积雪草甙、羟基积雪草甙对体外培养人成纤维细胞增殖及胶原合成的影响

目的:研究积雪草甙(asiaticoside,Ad)和羟基积雪草甙(madecassoside,Md)对体外培养人成纤维细胞(human skin fibroblast,HSFb)的增殖及胶原蛋白合成的影响。方法:应用 XTT 方法比较研究 Ad 和Md 对 HSFb 增殖的影响,应用放射免疫的方法测定各实验组和空白对照组细胞上清液中Ⅰ型和Ⅲ型前胶原氨基端肽原(procollagen Ⅰ of aminoterminal propeptide,PINP;procollagen Ⅲ of aminoterminal propeptide,PⅢNP)的含量。结果:(1)Ad 和 Md 在浓度高达200μg/ml 时仍未见任何细胞毒性;(2)与空白对照组相比,Ad 和 Md 对 HSFb 有明显促进增殖作用(P<0.05);两者同时也可有效刺激 HSFb PⅠNP 和 PⅢNP 分泌;(3)Ad 和 Md 刺激靶细胞 PⅠNP 和 PⅢNP 分泌的生物学作用呈现明显的量效关系;(4)在一定剂量范围内,对促进 HSFb 增殖以及刺激 PⅠNP 分泌,Ad 显示出比 Md 更强的生物活性(P<0.05,P<0.01)。结论:Ad 和 Md 在刺激体外培养 HSFb 增殖及Ⅰ、Ⅲ型胶原合成中均有明显的生物活性。

应用免疫磁珠分离成人骨髓中STRO-1阳性细胞

目的:利用免疫磁珠分离成人骨髓中STRO-1+阳性细胞,获得同质性骨髓基质干细胞。方法:实验于2004-06/2005-06在东南大学修复重建外科研究所实验室完成。采集正常自愿献髓者骨髓,淋巴细胞分离液体离心纯化分离后利用免疫磁珠分离出STRO-1+细胞,研究其生长曲线、体外扩增能力、集落形成能力、细胞表型、细胞周期、成骨能力。结果:①利用免疫磁珠可从成人骨髓中获取STRO-1+细胞。经体外培养发现STRO-1+细胞贴壁生长,相差显微镜下STRO-1+细胞呈成纤维细胞梭形外观。②生长曲线可分为细胞生长延滞期、对数生长期及稳定期,细胞倍增时间为57h。③STRO-1+细胞可以在体外扩增12周左右,形成的成纤维细胞集落数、处于细胞分裂期的细胞数、扩增倍数均低于传统分离方法得到的骨髓基质干细胞。④经流式细胞仪检测,STRO-1+细胞稳定地表达CD29,CD44,CD105,不表达造血细胞系的表面标记CD14,CD34,CD45,HLA-DR。⑤经成骨培养发现STRO-1+的骨髓基质干细胞具有很强的成骨分化能力。结论:利用免疫磁珠能够从成人骨髓中快速分离、纯化骨髓基质干细胞,且具有高效、灵敏、对骨髓基质干细胞活性影响小的优点。

带骨膜软骨与不带骨膜软骨自体异位移植的实验研究

目的:通过软骨及带软骨膜软骨在未成年兔中的自体异位移植后变化的研究,为临床选择合适的移植物提供依据。方法:4周家兔12只,将兔的七、八、九肋软骨带骨膜取出,分别分为等长两段。一段保留骨膜,一段去除骨膜,分别埋置于兔的背部两侧对称部位。分别于4、8、12、16周分别取出所埋置的不同组的软骨。将软骨分别观察大体形态、测量长度、作组织学切片行HE染色及电镜观察其显微结构的变化。结果:4周时带骨膜软骨与周围组织结合较去骨膜软骨更紧密,16周与周围组织结合均紧密,两者无明显差异;4周时,两组软骨的长度无显著性差异,8周以后,带骨膜组较不带骨膜组更长(P<0.05);4～8周两者均增生活跃,带骨膜比不带骨膜的增生更明显;12周后软骨纤维化明显,增生不明显。结论:幼兔中,带骨膜的软骨较不带骨膜的更适于自体移植。