肝纤维化病理学诊断

肝纤维化是肝组织损伤的过度修复反应,见于各种慢性肝病,若持续发展,则转变为肝硬化甚至肝癌,导致门脉高压和肝功能衰竭,属于临床顽症。得益于近半个世纪的深入研究,使人们对此病的认识发生了根本转变,既往认为该病进行性发展,目前认为肝纤维化和早期肝硬化是可逆的,对肝纤维化进行早期诊断和治疗能够阻断其向肝硬化及肝癌方向发展。新的认识催生新的行动。针对肝纤维化的新药研发和新防治策略因此不断涌现,客观上要求了解肝纤维化的动态变化,以便判断药效和方法优劣。

江苏地区5028例肾活检病理类型与甲状腺疾病关系分析

目的:初步探讨江苏地区5 028例肾活检标本病理类型与甲状腺疾病的关系。方法:回顾性分析东南大学附属中大医院肾脏病研究所行病理诊断的5 028例肾活检标本的临床和病理资料。结果:5 028例肾穿病例中,合并甲状腺疾病者89例,女性占76.41%;甲状腺机能减退在伴发的3种甲状腺疾病中占64%;89例甲状腺疾病与12种肾脏疾病伴发,其中狼疮性肾炎、干燥综合征肾损伤、混合性结缔组织病性肾损伤等自身免疫性疾病伴发率较其他肾脏病为高;甲状腺疾病伴发率在全部肾穿刺标本中或膜性肾病中均有逐年升高趋势。结论:肾穿刺病例中,合并甲状腺疾病以女性、甲状腺机能减退多见;自身免疫性肾脏疾病常伴发甲状腺疾病;肾脏疾病伴发甲状腺疾病逐年增多,应予重视。

高糖对人肾系膜细胞GSH-PX和PDGF-B表达影响及茶多酚干预作用

目的探讨高糖条件下系膜细胞氧化失衡与血小板源性生长因子B(PDGFB)表达之间的关系,通过抗氧化剂茶多酚证实氧化应激在早期糖尿病中的作用。方法将培养的系膜细胞分为正常对照组、高糖组、茶多酚对照组和茶多酚干预组,分别在0、12、24、36、48h采用分光光度法检测上清液还原型谷胱甘肽过氧化物酶(GSHPX)活性,以及免疫细胞化学法和RTPCR法检测0、12、36h的PDGFBmRNA和蛋白的表达情况。结果①高糖条件下GSHPX活性下降,抗氧化能力下降,氧化失平衡;茶多酚可增加抗氧化酶GSHPX的活性。②高糖组系膜细胞PDGFBmRNA和蛋白的表达比正常对照组均增加(P<0.05);茶多酚干预组比高糖组有明显下降(P<0.05)。结论高糖能促进系膜细胞活性氧和PDGFB的表达增加,茶多酚可抑制该作用。

冰冻切片刚果红染色方法在肾活检病理诊断中的应用

目的建立肾活检组织冰冻切片刚果红染色方法,并探讨其在病理诊断中的应用价值。方法选取肾活检诊断为淀粉样变性肾病的肾组织109例,制作冰冻切片,分别置于4%甲醛溶液、无水乙醇、Bouin液固定后,行刚果红和氧化刚果红染色,光镜观察并拍照,再与相应的石蜡切片染色结果相比较。结果不论是石蜡切片还是冰冻切片,刚果红染色均能显示组织中沉积的淀粉样物。石蜡切片组织结构清晰,肾小球、肾小管结构易辨认;冰冻切片组织结构松散,肾小球、肾小管结构较难辨认,但淀粉样物色彩较艳丽,耗时少。冰冻切片经无水乙醇、Bouin液固定后,刚果红染色效果更佳。结论冰冻切片刚果红染色可以作为病理诊断淀粉样变性肾病的备选方案,值得推广。

FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附的影响

目的探讨FHIT基因过表达对人胃癌细胞系MKN-45增殖和粘附能力的影响。方法将载有人外源性FHIT基因的真核表达质粒pcDNA3.1-FHIT转染FHIT基因mRNA阴性表达人胃癌细胞系MKN-45,分别用MTT法、平板克隆形成实验、黏附实验检测转染前后细胞增殖活性、克隆形成能力及粘附能力的变化。结果FHIT基因的过表达可降低MKN-45细胞的增殖和克隆形成能力(P<0.05),但是对MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。结论FHIT基因过表达可抑制人胃癌细胞系MKN-45的增殖和克隆形成,对于MKN-45细胞与内皮细胞的粘附能力无明显影响。

HPV的致瘤机制与泛蛋白蛋白酶体系统

人类乳头瘤病毒 (HPV)与宫颈癌及其他人类恶性肿瘤的发生有关。这些致瘤性HPV的致瘤潜力依赖于早期基因E6和E7的产物 ,它们通过泛蛋白 蛋白酶体系统分别降解肿瘤抑制基因蛋白 p5 3、pRb和其他PDZ结构域蛋白 ,从而达到致瘤的目的。

缺氧肾小管上皮细胞Rab7/Caveolin-1/MMP-2轴失调促进肾纤维化

目的:研究肾纤维化晚期Ras相关GTP结合蛋白7(Ras-related GTP binding protein 7,Rab7)可否通过小窝蛋白-1(Caveolin-1)的介导调节基质金属蛋白酶-2(matrix metalloproteinase-2, MMP-2)的活性,从而对肾纤维化产生影响。方法:通过单侧输尿管结扎(unilateral ureteral obstruction, UUO)法构建C57BL/6小鼠肾纤维化模型,检测肾纤维化组织中缺氧诱导因子-1α(hypoxia inducible factor-1α, HIF-1α)、Rab7和Caveolin-1的表达以及MMP-2的活性。利用肾小管上皮细胞株(HK-2)进行体外实验,构建HK-2 Rab7-shRNA细胞,将HK-2和HK-2 Rab7-shRNA细胞分别进行常氧和缺氧培养,并检测各组中HIF-1α、Rab7、Caveolin-1的表达和MMP-2的活性,以及纤维化相关指标I型胶原(Collagen-1)、波形蛋白(Vimentin)和α-平滑肌肌动蛋白(α-smooth muscle actin, α-SMA)的表达。结果:利用小鼠UUO模型发现,相较正常肾脏组织,肾纤维化组织中Rab7和Caveolin-1的表达均上调,而MMP-2的活性反而下降。进一步体外实验显示,在HK-2细胞中Rab7下调后可通过抑制Caveolin-1的表达进而提高MMP-2的活性,并会使Collagen-1、Vimentin和α-SMA等反映纤维化的指标表达下调。结论:Rab7与MMP-2的活性密切相关;Rab7对MMP-2活性的调节通过Caveolin-1介导;当Rab7表达受抑后,可促进肾纤维化的缓解。

抑癌基因DLC-1在结肠癌细胞sw480中表达的研究

目的:初步探讨DLC-1基因在结肠癌细胞sw480中的表达改变及其可能机制;方法:采用RT-PCR和Western blot分析结肠癌细胞CaCo2、sw480的DLC-1表达情况;应用去甲基化药物5—氮杂胞苷处理DLC-1基因阴性表达的细胞株,观察用药前后该细胞DLC-1基因的表达水平、细胞周期、细胞增殖力和侵袭力的影响。结果:CaCo2细胞高表达DLC-1 mRNA,而sw480则呈现表达缺失。经去甲基化药物5—氮杂胞苷处理sw480后,DLC-1 mRNA恢复表达,比较用药前后sw480细胞增殖力下降、细胞周期被阻滞在G2期、细胞侵袭力减弱。结论:DLC-1基因可影响结肠癌细胞sw480的增殖能力和侵袭力,并使结肠癌细胞sw480细胞周期阻滞于G2期,DNA甲基化可能是导致DLC-1在sw480细胞中的失活的一个重要原因。

DLC-1基因表达对结肠癌细胞侵袭转移能力的影响

目的:研究DLC-1基因对结肠癌细胞侵袭迁移能力的影响。方法:将DLC-1 shRNA(短发夹状RNA,short hairpin RNA)序列克隆到质粒pGCsi-U6/Neo载体,采用脂质体介导的转染方法将构建的DLC-1 shRNA表达质粒转入结肠癌细胞系LoVo细胞。采用RT-PCR技术和Western Blot技术分别检测LoVo细胞中DLC-1mRNA和蛋白表达水平的变化。Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验观察LoVo细胞侵袭迁移能力的改变。结果:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1分子。所构建质粒表达载体能有效地干扰LoVo细胞DLC-1 mRNA和蛋白质表达水平;Transwell小室人工重组基底膜侵袭转移实验结果显示,转染后LoVo细胞侵袭转移能力明显增强(p<0.05)。结论:结肠癌细胞系LoVo细胞表达DLC-1基因,应用RNAi技术可特异性降低其表达。DLC-1的表达水平与结肠癌细胞侵袭转移相关。

巢式RT-PCR检测胃癌患者外周血循环癌细胞的研究

目的 分析胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的异常表达及意义。方法 采用RT PCR方法检测 5 2例胃癌患者术前外周血中CK 2 0mRNA及CEAmRNA的表达。结果 胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA、CEAmRNA阳性表达率分别为 42 .3 % (2 2 /5 2 )及 5 1.9% (2 7/5 2 ) ,CK 2 0mRNA和CEAmRNA两者中至少 1个基因为阳性的表达率为 63 .5 % (3 3 /5 2 )。胃癌患者外周血中CK 2 0mRNA表达与胃癌的远处转移有关 ,CEAmRNA表达、CK 2 0mRNA和CEAmRNA都表达、CK 2 0mR NA和CEAmRNA两者中至少 1个表达与胃癌的浸润深度、淋巴结转移和远处转移相关 (P <0 .0 5 )。结论 胃癌患者外周血CK 2 0和CEA的RT PCR检测有助于患者预后的判断 ;联合检测CK 2

TRDMT1蛋白在胃癌组织中的表达及其临床意义

目的探讨tRNA天冬氨酸甲基转移酶1(TRDMT1)蛋白在胃癌组织中表达情况,并分析其表达与临床病理特征和预后的关系。方法收集东南大学医学院附属江阴医院2012年1月至2013年12月手术切除的胃癌组织标本90例及对应癌旁组织35例,采用免疫组化SP法分别检测上述组织中TRDMT1蛋白的表达,同时分析其表达与临床病理特征和总生存期(OS)的关系。结果 TRDMT1在胃癌组织中的阳性表达率为55.6%(50/90),高于癌旁组织中的11.4%(4/35),差异有统计学意义(P<0.05)。TRDMT1表达与年龄和性别无关(P>0.05),与肿瘤大小、分化程度、侵犯深度、淋巴结转移和TNM分期有关(P<0.05)。TRDMT1阳性表达者的中位OS为33.0个月,显著低于TRDMT1阴性表达者的42.0个月(P<0.05)。Cox多因素分析显示,肿瘤大小、分化程度、侵犯深度、淋巴结转移、TNM分期和TRDMT1表达均为影响胃癌患者OS的独立因素。结论 TRDMT1在胃癌中表达升高,其可能在胃癌的发生、发展中起促进作用且对预测胃癌患者的预后具有一定意义。

循环RNA测定与肿瘤外周血微转移的研究进展

复发和转移是影响肿瘤患者预后的主要因素。血液等成分正常情况下不表达上皮细胞的组成成分如癌胚抗原 (CEA)、细胞角蛋白 (CKs)和上皮膜抗原 (EMA) ,以编码特异性上皮性蛋白的mRNA作为靶基因 ,通过分子生物学技术 (RT PCR)检测血液中的循环肿瘤细胞 ,可提高肿瘤病理TNM分期的正确性 ,有助于临床治疗方案的选择及预后的判断。

骨桥蛋白下调对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响

目的观察骨桥蛋白(osteopontin．OPN)下调后对前列腺癌PC3细胞生物学行为的影响。方法构建针对OPN的siRNA(small interference RNA)表达质粒,用脂质体方法转染PC3细胞。RT-PCR和Western blot检测转染后PC3细胞OPN的表达；MTT比色法和流式细胞仪检测PC3细胞OPN下调对细胞的生长和细胞周期的影响；软琼脂生长实验检测OPN下调后对PC3细胞集落形成的影响。结果 RT-PCR和Western blot证实经RNA干扰介导的PC3细胞存在OPN表达下调,转染的细胞生长受抑制,出现细胞周期S期阻滞和细胞凋亡,在软琼脂上的细胞集落形成率下降。结论经RNA干扰的选择性OPN下调可使PC3细胞在S期阻滞并出现细胞凋亡,细胞的恶性程度下降。

pcDNA3.1/DLC-1重组质粒的构建及其在HT-29细胞中的表达

目的构建和表达DLC-1(deleted in liver cancer)基因重组质粒。方法用PCR法得到DLC-1基因片段,此基因片段带有XbaⅠ和BamHⅠ两个酶切位点,然后将此片段和真核表达载体pcDNA3.1连接,转化大肠杆菌DH5a,利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒转染到结肠癌HT-29细胞中,再用RT-PCR法检测重组质粒的表达。结果重组质粒经XbaⅠ和BamHⅠ双酶切和测序与DLC-1基因序列一致;利用脂质体介导将pcDNA3.1/DLC-1重组质粒导入HT-29细胞,获得了DLC-1基因的表达。结论成功构建pcDNA3.1/DLC-1重组质粒并在HT-29细胞内表达。

大肠癌组织HLA-I类抗原及相关分子的表达意义

目的:探讨大肠癌组织HLA-Ⅰ类分子及相关分子表达及其意义. 方法:用免疫组化的方法,以切端黏膜作为正常对照,检测大肠癌组织、癌旁组织和正常黏膜组织中HLA-Ⅰ类分子及相关分子的表达,并结合肿瘤的临床病理资料综合分析. 结果:受检的大肠癌组织中重链HLA-A位点、B/C位点及轻链beta2微球蛋白(β2M)较其相应正常黏膜表达明显下调(P=0.0001);肠癌中低分子量多肽(LMP2)(P=0.0001),钙联蛋白(calnexin)(P=0.004)较正常黏膜表达明显下调;肠癌中HLA-Ⅰ类分子表达与肿瘤分化无关;随着肿瘤的Dukes 分期,癌组织中HLA-Ⅰ类分子表达渐次降低,但各位点表达情况并不相同,HLA-B/C表达水平与肿瘤分期相关,其在Dukes A期表达水平高于D期(P=0.0262). 结论:肠癌组织及癌旁黏膜中HLA-Ⅰ类分子、低分子量多肽及钙联蛋白较正常黏膜表达明显下调;肠癌组织中HLA- B/C位点随着肿瘤Dukes分期演进其表达下调.

Cav-1在肝癌组织的表达及其意义

目的:探讨小窝蛋白-1(Cav-1)在肝癌(HCC)细胞及间质中的表达及意义。方法:采用组织微阵列及免疫组织化学法检测100例肝癌及癌旁组织Cav-1的表达,并分析其表达程度与病理参数的相关性。结果:Cav-1在肝癌细胞的高表达率显著高于癌旁组织(P<0.05);而且与微血管的侵袭、癌栓的形成、周围脏器的直接侵袭、是否伴有肝硬化显著正相关。Cav-1在肝癌间质的高表达率显著低于癌旁间质(P<0.05),而且与肿瘤的大小、卫星结节的形成、微血管的侵犯、癌栓的形成、周围脏器的直接侵袭显著正相关。结论:在肝癌组织中,Cav-1的高表达率在肝癌细胞上调,而在肝癌间质下调;Cav-1在肝癌细胞及肝癌间质的表达变化与肝癌的侵袭性有关。

放射性^(32)P-磷酸铬胶体治疗H22移植瘤的实验研究

目的 :探讨不同剂量的3 2 P 磷酸铬 (Cr3 2 PO4)胶体局部注射对小鼠H2 2移植瘤和区域淋巴结转移灶的治疗作用。方法 :建立小鼠H2 2移植瘤模型 14d后分别给予高、中、低剂量的Cr3 2 PO4胶体瘤体局部注射 ,观察Cr3 2 PO4胶体的治疗作用及对肿瘤组织和细胞的形态学影响。结果 :不同剂量Cr3 2 PO4胶体注射后瘤体局部依次出现红肿、表面苍白、囊性变 ,水肿消退后爪垫坏死。光镜下瘤体癌细胞呈多边形 ,大小不一 ,核大 ,可见病理分裂像并侵袭达肌层 ,同侧月国窝和腹股沟淋巴结均出现淋巴结结构破坏 ,呈现大量癌细胞浸润。治疗早期瘤体和月国窝淋巴结转移灶呈现局灶性坏死 ,后期移植瘤和淋巴结转移灶肿瘤组织完全坏死 ,结构破坏 ,并可见出血灶。电镜下 ,治疗早期淋巴结转移灶和瘤体中癌细胞线粒体空化 ,内质网和细胞器少见。治疗后期细胞结构消失 ,呈现大量细胞碎片、脂肪滴和空泡。结论 :Cr3 2

用人类复合性溃疡患者幽门螺杆菌新鲜分离株感染BABL/ c小鼠建立动物胃炎模型(英文)

本研究的目的在于用人类复合性溃疡患者幽门螺杆菌新鲜分离株感染BABL c小鼠建立动物胃炎模型。幽门螺杆菌 (H pylori)是由Warren和Marshall在 1989年首次发现的 ,此杆菌与胃炎和消化性溃疡相关联 ,从而彻底改变了对胃、十二指肠疾病的认识。 1990年澳大利亚国际胃肠病学术会议确认H pylori是导致胃炎的重要病因 ,由此引起的胃炎是发病率最高的消化性疾病 ,但仍有许多方面了解不够或有不同认识 ,存在的主要问题是缺乏简单、易控制的动物模型。我们选用复合性溃疡患者的幽门螺杆菌临床新鲜分离株 ,在微需氧条件下进行培养传代 ,然后按照 10 9集落形成单位 mL的菌量接种BALB c小鼠 ,接种前将小鼠禁食 2 4小时 ,并用 0 2 5mL 10 %NaHCO3 稍微中和胃部酸性 ,15分钟后接种 ,并于第 3、5天分别重复接种。于最后一次接种后 5天 ,2 ,3,4周分批处死动物 ,取出小鼠接近幽门部的胃粘膜组织 ,一部分用于H pylori鉴定 ,另一部分用于病理学检测。结果表明 ,接种幽门螺杆菌的实验组小鼠胃粘膜能分离出幽门螺杆菌 ,病理切片显示实验组小鼠胃粘膜有不同程度的胃炎 ,而空白对照组小鼠则无明显的炎症表现。从而建立了用人类复合性溃疡患者幽门螺杆菌新鲜分离株感染BALB c小鼠的动物胃炎模型。

氯沙坦对高糖状态下内皮细胞的保护作用及其机制探讨

目的:探讨高糖环境下氯沙坦对内皮细胞的保护作用及其机制。方法:比色法测定内皮细胞条件培养上清中超氧化物歧化酶(SOD)、过氧化氢酶(CAT)的活性和丙二醛(MDA)水平,RT-PCR方法分析细胞VEGF mRNA的表达水平,EL ISA方法检测细胞分泌的VEGF蛋白。结果:在高糖处理的细胞条件培养上清中SOD和CAT活性降低,而MDA含量升高(P<0.05),同时细胞VEGF mRNA和蛋白质表达增加(P<0.05);而氯沙坦可削弱上述变化,降低内皮细胞MDA含量、增强SOD与CAT活性,以及下调VEGF mRNA和蛋白质表达(P<0.05)。结论:高糖可诱导内皮细胞活性氧产生增多,抗氧化酶活性下降,导致细胞氧化平衡失调,使VEGF mRNA表达与蛋白分泌增加,促进高糖时内皮细胞病变的进展,提示氯沙坦对高糖状态下的内皮细胞的保护作用可能与调节内皮细胞氧化平衡和抑制内皮细胞的活化有关。