维生素K_2对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长抑制作用及其机理研究

为了探讨维生素K2(VK2)对骨髓增生异常综合征细胞株MDSJSN04生长的抑制作用及其作用机制,采用细胞形态学方法观察VK2处理后细胞形态的改变;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VK2对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡、细胞周期变化和髓系分化抗原CD11b、CD13的表达情况;RTPCR技术检测抗凋亡基因bcl2、survivin和促凋亡基因bax的表达;用发光比色法检测caspase3活性。结果表明:VK2作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增高,经统计学处理与对照组比较有显著性差异(P<0.01);S期和G2期细胞随着药物浓度的增加而逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期,而且在G0/G1期前出现明显的亚G1期细胞即凋亡峰;抗凋亡基因bcl2、survivin表达随着VK2浓度的增高而明显下调((P<0.05),而促凋亡基因bax表达无明显变化((P>0.05),caspase3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论:VK2主要是通过激活caspase3途径诱导MDSJSN04细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl2和survivin也参与了凋亡调控过程。

江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

目的分析江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及单倍型,为研究K IR基因与疾病相关性提供依据。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对江苏地区163名汉族献血员进行K IR基因低分辨率检测和基因型、单倍型分析。结果共检出除框架基因及假基因外的12个K IR基因,其中2DL1和2DL3存在于所有个体,3DL1和2DS4较为常见;其次为1D、2DL5、2DS1、3DS1及2DS5;2DS2、2DL2及2DS3基因频率较低;检出的17种基因型中,以AJ(2,2)和AF(1,2)型最为常见,其次为AH(5,2)和AG(1,1)型。有3种基因型(New1、New11及New19)在白人中未见报道,其中New19国内未见报道;163例个体中明确检出9种单倍型,最常见的是单倍型2,其次是单倍型1。结论江苏地区汉族人群有其独特的K IR基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

乙肝患者体内HBV复制与肝损伤的相关性探讨

目的探讨乙型肝炎(乙肝)患者体内病毒复制与肝损伤的关系。方法取400份住院乙肝患者血清,测定HBV-DNA水平、乙肝病毒血清标志物(HBV-M)及肝功指标ALT及AST。分析各指标间的相关性。结果HBeAg阳性患者HBV-DNA水平明显高于HBeAg阴性患者,P<0.05;二者的HBV-DNA水平与ALT及AST均无显著差异;大三阳与小三阳患者HBV-DNA水平与ALT及AST亦均无显著性差异。结论乙肝患者HBV-DNA水平与肝损伤程度无明显相关性。

2-甲氧基雌二醇对MUTZ-1细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响

目的探讨在2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS）MUTZ-1细胞凋亡中活性氧（ROS）和线粒体膜电位（△ψm）的作用及其作用机制。方法MUTZ-1细胞与不同浓度2-ME共育，FCM分析荧光探针DCFH-DA标记后细胞内ROS和荧光探针JC-1标记后细胞△ψm的变化。加入抗氧化剂过氧化氢酶（CAT）后，MUTZ-1细胞内相应指标的变化。结果经1-4μmol／L 2-ME作用MUTZ-1细胞12h，与对照组相比，细胞内ROS升高（F=102．56，P〈0.05）和细胞△ψm下调（F=108．02，P〈0．05），且MUTZ-1细胞△ψm下降与细胞内ROS升高成正相关（r=0．981，P=0．019）。CAT能够明显抑制2-ME诱导MUTZ-1细胞内ROS升高（F=68．26，P〈0．01）和细胞△ψm下调（F=55．29，P〈0.01）。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡，可能与2-ME刺激细胞内ROS积聚过多、损伤线粒体结构的完整性以及降低细胞线粒体膜电位有关。

骨髓增生异常综合征的免疫治疗进展

骨髓增生异常综合征 (MDS)是一组起源于造血干细胞 祖细胞的获得性克隆性疾病。造血细胞发育异常导致髓内无效造血 ,患者骨髓增生而外周血细胞减少 ,多种免疫机制异常在其发病中起重要作用。本文综述了近年来MDS的免疫治疗研究进展。

维生素K_2诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的对维生素K2(VitK2)诱导慢性粒细胞白血病(CML)急变细胞株K562细胞凋亡进行检测。方法取对数生长期细胞(1×108/L),对照组不加药,实验组分别加入不同浓度(5、10、20和40μmol/L)VitK2后24、48、72和96h收集细胞,采用透射电镜技术、流式细胞术、RT-PCR以及化学发光比色法等多参数分析细胞凋亡及其机制。结果VitK2作用K562细胞72h后,电镜下可见典型的凋亡细胞的形态改变;流式细胞仪分析结果显示随着VitK2浓度的增加和作用时间的延长,凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖性;S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,细胞被阻滞在G0/G1期。随着VitK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2、survivin表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的活性逐渐增强。结论VitK2可能是通过激活caspase-3途径诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因survivin、bcl-2也参与了凋亡调控过程。

羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞体外作用的研究

目的观察羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征(MDS)MUTZ-1细胞体外生长的影响。方法采用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法,测定羟基喜树碱对人骨髓增生异常综合征MUTZ-1细胞生长的抑制作用,并绘制浓度抑制率曲线;采用流式细胞技术检测药物诱导的凋亡细胞量;光镜及透射电镜观察羟基喜树碱处理后细胞形态学的变化。结果羟基喜树碱对MUTZ-1细胞生长抑制作用呈现剂量和时间依赖性,其作用不同时间的半数抑制浓度(IC50)分别为91.198、8.983、6.204、2.509、0.364。羟基喜树碱可诱导MUTZ-1细胞凋亡,呈现剂量依赖性。光镜下可见凋亡细胞胞膜完整、胞体固缩、核固缩、核染色质碎裂;透射电镜下可见凋亡细胞核染色质凝聚、边集,部分细胞核膜消失,细胞浆浓缩、密度增加,浆内可见大小不规则的染色质团块。结论羟基喜树碱对MUTZ-1细胞生长有明显的抑制作用,并可诱导MUTZ-1细胞凋亡。

凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K_2诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制。方法采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bc l-2和bax的表达。结果40μmol.L-1VK2作用HL-60细胞72 h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bc l-2表达明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P>0.05)。结论VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bc l-2 mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一。

类风湿性关节炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性分析

目的分析类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性,探讨其与类风湿性关节炎发病之间的关联。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析90例RA患者和200例健康对照组KIR基因。结果通过对RA病例组与正常对照组的9种KIR基因的分析,比较其基因频率发现:RA病例组KIR2DS4的基因频率显著低于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义;其余各基因频率与对照组相比,P>0.05,差异无统计学意义。结论RA患者KIR2DS4基因可能与RA发病有关。

干燥综合征患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性分析

目的探讨干燥综合征(SS)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体(KIR)基因多态性。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析73例SS患者和195例无血缘关系的健康对照组KIR基因。结果SS组以KIR3DL1+,3DS1-,2DS5-,2DL3+,2DS3-,2DL5-,2DL1+,2DS2-,2DL2-,2DS4+,1D+,2DS1-为主,占15.07%,与对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);对照组以KIR3DL1+,3DS1-,2DS5-,2DL3+,2DS3-,2DL5-,2DL1+,2DS2-,2DL2-,2DS4+,1D-,2DS1-为主,占25.13%,与SS组比较,差异具有统计学意义(P<0.05)。KIR基因组合3DL1+2DL2-,2DS5+2DS1-,2DL5+2DS1-,2DS4-2DS1-在两组间的差异均具有统计学意义(P<0.05)。结论部分KIR基因及两两基因型组合的分布差异可能与SS发病有关。

羟基喜树碱诱导人骨髓增生异常综合征细胞系MUTZ-1细胞凋亡及机制的研究

骨髓增生异常综合征（MDS）是造血干细胞克隆增生性疾病，近来发病率有上升趋势，需要不断探索有效的治疗药物。从珙桐科植物喜树中分离出的羟基喜树碱（HCPT）可诱导多种肿瘤细胞凋亡，对MDS的治疗未见相关报道。我们初步研究了HCPT对MDS细胞系MUTZ-1细胞的凋亡诱导作用及机制，以期为临床MDS治疗提供一定参考。

荧光探针JC-1检测骨髓增生异常综合征细胞凋亡早期线粒体膜电位的变化

目的探讨荧光探针JC-1在检测细胞凋亡早期线粒体膜电位(△Ψm)中的应用。方法2-甲氧基雌二醇(2-ME)诱导骨髓增生异常综合征细胞株 MUTZ-1细胞凋亡,利用新型荧光探针 JC-1标记 MUTZ-1细胞,在 FACS Calibur 流式细胞仪(FCM)上检测细胞内 JC-1荧光强度的变化;在荧光显微镜下观察和计数细胞内 JC-1荧光颜色的改变。结果对照组 MUTZ-1细胞线粒体△Ψm维持较高,JC-1在线粒体内形成聚合物,发出橘红色荧光;用药组 MUTZ-1细胞线粒体△Ψm下降,JC-1聚合物分解成单体,发出绿色荧光。MUTZ-I 细胞线粒体△Ψm的下降随着时间延长而逐渐增强,与对照组相比差异有统计学意义(P<0.01);随着药物浓度的增加,细胞线粒体△Ψm下降增强,在4 μmol/L时线粒体△Ψm下降达到最大值,以后线粒体ΔΨm下降趋势减缓。结论荧光探针 JC-1结合 FCM和荧光显微镜可以准确、直观地检测凋亡早期线粒体ΔΨm的变化,为2-ME 诱导 MUTZ-1细胞凋亡机制的研究提供了重要手段。

SLE患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因相关性分析

SLE是一种慢性自身免疫病。遗传和环境因素及机体免疫状态在其发病中占重要地位。免疫系统中T淋巴细胞和自然杀伤（NK）细胞功能异常与其发生发展密切相关^[1]。杀伤细胞免疫球蛋白样受体（KIR）主要表达于NK细胞和部分T淋巴细胞表面，具有高度多态性。KIR可与HLAI类分子特异性结合，调节NK细胞和T淋巴细胞活性，

纳米三硫化二砷对人骨髓增生异常综合征细胞株MUTZ-1作用的实验研究

目的探讨纳米三硫化三砷（As2S2）与传统剂型As2S3对人骨髓增生异常综合征（MDS）细胞株MUTZ-1的生长抑制作用及其可能的机制。方法用MTT法比较两种剂型的As2S3对MUTZ-1细胞的生长抑制作用；透射电子显微镜技术分析细胞形态和超微结构的变化；流式细胞术分析细胞凋亡和周期的改变；发光比色法分析oaspase-3活性。结果2、4、8、16μmol／L两种剂型As2S3分别处理MUTZ-1细胞48h后，纳米As2S3对细胞的抑制率分别为48．9％、75．9％、89．4％和96．5％，而传统剂型As2S3组分别为14．5％、25．4％、34．7％和51．5％，曲组相比差异有统计学意义（P值均〈0．01）；纳米As2S3组细胞凋亡率分别为（12．9±1．9）％、（19．2±2．2）％、（30．1±2．5）％和（45．9±2．3）％，而传统剂型As2S3组分别为（5．3±1．8）％、（11．1±2．6）％、（19．3±2．3）％和（25．5±2．5）％，两组相比差异也有统计学意义（P值均〈0．01）；纳米As2S3组G2／M期细胞比例、caspase-3活性明显高于传统剂型As2S3组（P〈0．01），且以上各指标均呈浓度-时间依赖性。结论两种剂型As2S3对MUTZ-1细胞均有生长抑制和诱导凋亡作用，其机制可能与G2／M期细胞阻滞以及caspase-3活化有关；与传统剂型的As2S3相比，纳米As2S3有更强的抗肿瘤作用。