标本溶血对18项常规生化指标检验结果的影响

目的定量测定分析溶血对18项血清常规生化指标检测结果的影响,探讨其干扰机制。方法选取甘肃省平凉市人民医院门诊健康体检正常者300例作为研究对象,采用日本（希森美康）SYSMEX-XT4000i全自动血细胞分析仪测定溶血标本其血清血红蛋白（Hb）的含量作为判定溶血的程度。采用德国罗氏P800型全自动生化分析仪检测正常血清标本和溶血标本中ALT、AST、LDH、GGT、CHOL、TG、Scr、ALP、GLU、SUA、CK、BUN、TB、DB、TP、ALB、K^＋、Ca^2＋18项生化指标的含量。结果轻度溶血（0.3-3 g/L）,血清中CHOL、CK、ALB增高（P〈0.05）;AST、LDH、K^＋显著升高（P〈0.01）;GGT、ALP、TB、DB降低（P〈0.05）;ALT、TG、Scr、GLU、BUN、TP、SUA、Ca^2＋无显著性变化（P〉0.05）。重度溶血（Hb﹥3.0/L）,血清中CHOL、ALB、TP增高（P〈0.05）;ALT、AST、LDH、CK、K^＋显著升高（P〈0.01）;GGT、TB、降低（P〈0.05）;ALP、DB显著降低（P〈0.01）;TG、Scr、GLU、BUN、SUA、Ca^2＋无显著性变化（P〉0.05）。结论针对临床血液标本溶血前后及不同溶血程度生化检测结果进行定量测定分析,比较标本溶血对不同检测项目影响程度的大小,探讨其干扰机制,对提高临床生化检验的准确性和可靠性具有重要参考价值。

尿有形成分、尿干化学和尿培养联合检测对于尿路感染的意义

目的分析尿有形成分分析、尿干化学和尿培养之间的关系,以探讨尿常规检查对于尿路感染(UTI)的意义。方法分别采用iQ200尿液有形成分分析仪(简称iQ200)、COMBI500尿11项干化学分析仪及VITECK32细菌鉴定仪对309例临床中段尿标本同时进行尿有形成分、尿干化学分析及细菌培养,分析尿培养鉴定、白细胞定量、细菌定量、白细胞酯酶(LE)和亚硝酸盐(NIT)之间的关系。比较这5项指标对UTI筛查和诊断的意义。结果有效统计标本271例,其中尿培养阳性74例,阳性率为27.3%。当细菌定量阳性(白细胞≥20个/μL)、且LE和NIT为阳性时,待检标本UTI的特异性和阳性预测值最大,分别为98.1%(52/53)和96.0%(24/25),但此时敏感性较低,仅为32.4%(24/74)。当以细菌定量、白细胞、LE中的任一阳性结果作为阳性筛选时,敏感性可达94.6%(70/74),阴性预测值达0.778(14/18)。尿常规4个检测单项以白细胞的诊断效率最高,约登指数为0.420,且其检测结果与细菌培养结果具有一致性。iQ200对革兰阴性杆菌的检测能力优于阳性球菌。结论尿常规检查中干化学和iQ200的4个尿路感染的相关指标可快速拟诊或排除UTI;4个关键指标均为阳性时,可临床诊断UTI,但确诊仍需尿培养结果。iQ200诊断UTI的效能优于尿干化学检测。

维生素K_2对骨髓增生异常综合征细胞株MDS-JSN04生长抑制作用及其机理研究

为了探讨维生素K2(VK2)对骨髓增生异常综合征细胞株MDSJSN04生长的抑制作用及其作用机制,采用细胞形态学方法观察VK2处理后细胞形态的改变;应用四甲基偶氮唑蓝(MTT)比色法检测VK2对细胞生长的抑制作用;流式细胞术分析细胞凋亡、细胞周期变化和髓系分化抗原CD11b、CD13的表达情况;RTPCR技术检测抗凋亡基因bcl2、survivin和促凋亡基因bax的表达;用发光比色法检测caspase3活性。结果表明:VK2作用细胞株72小时后,细胞呈现典型的凋亡细胞的形态特征;细胞的凋亡率随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增高,经统计学处理与对照组比较有显著性差异(P<0.01);S期和G2期细胞随着药物浓度的增加而逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,与对照组比较有显著性差异(P<0.01),细胞被阻滞在G0/G1期,而且在G0/G1期前出现明显的亚G1期细胞即凋亡峰;抗凋亡基因bcl2、survivin表达随着VK2浓度的增高而明显下调((P<0.05),而促凋亡基因bax表达无明显变化((P>0.05),caspase3的活性随着VK2浓度的增加和作用时间的延长而逐渐增强。结论:VK2主要是通过激活caspase3途径诱导MDSJSN04细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因bcl2和survivin也参与了凋亡调控过程。

MTT比色法的改良及其在LAK细胞活性检测中的应用

目的 :改良四甲基偶氮唑盐 (MTT)比色法 ,并用来检测淋巴因子激化的杀伤细胞 (LAK细胞 )活性。方法 :在MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度测定及效靶细胞不同孵育时间的比较等方面进行研究。结果 :MTT代谢产物甲瓒DMSO溶解后的最佳吸光度为 5 10nm ,效靶细胞最佳孵育时间为 4h。结论 :改良的MTT比色法优于常规的MTT比色法。

江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性研究

目的分析江苏地区汉族献血员杀伤细胞免疫球蛋白样受体(K IR)基因多态性、基因型及单倍型,为研究K IR基因与疾病相关性提供依据。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)对江苏地区163名汉族献血员进行K IR基因低分辨率检测和基因型、单倍型分析。结果共检出除框架基因及假基因外的12个K IR基因,其中2DL1和2DL3存在于所有个体,3DL1和2DS4较为常见;其次为1D、2DL5、2DS1、3DS1及2DS5;2DS2、2DL2及2DS3基因频率较低;检出的17种基因型中,以AJ(2,2)和AF(1,2)型最为常见,其次为AH(5,2)和AG(1,1)型。有3种基因型(New1、New11及New19)在白人中未见报道,其中New19国内未见报道;163例个体中明确检出9种单倍型,最常见的是单倍型2,其次是单倍型1。结论江苏地区汉族人群有其独特的K IR基因频率、基因型频率和单倍型频率分布,并有可能存在新的基因型和单倍型。

乙肝患者体内HBV复制与肝损伤的相关性探讨

目的探讨乙型肝炎(乙肝)患者体内病毒复制与肝损伤的关系。方法取400份住院乙肝患者血清,测定HBV-DNA水平、乙肝病毒血清标志物(HBV-M)及肝功指标ALT及AST。分析各指标间的相关性。结果HBeAg阳性患者HBV-DNA水平明显高于HBeAg阴性患者,P<0.05;二者的HBV-DNA水平与ALT及AST均无显著差异;大三阳与小三阳患者HBV-DNA水平与ALT及AST亦均无显著性差异。结论乙肝患者HBV-DNA水平与肝损伤程度无明显相关性。

正电荷载基因纳米微泡的超声成像及靶向杀伤肝癌细胞的研究

目的:制备载基因纳米微泡并探讨其体内外超声成像和靶向杀伤肝癌细胞的效果。方法:采用薄膜水化-机械震荡法制备磷脂为壳膜、六氟化硫(suphurhexafluoride,SF6)气体为核心的正电荷纳米微泡,再偶联甲胎蛋白(alpha fetoprotein,AFP)启动子的单纯疱疹病毒胸苷激酶(simplex herpes virus thymidine kinase,HSV-TK)质粒DNA制备载基因纳泡。对其形态、平均粒径、zeta电位、DNA结合力、基因转染进行检测;然后对其体内外超声成像特性进行考察;最后采用CCK-8和流式细胞(FCM)分析检测载基因纳泡联合超声靶向微泡击破(ultrasound-targeted microbubble destruction,UTMD)技术对BEL-7402和SMCC-7721细胞的杀伤作用。结果:电镜显示纳泡呈圆球形壳核结构;平均水合粒径约为667 nm,带正电;琼脂糖凝胶电泳显示质量比≥5时,纳泡可有效结合质粒DNA;体内外超声显示载基因纳泡具有良好的超声对比增强特性;RT-PCR检测显示纳泡联合UTMD能使HSV-TK在AFP阳性肝癌细胞内表达。CCK-8和FCM分析显示载基因纳泡+UTMD组能显著抑制BEL-7402细胞的增殖和诱导其凋亡,与其他组相比差异具有显著性(P <0.05)。结论:具有良好超声成像功能的载基因纳泡能够高效靶向杀伤AFP阳性的肝癌细胞。

2-甲氧基雌二醇对MUTZ-1细胞内活性氧和线粒体膜电位的影响

目的探讨在2-甲氧基雌二醇（2-ME）诱导骨髓增生异常综合征（myelodysplastic syndrome，MDS）MUTZ-1细胞凋亡中活性氧（ROS）和线粒体膜电位（△ψm）的作用及其作用机制。方法MUTZ-1细胞与不同浓度2-ME共育，FCM分析荧光探针DCFH-DA标记后细胞内ROS和荧光探针JC-1标记后细胞△ψm的变化。加入抗氧化剂过氧化氢酶（CAT）后，MUTZ-1细胞内相应指标的变化。结果经1-4μmol／L 2-ME作用MUTZ-1细胞12h，与对照组相比，细胞内ROS升高（F=102．56，P〈0.05）和细胞△ψm下调（F=108．02，P〈0．05），且MUTZ-1细胞△ψm下降与细胞内ROS升高成正相关（r=0．981，P=0．019）。CAT能够明显抑制2-ME诱导MUTZ-1细胞内ROS升高（F=68．26，P〈0．01）和细胞△ψm下调（F=55．29，P〈0.01）。结论2-ME诱导MUTZ-1细胞凋亡，可能与2-ME刺激细胞内ROS积聚过多、损伤线粒体结构的完整性以及降低细胞线粒体膜电位有关。

维生素K_2诱导K562细胞凋亡的机制研究

目的对维生素K2(VitK2)诱导慢性粒细胞白血病(CML)急变细胞株K562细胞凋亡进行检测。方法取对数生长期细胞(1×108/L),对照组不加药,实验组分别加入不同浓度(5、10、20和40μmol/L)VitK2后24、48、72和96h收集细胞,采用透射电镜技术、流式细胞术、RT-PCR以及化学发光比色法等多参数分析细胞凋亡及其机制。结果VitK2作用K562细胞72h后,电镜下可见典型的凋亡细胞的形态改变;流式细胞仪分析结果显示随着VitK2浓度的增加和作用时间的延长,凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖性;S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多,细胞被阻滞在G0/G1期。随着VitK2浓度的增高抗凋亡基因bcl-2、survivin表达明显下调,而促凋亡基因bax表达无明显差异,半胱氨酸天冬氨酸蛋白酶3(caspase-3)的活性逐渐增强。结论VitK2可能是通过激活caspase-3途径诱导K562细胞发生凋亡,同时抗凋亡基因survivin、bcl-2也参与了凋亡调控过程。

江苏汉族人群KIR配体HLA-Cw位点基因多态性研究

目的使用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法检测江苏地区汉族人群KIR配体HLA-Cw的基因多态性。方法合成10对特异性分型引物及1对内参照引物,对183例江苏地区汉族无关个体进行HLA-Cw低分辨率分型。用χ2检验对等位基因表现频率进行统计分析。结果共检出8种等位基因;HLA-Cw01～08的基因频率分别为0.17、0.01、0.19、0.07、0.00、0.11、0.15、0.11,其中HLA-Cw01、03、06、07型为常见型;有12例样本未扩增出HLA-Cw01～08等位基因型,占总人数的6.60%。经吻合度χ2检验验证,所有样本符合Hardy-Weinberg平衡(χ2=223.5,df=28,P>0.05)。第一组的HLA-Cw02、04、05、06基因频率之和(GF=0.186 9)小于第二组的HLA-Cw01、03、07、08型之和(GF=0.606 3),差异具有统计学意义(P<0.01)。结论江苏地区汉族人群HLA-Cw基因分布具有明显的不均衡性和独特的地理和人种特征。HLA-Cw01～08等位基因的分布以HLA-Cw01、03、06、07为主。

常见干扰离子对不同电解质分析仪血清氯测定的影响

目的:研究常见干扰离子对不同仪器离子选择性电极法血清氯测定的影响。方法:用四种不同的电解质分析仪测定溴化钠、碘化钾、硫化钠以及叠氮钠溶液,并在Cl-均值为100mmol/L的混合血清中分别加入上述四种溶液,观察其具体的干扰情况。结果:所测四种物质均对ISE法测定氯离子产生影响,其中叠氮钠的影响最大;不同的仪器受影响的程度不同,其中以仪器受影响的程度最大。结论:不同的干扰离子对不同的离子选择性电极仪器测血清氯的影响程度不一,我们在工作中应加以注意。

ALT试剂盒日常质量监控方法的选择及其参数应用

为有效观察以辅酶 I为指示酶的试剂盒质量 ,对 ALT试剂盒用 5种物理方法进行了测量 ,测量值分别计算变异系数 ,并按其大小以方法的形式排序为 :试剂空白吸光度 >冰点渗透压 >电导率 >p H>比重。试剂空白吸光度值变化较敏感且特异 ,通过在样品配对 t检验无显著性意义的区间内 ,设置试剂空白 OD值、下降平均 OD值、下降极限 OD值等三个水平 ,对试剂日常使用、保存以及更新提供参数指导。

医院病房电话带菌状况分析

目的 了解市级医院病房电话听筒上的带菌谱 ,为有效控制医院感染提供依据。方法 对电话听筒表面 2 5 cm2面积取样 ,常规方法分离鉴定细菌。结果 5 4部手术科室与非手术科室病房电话共检出细菌 115株 ,以枯草杆菌 (10 0 % )、表皮葡萄球菌 (占 37.70 % )为主要携带菌 ,铜绿假单胞菌、金黄色葡萄球菌等致病菌次之(占 2 1.31% ) ,非手术科室电话 G-杆菌明显高于手术科室。结论 病房电话表面有致病菌存在 ,作为细菌贮源应是医院感染监控指标 ,应定期消毒。

羟基喜树碱对MUTZ-1细胞凋亡中survivin基因及蛋白质表达的影响

目的探讨羟基喜树碱(HCPT)对人骨髓增生异常综合征(MDS)细胞系MUTZ-1细胞凋亡中生存素(survivin)基因及蛋白质表达的影响。方法 MUTZ-1细胞与0、1、2、4μg/mL HCPT共育6 h,用流式细胞术(FCM)检测其细胞凋亡率,RT-PCR检测survivin mRNA的表达水平,免疫细胞化学及western blot检测survivin蛋白质的表达水平。结果 MUTZ-1细胞与0、1、2、4μg/mL HCPT共育后,细胞凋亡率升高,分别为(8.58±0.18)%、(12.10±1.04)%、(14.49±0.87)%和(27.34±1.38)%(F=158.7,P<0.05);survivin mRNA表达水平下调,分别为0.87±0.08、0.76±0.03、0.67±0.03和0.45±0.04(F=97.65,P<0.05);细胞凋亡率与survivin mRNA表达水平呈负相关(r=-0.85,P<0.01);survivin蛋白质积分值降低,分别为2.36±0.19、1.50±0.11、1.49±0.18和1.06±0.04(F=14.57,P<0.05);survivin蛋白质表达减少,分别为0.80±0.09、0.34±0.04、0.25±0.02和0.05±0.01(F=37.42,P<0.05)。结论 HCPT可能通过下调survivin基因转录及蛋白质表达,诱导MUTZ-1细胞凋亡。

KIR的检测技术及其与自身免疫病的研究进展

杀伤细胞免疫球蛋白样受体(killer cell Ig-like receptor,KIR)是位于天然杀伤细胞(natural killer cell,NK)及部分T细胞表面的一种Ig样受体,具有高度多态性。KIR与其配体MHC-I及相关分子结合、相互作用,可调节自身活化阈值,决定NK细胞的活化或者抑制。KIR的检测方法正向高通量、快速、准确方向发展。部分自身免疫病现已证明与KIR及其受体的多态性有关。

凋亡相关基因survivin、bcl-2和bax的表达在维生素K_2诱导HL-60细胞凋亡中的作用

目的探讨维生素K2(VK2)诱导急性早幼粒细胞白血病(AML)细胞株HL-60细胞凋亡的作用机制。方法采用透射电镜技术观察VK2处理后细胞结构变化;流式细胞术Annexin-VFITC/PI分析细胞凋亡;PI染色分析细胞周期变化;RT-PCR技术检测凋亡相关基因survivin、bc l-2和bax的表达。结果40μmol.L-1VK2作用HL-60细胞72 h后,电镜下可见典型细胞凋亡的形态改变;流式细胞术结果显示随着VK2浓度的增加和作用时间的延长细胞凋亡率逐渐增高并呈明显的浓度、时间依赖,与对照组相比差异有显著性(P<0.05);同时S期细胞逐渐减少,G0/G1期细胞逐渐增多(P<0.05),细胞被阻滞在G0/G1期;且随着VK2浓度的增加抗凋亡基因survivin、bc l-2表达明显下调(P<0.05),而促凋亡基因bax表达无显著差异(P>0.05)。结论VK2能诱导HL-60细胞发生凋亡,抗凋亡基因survivin和bc l-2 mRNA下调可能是VK2诱导HL-60细胞发生凋亡的机制之一。

103例江苏汉族类风湿关节炎患者HLA-G14bp插入/缺失多态性研究

目的探讨江苏汉族类风湿关节炎(RA)患者HLA-G14bp插入/缺失多态性与疾病易感性及其他临床特征的相关性。方法采用序列特异性引物PCR(PCR-SSP)的方法检测江苏籍103例汉族RA患者及104例无血缘关系健康人的HLA-G14bp插入/缺失多态性,分析相关临床特征与不同基因型的关系。结果 HLA-G14bp插入/缺失多态性在健康人和RA患者均显示Hardy-Weinberg平衡,RA患者与健康人对照组比较,HLA-G14bp+/+、+/-和-/-基因型阳性率差异无统计学意义(P均>0.05);RA患者不同合并症及不同病程病例组间HLA-G14bp插入/缺失多态性差异无统计学意义(P>0.05);HLA-G14bp+/+组类风湿因子(RF)阳性率与-/-组比较,差异有统计学意义(P<0.05)。结论江苏汉族HLA-G14bp插入/缺失多态性与RA疾病易感性无关,但可影响患者RF的形成。

类风湿性关节炎患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性分析

目的分析类风湿性关节炎(rheumatoid arthritis,RA)患者杀伤细胞免疫球蛋白样受体基因多态性,探讨其与类风湿性关节炎发病之间的关联。方法采用序列特异性引物聚合酶链反应(PCR-SSP)法,分析90例RA患者和200例健康对照组KIR基因。结果通过对RA病例组与正常对照组的9种KIR基因的分析,比较其基因频率发现:RA病例组KIR2DS4的基因频率显著低于对照组(P<0.05),差异具有统计学意义;其余各基因频率与对照组相比,P>0.05,差异无统计学意义。结论RA患者KIR2DS4基因可能与RA发病有关。