荧光法检测外周血DNA对恶性肿瘤的诊断价值

目的评价外周血DNA荧光强度对恶性肿瘤诊断的临床价值。方法用微量基因组抽提试剂盒抽提58例恶性肿瘤、14例良性肿瘤、38例正常人外周血DNA后,应用镧系离子荧光分析法检测外周血DNA荧光强度。结果恶性肿瘤、良性肿瘤、正常者外周血DNA荧光强度分别为345.645±28.004、307.191±27.344、276.152±29.442。恶性肿瘤外周血荧光强度明显高于良性肿瘤(P<0.05)及正常人(P<0.001)。在58例恶性肿瘤中,不同恶性肿瘤及不同临床肿瘤分期之间荧光强度无显著性差别。结论外周血DNA荧光检测对于恶性肿瘤的诊断具有一定的价值,但还需进行进一步临床研究加以验证。

拓扑异构酶Ⅱ与肿瘤化疗

DNA拓扑异构酶Ⅱ(topoisomeraseⅡ,TopoⅡ)是一种调整DNA拓扑结构的核酶,在几乎所有DNA代谢过程中发挥重要作用,已成为抗癌药物的重要作用靶点。作者介绍了TopoⅡ抑制剂的作用机制及其与肿瘤耐药关系方面的研究进展。

藤黄酸对白血病K562/A02细胞的耐药逆转作用

本研究旨在探讨藤黄酸(gambogic acid,GA)对K562/A02细胞株的耐药逆转作用及其逆转机制。采用MTT法检测GA对K562和K562/A02细胞的增殖抑制作用及对K562/A02细胞阿霉素(ADM)耐药逆转效应;用流式细胞术检测GA联合ADM对K562及K562/A02细胞凋亡率的影响;DAPI荧光染色观察ADM联合GA作用后细胞的形态学改变;Western blot法检测K562及K562/A02细胞P-糖蛋白(P-gp)、存活蛋白(Survivin)基因的表达。结果表明:ADM作用48 h抑制K562和K562/A02细胞增殖的IC50值分别为(1.42±0.07)μg/ml和(28.42±1.40)μg/ml。GA≤0.0625μmol/L时,对K562及K562/A02细胞株无明显增殖抑制作用;0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞能增加其对ADM的敏感性,耐药逆转倍数为1.53。0.0625μmol/L GA联合ADM作用于K562/A02细胞48 h能提高细胞的凋亡率(P<0.05),下调Survivin及P-gp蛋白的表达(P<0.05)。结论:GA可以逆转K562/A02细胞的耐药性,增强耐药细胞对ADM的敏感性,其机制可能与提高K562/A02细胞凋亡、下调Survivin和P-gp蛋白的表达有关。

汉防己甲素与5-溴汉防己甲素逆转耐药机制与降低MRP7表达水平有关(英文)

本研究的目的是探索汉防己甲素(Tet)与5-溴汉防己甲素(BrTet)逆转耐药的机制是否与调节多药耐药相关蛋白7(MRP7)表达水平有关。采用MTT法检测柔红霉素(DNR)对人白血病敏感细胞株K562与人白血病耐药细胞株K562/A02细胞增殖的抑制作用,计算半数抑制浓度(IC50)及耐药倍数。将细胞分组,加入BrTet、Tet,用实时PCR法检测细胞MRP7 mRNA表达,Western bolt法检测细胞MRP7蛋白和P-糖蛋白(P-gp)的表达,流式细胞术检测细胞内DNR蓄积。结果表明:K562/A02对DNR的耐药倍数为23.65倍。分别加入1μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet后,K562/A02细胞的MRP7 mRNA相对表达水平分别降低至2%和12%,MRP7蛋白表达降低了53.2%与83.7%,P-gp表达分别下调58.47%与52.20%;1.0μmol/L Tet与2.0μmol/L BrTet分别使K562/A02细胞内DNR提高了94.32%与271%。结论:BrTet与Tet均可逆转耐药,其逆转机制除了抑制P-gp的表达之外,还可能与抑制MRP7的表达,增加肿瘤细胞内抗肿瘤药物浓度有关。在相同摩尔浓度下,Tet与BrTet对MRP7表达的下调作用无显著性差异。

低剂量紫杉醇持续静脉滴注联合顺铂治疗晚期非小细胞肺癌疗效观察

目的:观察低剂量紫杉醇(PTX)持续静脉滴注联合顺铂(DDP)治疗晚期非小细胞肺癌(NSCLC)的疗效和毒性。方法:纤维支气管镜检查经病理组织学或细胞学证实的32例晚期NSCLC患者,均采用低剂量PTX持续静脉输注联合DDP方案化疗,具体:PTX25mg·m-2·d-1,d1～3、d8～10,静脉滴注16h;DDP75mg·m-2,d1～3、d8～10,静脉滴注,21d为1个疗程,连用2个疗程。结果:32例均可评价疗效,总有效率(完全缓解加部分缓解)为43.8%,而初治患者总有效率高于复治患者,分别为50.0%(9/18)和35.7%(5/14),但差异无统计学意义(P>0.05)。毒副作用主要表现为骨髓抑制、脱发和乏力,其他毒副作用较轻,均在可耐受的范围内。结论:低剂量PTX持续静脉输注联合DDP治疗NSCLC疗效较好,毒副作用可以耐受,值得进一步研究。

XPA单核苷酸多态与晚期非小细胞肺癌对铂类药物化疗敏感性的相关性研究

目的：DNA修复能力与肿瘤细胞对铂类药物的敏感性密切相关。该研究利用一种新型单核苷酸多态性（SNP）的检测方法，探讨DNA修复基因XPA的SNP与非小细胞肺癌（NSCLC）患者对顺铂（ciaplatin）或卡铂（carboplatin）为主的化疗方案敏感性的关系。方法：经病理学确诊的晚期NSCLC患者96例，采用顺铂或卡铂为主的方案化疗，2～3个周期后进行临床疗效评价。根据cDNA芯片原理制作一种目的基因芯片，利用双色荧光探针杂交进行咒蹦的A23G多态的基因分型，比较不同基因型对化疗敏感性的影响。组间比较采用χ^2检验，比值比（OR）及其95％可信区间（CI）由logistic回归模型计算。结果：成功进行基因分型，野生型、杂合型和突变型的叠加荧光分别显示为绿色、黄色和红色。携带咒蹦23A／A、A／G和G／G基因型的患者，化疗有效率（完全缓解＋部分缓解）分别为35．7％、46．9％和16．7％，差异有显著性统计学意义（P〈0．05）；携带G／G基因型患者的化疗失败风险是携带至少1个A等位基因（A／G和A/A基因型）个体的3．57倍；但G等位基因携带者的疗效与A等位基因携带者的相似，差异无统计学意义（30．9％ vs 41．7％，P=0．2045）。结论：该芯片检测方法准确、高通量且价格低廉，适用于大规模样本SNP调查；XPA基因多态与NSCLC患者对铂类药物化疗的敏感性相关。

重组人生长激素促进肝癌血管新生的体外研究

目的:观察重组人生长激素(rhGH)通过不同生长激素受体(GHR)表达的肝癌细胞株,对共培养的人脐静脉内皮细胞(ECV)增殖的影响。方法:用免疫细胞化学方法筛选GHR阳性和阴性的细胞株,分别与ECV共培养。以不同浓度的rhGH(50和250 ng/mL、空白对照)进行干预。用流式细胞仪检测细胞周期比例,ELISA法测定肝癌细胞分泌的血管内皮生长因子(VEGF)的浓度,描绘细胞生长曲线。结果:Bel-7402(GHR阳性)在rhGH干预后分泌VEGF水平提高,与之共培养的ECV生长加速,细胞S期比例显著升高,呈现rhGH浓度依赖性(P<0.05)。而SMMC-7721(GHR阴性)虽能促进ECV增殖,但不受rhGH影响,分泌的VEGF无变化(P>0.05)。结论:rhGH可诱导GHR(+)肝癌细胞分泌VEGF,间接促进血管内皮细胞增殖。

脑胶质瘤放射敏感性基因研究的进展

脑胶质瘤是颅内常见的恶性肿瘤之一。在脑胶质瘤的综合治疗方法中,放射治疗与手术治疗一样占有重要地位。脑胶质瘤对放射线的敏感程度直接影响放射治疗疗效。脑胶质瘤内在的放射敏感性基因及其引起的细胞凋亡、细胞周期的变化和放射线导致的DNA损伤修复等,都与脑胶质瘤的放射敏感性密切相关。与细胞凋亡相关基因和DNA修复相关基因相关的脑胶质瘤放射敏感性基因,正逐渐成为人们研究的热点,还有其他的一些脑胶质瘤放射敏感性基因也受到人们的关注。现就脑胶质瘤放射敏感性基因研究的现状和进展作一综述。

DNA修复基因ERCC1单核苷酸多态性与非小细胞肺癌铂类药物化疗预后关系的研究

目的探讨DNA修复基因ERCC1单核苷酸多态性（SNP）与非小细胞肺癌（NSCLC）铂类药物化疗后的预后关系。方法经病理学确诊的晚期NSCLC患者120例，采用铂类为主的两药联合化疗方案，化疗前采集患者外周血。采用基因芯片法检测ERCC1（118）、（504）的SNP，并随机抽取10％的样本进行基因测序来验证该方法的准确性，比较不同基因型与铂类药物化疗后生存期的关系。结果成功进行基因分型，野生型、杂合型和突变型的叠加荧光分别显示为绿色、黄色和红色，与基冈测序结果完全吻合。中位随访时间11个月。携带ERCCl（118）C／C、C／T＋rr／T基凶型患者铂类药物化疗后中位牛存期（MSq、），1年、2年及3年牛存率分别为10．9个月、35．9％、6．3％、1．6％和13．5个月、59．5％、19．0％、14．3％，2组间差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01）；携带ERCC1（504）C／C基因型、C／A＋，A／A基因型1年生仔率、2年牛存率分别为66．7％、16．8％和31．3％、7．8％，2组间差异均有统计学意义（P〈0．05或P〈0．01），而MST和3年生存率2组间差异尤统计学意义（P〉0．05）。结论 该芯片检测方法准确，高通量，价卡2}低廉，适用于大规模样本SNP检测，ERCC1（118）基因多态性与NSCLC患者铂类约物化疗后的生存期有关，有可能作为铂类约物化疗后生存期的预测指标。

Caspase 3在大肠杆菌E.coliBL21中表达和活性的研究

目的:研究凋亡蛋白酶Caspase 3在大肠杆菌中的表达及活性。方法:用PCR法扩增出Caspase3基因cDNA,然后插入pCMV-Myc载体,扩增后克隆至表达载体pGEX-6p,使用异丙基硫代-β-D-半乳糖苷(IPTG)诱导Caspase 3蛋白的表达;应用SDS-PAGE和W estern b lot法鉴定其性质。结果:经测定诱导3 h后Caspase 3活性最高。结论:可在大肠杆菌E.coliBL21中诱导表达出有活性的Caspase 3,为研究其在细胞凋亡中的作用奠定了基础。

晚期糖基化终末产物和汉防己甲素对K562及K562/A02细胞增殖的影响

本研究旨在探讨晚期糖基化终末产物(AGE)对K562及K562/A02细胞增殖的影响及汉防己甲素(Tet)对AGE诱导细胞增殖的干预作用,并初步探讨其可能机制。用CCK8法观察AGE对K562及K562/A02细胞增殖及Tet对AGE诱导细胞增殖的影响,流式细胞术检测细胞凋亡率及晚期糖基化终末产物受体(RAGE)的表达,并用半定量RT-PCR检测RAGE mRNA相对表达水平。结果显示:AGE可促进K562及K562/A02细胞增殖,呈浓度依赖性,0-48 h内细胞增殖随时间延长而增强,72 h增殖仍明显高于对照组;AGE上调两种细胞RAGE mRNA及其蛋白的表达,具有浓度依赖性;Tet与AGE共作用于K562及K562/A02细胞48 h,可通过诱导细胞凋亡抑制AGE促细胞增殖的作用,且呈浓度依赖性,但Tet对AGE诱导RAGE mRNA及其蛋白表达的增加未见明显影响。结论:AGE可促进K562及K562/A02细胞增殖,其机制可能与上调细胞RGAE mRNA及其蛋白的表达有关;Tet可抑制AGE诱导的K562及K562/A02细胞增殖,其机制可能与改变AGE诱导的RGAE mRNA及其蛋白表达增加无关。

多药耐药相关蛋白及其与急性白血病的关系

多药耐药相关蛋白(MRP)是一类ATP依赖的外排泵,其表达异常与某些恶性肿瘤的多药耐药有密切的联系,是导致化疗失败的重要原因之一,但其表达与急性白血病的关系尚不能肯定,现有的实验及临床证据仍不足,需要进一步研究。本文简要综述了MRP的结构、分布、功能及其与急性白血病耐药性和预后的关系。

非小细胞肺癌中ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin表达相关性的研究

目的探讨ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin在肺癌中的表达相关性及其临床意义。方法选择接受手术切除并经病理证实的110例非小细胞肺癌(non-small cell lung cancer,NSCLC)患者的肿瘤组织和距肿瘤3 cm以上的癌旁正常肺组织,采用免疫组化SP法检测组织中ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达,并结合临床资料进行相关性分析。结果非小细胞肺癌组织中ETS-1与N-cadherin、Vimentin的阳性表达率分别为65%(72/110)、56%(62/110)、34%(37/110),明显高于正常癌旁肺组织的6%(3/50)、8%(4/50)、2%(1/50),组间差异具有统计学意义(P<0.01);E-cadherin的阳性表达率为41%(45/110),明显低于正常癌旁肺组织中的84%(42/50)。ETS-1的阳性率与淋巴结转移和TNM分期呈正相关(P<0.05),而与性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型及分化程度无关(P>0.05)。E-cadherin的阳性率与肿瘤分化程度、淋巴结转移和TNM分期呈负相关(P<0.05),N-cadherin和Vimentin的阳性率与肿瘤分化程度、淋巴结转移及TNM分期呈正相关(P<0.05),E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达与患者的性别、年龄、肿瘤直径、组织学类型无相关性(P>0.05)。在非小细胞肺癌中ETS-1与E-cadherin的表达呈负相关,ETS-1与N-cadherin的表达呈正相关。结论ETS-1与E-cadherin、N-cadherin、Vimentin的表达和非小细胞肺癌的转移密切相关,其检测可作为判断非小细胞肺癌转移和预后的指标之一。

化疗对肺癌患者血糖影响的临床观察

目的观察化疗对肺癌患者血糖代谢的影响。方法 200例肺癌患者(无糖尿病史者176例,有糖尿病史者24例),检测每周期化疗后及首次化疗前空腹血糖,对所得数据及相关临床资料进行分析。结果 176例无糖尿病组患者中,第1周期化疗末血糖均有所升高,但无统计学差异(P>0.05)。在小细胞癌患者中,第2周期化疗末血糖出现明显升高,且具有统计学差异(P<0.05)。腺癌和鳞癌患者,在第3周期化疗末出现血糖明显升高,且具有统计学差异(P<0.05)。糖尿病组24例,化疗过程中空腹血糖升高,且随着化疗次数增多,空腹血糖上升更明显,差异有统计学意义(P<0.05)。结论肺癌患者接受化学药物治疗后可能会出现空腹血糖升高,诱发糖尿病或加重糖尿病病情。

肿瘤组织中B7-H4的表达及意义

B7-H4是共刺激分子B7家族的新成员，B7-H4通过抑制T细胞的增殖、细胞因子的产生和细胞周期的进行对T细胞免疫进行负调控。近期研究表明，B7-H4与肿瘤的发生发展有着密切关系，是肿瘤诊断和治疗的重要指标。

消旋山莨菪碱在照射诱导肺上皮细胞损伤中的保护作用

目的探讨消旋山莨菪碱(654-2)对X射线诱导小鼠肺上皮细胞损伤的保护作用及潜在机制。方法利用小鼠肺泡上皮细胞MLE-12单次大剂量X线照射建立体外放射性肺损伤(RILI)模型,细胞分组为:对照组(未照射)、照射组(16 Gy照射)、处理1组(16 Gy照射+2μmol/L 654-2)、处理2组(16 Gy照射+10μmol/L 654-2)、抑制剂组(16 Gy照射+10μmol/L 654-2+2μmol/L ML385)。照射后不同时间点收集细胞进行相关检测。细胞衰老相关β-半乳糖苷酶(SA-β-Gal)染色检测细胞衰老;细胞集落形成能力检测观察细胞处理后的恢复能力;蛋白质印迹法检测p21、p16、磷酸化组蛋白H2AX(γH2AX)、核因子E2相关因子2(Nrf2)、Nrf2 Ser40位点磷酸化(p-Nrf2)、p62、血红素氧合酶1(HO-1)、NAD(P)H醌脱氢酶1(NQO1)等蛋白表达;流式细胞术检测细胞凋亡及细胞内总活性氧(ROS)产生;按照相关试剂盒检测谷胱甘肽(GSH)、超氧化物歧化酶(SOD);实时反转录PCR检测检测谷氨酸半胱氨酸连接酶催化亚基(GCLC)、谷氨酸半胱氨酸连接酶修饰亚基(GCLM)等mRNA表达情况。计量资料以xˉ±s表示,两组间比较采用独立样本t检验,多组间比较采用单因素方差分析。结果与照射组相比,处理1、2组细胞SA-β-Gal染色阳性细胞比例减少,细胞衰老减轻(P均<0.001)。与照射组相比,处理2组的γH2AX蛋白表达减少(P=0.037),细胞凋亡减少(P=0.026),细胞增殖能力增强(P=0.004),GSH(P=0.002)、SOD(P<0.001)活力提高,且ROS减少(P=0.001)。随着654-2的作用时间延长,MLE-12细胞的总蛋白中Nrf2、p-Nrf2的表达增强,同时Nrf2下游抗氧化蛋白NQO1及HO-1的表达增强,GCLC及GCLM mRNA表达增强。当加入Nrf2小分子抑制剂ML385后,抑制剂组的SA-β-Gal染色阳性细胞数(P=0.145)、ROS(P=0.317)与照射组的差异无统计学意义。结论654-2可以激活Nrf2通路,增强细胞抗氧化能力,抑制细胞衰老,从而发挥对RILI的保护作用。

汉防己甲素药理作用的研究进展(英文)

汉防己甲素(又称粉防己碱,Tetrandrine,Tet),是从防己科千金藤属植物粉防己的根块中提取出的一种双苄基异喹啉类生物碱,是粉防己的主要有效成分。Tet是一种钙离子拮抗剂,影响钙离子的跨膜转运以及自细胞内的分布利用。Tet可用于治疗高血压、矽肺和关节炎等。此外,Tet还具有保护肝细胞、抗肝纤维化、降低门静脉高压及防治门脉高压、抗肿瘤、逆转耐药等方面的作用。本文综述了近年来国内外对Tet的生物活性及药理活性方面的研究进展,使Tet的药用价值得到进一步的认识,提示了其具备很高的临床潜在价值,但它的抗肿瘤的作用机制及临床应用还需进行深入研究。

单核苷酸多态性与NSCLC铂类化疗敏感性的关系

目的探讨ERCC1(C118T)、XRCC1(G399A)的单核苷酸多态性(SNP)与非小细胞肺癌(NSCLC)对铂类为主化疗方案敏感性的关系。方法经病理学确诊的晚期NSCLC患者120例,采用铂类为主的两药联合化疗方案,2～3个周期后进行临床疗效评价。根据cDNA芯片原理制作目的基因芯片,利用双色荧光探针杂交进行ERCC1、XRCC1的多态性的基因分型,比较不同基因型与化疗敏感性的关系。结果 ERCC1(C118T)至少携带1个T等位基因型的患者化疗有效率为44.7%,显著高于C/C基因型的19.2%(P<0.05);携带XRCC1(G399A)G/G基因型者化疗有效率为43.8%,高于至少携带1个A等位基因的19.4%(P<0.05)。结论 ERCC1、XRCC1基因多态性与NSCLC患者对铂类药物化疗的敏感性相关。

迁延26年原发性骨髓纤维化转化为急性巨核细胞白血病一例分析及文献复习

目的探讨原发性骨髓纤维化转化为急性巨核细胞白血病患者临床表现、实验室检查特点及骨髓纤维化的预后因素。方法对病程迁延26年原发性骨髓纤维化转化为急性巨核细胞白血病老年患者1例临床资料进行分析，转变前后进行骨髓细胞形态学、细胞遗传学及JAK2V617F点突变检测；使用标准去甲氧柔红霉素＋阿糖胞苷、高三尖杉酯碱＋阿糖胞苷、米托蒽醌＋阿糖胞苷等方案序贯治疗。结果转变前后检测患者JAK2V617F点突变均为阳性，染色体均为正常核型。先后予以标准去甲氧柔红霉素＋阿糖胞苷、米托蒽醌＋阿糖胞苷、高三尖杉酯碱＋阿糖胞苷、吡柔比星＋阿糖胞苷等方案序贯治疗达到完全缓解后，至今生存良好。结论染色体核型与骨髓纤维化的预后相关，核型正常的骨髓纤维化转变为M7经合理化疗后仍能达到完全缓解。

低剂量紫杉醇联合顺铂和5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的疗效

目的观察低剂量紫杉醇联合顺铂和5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌的疗效及安全性。方法 45例晚期胃癌患者治疗方案:紫杉醇30mg,持续静脉泵入16h,d1-3,d8-10;顺铂5mg,静脉滴注,d1-4,d8-11;5-氟尿嘧啶0.375g,持续静脉泵入24h,d1-5,d8-12;亚叶酸钙100mg,静脉滴注,d1,d8。21d为1个疗程,化疗2个疗程后按实体瘤疗效评价标准评价疗效及WHO分级标准评价不良反应,并随访观察生存情况。结果总有效率为52.4%(22/42)。45例中位随访时间为11个月,1年生存率为48.9%(22/45)。不良反应以骨髓抑制、脱发和胃肠道反应为主,患者均可耐受。结论低剂量紫杉醇联合顺铂和5-氟尿嘧啶治疗晚期胃癌疗效好,不良反应可耐受。