HCV结构区DNA疫苗诱发小鼠特异性细胞免疫反应的研究

目的 :通过HCV结构区DNA疫苗直接免疫小鼠 ,诱发其体内特异性细胞介导的免疫反应的研究 ,为HCVDNA疫苗的研制打下基础。方法 :用重组的pBK CMV质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞SP2 0 ,建立了能体外表达HCV结构区蛋白的SP2 0D细胞系 ,分别用SP2 0和SP2 0D细胞攻击用空质粒或pBK CMV质粒免疫过的Balb c小鼠 ,通过肿瘤形成、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润以及不同免疫组小鼠血清中IL 2和IFN γ含量来观察小鼠体内T淋巴细胞的活性。结果 :用SP2 0和SP2 0D攻击空质粒或pBK CMV质粒免疫过的小鼠 15d后 ,SP2 0D攻击的pBK CMV质粒免疫鼠肿瘤重量〔(0 9± 0 12 )g〕明显低于空白质粒免疫组和SP2 0接种组 (P <0 0 0 1) ,且该免疫组小鼠血清中IL 2和IFN γ的浓度明显高于其它免疫组 ;此外 ,用SP2 0D攻击的pBK CMV免疫鼠 ,肿瘤病理切片中可见明显的T淋巴细胞浸润。结论 :重组的HCV结构区DNA疫苗 (pBK CMV)能诱导小鼠体内特异性T淋巴细胞反应 。

乙型肝炎病毒治疗性疫苗实验研究与探索

慢性肝炎、肝硬化及肝细胞癌与HBV慢性感染密切相关 ,这些与HBV感染的相关疾病 ,是当前人类健康急需解决的难题。以干扰素为主的药物治疗 ,效果不尽人意。用于预防HBV感染疫苗 ,不能治疗持续性HBV感染 ,因此 ,研制对HBV持续性感染的治疗性疫苗 ,已引起人们重视。

人源抗戊型肝炎病毒单克隆抗体的获得与鉴定

目的 获得人源中和性抗戊型肝炎病毒 (HEV)单克隆基因工程抗体。方法 采用五轮筛选法 (逐轮降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原淘筛本室构建的HEV患者外周血源的噬菌体抗体库。获得有特异结合活性的噬菌体抗体 ,酶切鉴定抗体基因插入。切去噬菌粒上衣壳蛋白gⅢ基因构建表达载体 ,在大肠杆菌中可溶性表达抗HEV抗体Fab段 ,ELISA、Westernblot检测抗体免疫学活性 ;测序分析抗体基因。结果 筛选出 4株与含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异结合而与BSA、HBsAg无交叉结合反应的噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。切去gⅢ基因 ,在大肠杆菌中表达可溶性抗体Fab段 ,表达量在细菌培养液上清和细菌裂解液中差异无显著性。可溶性抗体与含中和抗原表位的HEVORF2重组混合抗原有特异结合活性 ,与BSA、HBsAg无交叉结合反应。Westernblot显示在相对分子质量 (Mr)略大于 4 5× 10 3 处有一明显条带 ,与Mr4 8× 10 3 的Fab大小一致。DNA测序分析表明 ,Fab段VH 属于IgGVH3基因家族 ,VL 属于Vκ1基因家族。结论 利用噬菌体抗体库技术成功获得抗HEV的人源单克隆抗体。

亲和层析纯化精子膜抗原的方法及精子抗体的检测

采用超声波粉碎、NP 40提取与两种互补式免疫亲和层析柱相结合的新提纯方案。结果获得了高纯度精子膜抗原 ,对经两种市售试剂盒检测的阳性标本 36份、阴性标本 2 4份进行检测 ,结果一致 ,正常人血清标本A值≤ 0 0 8。初步临床应用显示不孕症患者中 ,血清阳性率 2 3 5 2 % ,精浆阳性率 7 5 7% ,与郑州华美公司试剂盒的阳性符合率达 10 0 %。