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调（P〈0.05）;与Gln＋LPS组比较,Gin＋LPS＋Alloxan组心肌细胞0-GlcNAc和HSP70的表达下调,Gln＋LPS＋PUGNAc组心肌细胞O-GlcNAc和HSP70的表达上调（P〈0.05）.结论 Gln诱导LPS干预大鼠心肌细胞HSPT0表达上调的机制可能与O-GlcNAc修饰有关.

P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用

目的 探讨P2X受体在大鼠海马氧糖缺失时IL-1β合成和释放中的作用.方法 成年雄性SD大鼠,体重150～200 g,制备海马脑片,取160张,随机分为4组（n=40）,C组：用95%O2-5%CO2饱和aCSF孵育;OGD组：脑片移至经95%N2-5%CO2饱和的无糖aCSF中,并置于持续通入95%N2-5%CO2的容器内进行氧糖缺失处理;BBG组：脑片移至含P2X7受体特异性拮抗剂亮蓝G（BBG,终浓度1μmol/L）的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中,孵育20 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1 μmol/L的BBG;OP组：脑片移至加入P2X4受体单克隆抗体（终浓度1.5μg/ml）的经95%O2-5%CO2饱和的aCSF中孵育60 min,随后进行氧糖缺失处理,无糖aCSF中加入终浓度1.5 μg/ml的P2X4受体单克隆抗体.于氧糖缺失前及氧糖缺失20、40和60 min时测定LDH和IL-1β的释放量,并观察病理学结果.于氧糖缺失60 min时测定细胞内IL-1β前体蛋白（pro-IL-1β）的表达水平.结果 与C组比较,其余各组LDH和IL-1β释放量升高,细胞内pro-IL-1β表达上调（P＜0.05）;与OGD组比较,BBG组LDH和IL-1β释放量降低,细胞内pro-IL-1β表达上调（P＜0.05）,OP组上述指标差异无统计学意义（P＞0.05）.结论 P2X7受体介导了大鼠海马氧糖缺失时IL-1β的合成和释放,而P2X4受体没有介导IL-1β的合成和释放.