一种玻璃载片共价键固定DNA的新方法

目的 :建立了一种简单、快速、高效共价固定DNA到玻璃基质上的方法 .方法 :玻片用β - (对、间氯甲基苯基 )三氯硅乙烷处理在表面自组装形成带有苄氯功能基的单层硅烷膜 ,然后再用NaI丙酮溶液处理将苄氯基转化为苄碘基 .巯基修饰的DNA通过巯基与苄碘基反应形成硫醚键共价偶联到这一自组装的硅烷膜上 结果 :放射性分析证实玻璃基质表面共价固定DNA的密度为3.2nmol/m2 .用放射性标记的目标DNA进行杂交试验表明最大杂交密度为 0 77nmol/m2 .结论 :本方法只需一步偶联反应 ,反应时间短、偶联效率高、操作简单、不需要严格的试剂 ,而且制得的DNA芯片有较高的温度稳定性 ,可方便地用于核酸杂交和探测研究 .

在载玻片上制备高杂交效率的DNA芯片

目的 :改进玻璃基质上固定DNA的方法 ,提高固定DNA的杂交效率 .方法 :玻片用 β -(对、间氯甲基苯基 )三氯硅乙烷和 β -苯基三氯硅乙烷二组分混合硅烷化试剂处理 ,再用NaI丙酮溶液处理 ,在表面自组装形成带有苄碘功能基的二组分混合单层硅烷膜 .巯基修饰的DNA共价偶联到这一自组装的硅烷膜上 .结果 :放射性分析证实玻璃基质表面共价固定DNA的优化密度为9 3× 10 - 2 μmol/m2 ,目标DNA杂交密度为 8.6× 10 - 2 μmol/m2 ,固定DNA的杂交率为 93% .结论 :采用两步竞争性反应的方法能够较容易地控制DNA在芯片上的固定密度 ,固定的DNA在芯片分布较均匀 ,因此制得的DNA芯片具有较高杂交效率和杂交密度 。