免疫金银染色法在蛋白质微阵列检测TORCH感染的实验研究

目的研制基于免疫金银染色法的TORCH检测蛋白质微阵列。方法将TORCH抗原点样于已经被琼脂糖膜修饰的玻片表面,与待测血清和胶体金标记的抗人IgM(μ链)孵育,用银增强微阵列信号,肉眼观察或普通的平板扫描仪记录结果。以不同浓度的纯化人IgM制备标准曲线。结果蛋白质微阵列的灰度质和IgM的浓度呈线性关系。60份待测血清与ELISA法同时检测,诊断符合率为93.3%。结论该法具有高信息通量、低成本、制备与检测快速简单的优点。

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎后引起的HBV YMDD变异

目的 建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断方法。方法 设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特别处理芯片载体 ,用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。选择 30例服用拉米夫定后 ,HBVDNA转阴 ( <5 0 0copies/ml) ,6 8周后又反跳≥ 5 0 0copies/ml的病人进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异11例 ,YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果为有核苷酸A741变为G ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为缬氨酸 (氨基酸基序由YMDD变为YVDD) ,6例核苷酸A669变为C ,氨基酸由亮氨酸5 2 8变为蛋氨酸 ;核苷酸G743 变为T ,使氨基酸由蛋氨酸 5 5 2变为异亮氨酸。 (氨基酸基序由YMDD变为YIDD)。其中有 3例伴有核苷酸T781变为C ,使氨基酸由亮氨酸 5 6 5变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,与PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 %。

细胞色素CYP450 2E1基因Ras Ⅰ/Pst Ⅰ位点多态性与肺癌易感性的系统评价

目的:利用Meta分析的方法系统评价细胞色素CYP450 2E1基因RasⅠ/PstⅠ位点多态性与肺癌易感性的关系。方法:检索1991～2006年Cochrane图书馆、Medline、Elsevier、Ovid、Highwire Press、西文生物医学期刊文献数据库、中国期刊网、中国生物医学文献数据库、维普科技期刊全文数据库等,语种不限,获取有关细胞色素CYP2E1基因RsaⅠ/PstⅠ位点多态性与肺癌易感性的关系的研究结果,以病例组与对照组CYP2E1基因型分布的比值比(OR)为效应指标,确定纳入标准,对文献进行评价筛选,异质性检验,然后利用RevMan4.2软件对各研究原始结果进行统计处理,并计算合并OR值及其95%可信区间。结果:按照纳入标准,最终入选文献共有9篇病例对照研究,累计病例1123例,对照1434例,Meta分析结果合OR值为1.55,95%可信区间为1.30～1.86,Z值为4.84,说明细胞色素CYP450 2E1基因型频率分布与肺癌的关联有统计学意义。单纯病例研究分析示吸烟与CYP450 2E1c1/c1基因型交互作用OR值为0.73,95%可信区间是0.45～1.15,Z值为1.37,说明吸烟与CYP450 2E1c1/c1基因型之间交互作用无统计学意义。结论:对目前相关研究结果的Meta分析显示CYP2E1基因多态性与肺癌易感性之间存在一定相关性,即携带RasⅠ/PstⅠ野生型CYP2E1基因纯合子的个体发生肺癌的危险性较高,但与吸烟的交互作用尚不确定。

基因芯片检测拉米夫定引起的乙型肝炎病毒基因YMDD变异的研究

目的:建立乙型肝炎病毒(HBV)变异基因诊断芯片,对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法:设计特异性寡核苷酸探针。用点样法制备HBV变异基因诊断芯片。选择住院患者30例服用拉米夫定后,HBVDNA转阴[<500拷贝(opies/ml)]68周后又反跳≥5000copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测。同时用PCR直接测序法对30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果:30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBVYMDD变异21例,其中YVDD变异11例,YIDD变异10例。直接序列测定发现有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸;核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。其结果与基因芯片完全一致。结论:HBV变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100%,无假阳性。

拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV YMDD变异及基因芯片检测

建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测方法。设计特异性寡核苷酸探针数组 ,特殊处理芯片载体。用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。在本院住院治疗病人中选择 3 0例服用拉米夫定后 ,可能出现YMDD变异的病人进行基因芯片杂交检测分析 ;同时用PCR直接测序法对上述 3 0例病人血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。 3 0例服药后HBVDNA反跳病人中 ,基因芯片测得HBVYMDD变异 2 1例 ,其中YVDD变异 11例。YIDD变异 10例。HBVDNAPCR直接序列测定结果与基因芯片检测结果完全一致。乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD、YIDD变异 ,同PCR直接测序法比较 ,准确率达 10 0 % 。

DNA芯片检测肝组织及血清中乙型肝炎病毒DNA的临床研究

目的 研究DNA芯片检测乙型肝炎和肝硬化患者肝组织及血清中乙型肝炎病毒(HBV)DNA的应用价值。方法 用点样仪将聚合酶链反应 (PCR)扩增的HBVDNA探针制成基因芯片。对 15例慢性乙型肝炎病人的血清和肝活检组织 ,99例乙型肝炎后肝硬化肝组织 ,分别用基因芯片、原位分子杂交、免疫组织化学和雅培试剂检测HBVDNA、乙型肝炎核心抗原 (HBcAg)、乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)和乙型肝炎e抗原 (HBeAg)。结果 用基因芯片对 15份HBsAg、HBeAg阳性的乙型肝炎患者血清进行检测 ,HBVDNA均阳性 ,阳性率符合率为 10 0 % ;15份肝活检组织标本 ,免疫组化法检测HBcAg阳性 15例 ,原位分子杂交法和基因芯片检测HBVDNA均阳性 14例 ,阳性率 93%。 99份肝炎后肝硬化患者肝组织标本 ,HBcAg阳性 6 7份 ,HBVDNA阳性 5 3份 ,基因芯片检测HBVDNA阳性 46份 ,阳性率分别为 6 9%、88%。 32例HBcAg、HBVDNA阴性的肝组织中 ,基因芯片检测HBVDNA均为阴性。结论 肝炎基因诊断芯片可检测肝组织及血清中HBVDNA ,诊断准确率高 ,假阳性率低。

基因芯片检测拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中HBV变异技术的建立和应用

目的建立乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片对拉米夫定治疗慢性乙型肝炎过程中出现的肝炎病毒P基因区YMDD变异进行快速准确的检测诊断。方法设计特异性寡核苷酸探针阵列,特殊处理芯片载体。用点样法制备乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片。在本院住院治疗患者中选择30例服用拉米夫定后,HBV DNA转阴(<500 copies/ml)168周后又反跳≥5 000 copies/ml的患者进行基因芯片杂交检测分析。同时用PCR直接测序法对上述30例患者血清标本进行双盲HBVDNA聚合酶活性区域测序对照。结果 30例服药后HBVDNA反跳患者中基因芯片测得HBV YMDD变异21例,其中YVDD变异11例。YIDD变异10例。HBVDNA PCR直接序列测定结果,有核苷酸A741变为G,使氨基酸由蛋氨酸552变为缬氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YVDD)11例,并有6例核苷酸A669变为C,使氨基酸由亮氨酸528变为蛋氨酸。核苷酸G743变为T,使氨基酸由蛋氨酸552变为异亮氨酸(氨基酸基序由YMDD变为YIDD)10例。其中有3例伴有核苷酸T781变为C,使氨基酸由亮氨酸565变为脯氨酸。标本阳性变异序号与基因芯片检测结果完全一致。结论 乙型肝炎病毒变异基因诊断芯片可以同时检测YVDD,YIDD变异,同PCR直接测序法比较,准确率达100％,无假阳性。

肝炎基因诊断芯片对丙型肝炎病毒基因分型检测的初步研究

目的 研究丙型肝炎病毒 (HCV)基因分型诊断芯片的制备和其对丙型肝炎患者血清HCVRNA基因分型诊断的准确性。方法 根据丙型肝炎病毒 5′端非编码区末端 (5UTR)和C区设计引物和特异性探针 ,将设计的 2 0条特异性寡核苷酸探针用核苷酸合成仪合成后 ,配制成浓度为 5 0μmol/ml的点样液 ,用点样仪点到特殊处理的玻片介质上 ,制成丙型肝炎病毒基因分型诊断芯片。收集HCVRNA阳性的丙型肝炎患者血清 6 0份作为实验组 ,健康人血清 6 0份作为对照组。用荧光定量PCR仪对两组血清进行HCVRNA定量检测 ,实验组血清HCVRNA含量均大于 5 0 0拷贝 /ml,对照组血清HCVRNA含量均小于 5 0 0拷贝 /ml。两组血清进行HCVRNA分离纯化、逆转录反应、巢式PCR扩增后 ,分别用基因芯片、HCVRNA核酸序列测定法 (美国Li Cor核酸序列测定仪 )进行双盲丙型肝炎基因分型检测。结果 实验组血清基因诊断芯片检测均为阳性 ;基因分型 :1b型 4 6例 ,3a型 3例 ,3b型 3例 ,2a型 2例 ,2b型 2例 ,混合型 1b +2a 2例 ,1b +3b型 2例 ;核酸序列测定分型 1b型 5 0例 ,3a型 3例 ,3b型 3例 ,2a型 2例 ,2b型 2例 ;基因诊断芯片检测和核酸序列测定检测的基因分型结果符合率为 93.3%。对照组血清基因芯片检测均阴性。

基因芯片检测拉米夫定治疗后乙型肝炎病毒变异

拉米夫定是一种对乙型肝炎病毒(HBV)DNA复制有很强抑制作用的核苷类似物,目前已广泛应用于临床,但其会引起HBV DNA聚合酶活性区发生变异(YMDD变异),而影响其治疗效果或加重病情.