加强医学遗传学课程建设的几点体会

医学遗传学是基础医学与临床医学之间的桥梁学科之一.在进行课程建设时,首先应在思想上给予高度重视;抓住医学遗传学课程的特点,合理安排课程教学内容;充分利用丰富的现代多媒体技术的优势,以科研为突破口,加强师资队伍建设,努力改善课程建设中的不足.

改革医学遗传学教学模式,培养综合素质医学人才

为加强和优化医学遗传学教学，克服传统教学存在的不足，以素质教育为基础，采用多种教学手段，加强教学改革，提高教学内容，同时注意学生医德教育和情感的培养，从而培养高素质医学人才。

染色体不稳定性及其与妇科肿瘤形成关系的研究进展

随着细胞遗传学与肿瘤病因学研究的不断深入 ,染色体不稳定性与肿瘤形成的关系越来越受到人们的重视。作者就染色体不稳定性的分子基础和表现 ,以及它在妇科肿瘤方面的研究进展作一综述。

生命科学与人类疾病研究的重要模型——果蝇

黑腹果蝇(Drosophilamelanogaster)是生物学研究中最重要的模式生物之一,它在遗传的染色体理论建立中起到非常重要的作用。由于果蝇自身独特的优势,20世纪70年代以来,它又在发育生物学、神经科学、人类疾病研究等领域得到广泛应用,作出许多新的重要贡献。果蝇在神经退行性疾病研究中是非常有用的模型。可以预期,随着研究手段的丰富及科学的发展,果蝇将作为一种理想的模式生物在生物医学中发挥更大的作用。

SR蛋白研究进展

在真核生物众多拼接因子中 ,SR蛋白家族是一类重要的成员 ,它们与一些特定的RNA序列结合 ,帮助识别并选择正确的 5′及 3′拼接位点 ,与其它的拼接因子共同完成拼接任务 ,在决定组织细胞的特异性及个体发育的阶段性方面发挥着关键作用。本文就近 10年来有关SR蛋白的结构和功能的研究进展作一综述。

通过比较基因组杂交研究肝癌中非随机染色体畸变

目的:研究肝癌发生和发展过程中非随机染色体畸变情况。方法:采用比较基因组杂交法(comparativegenomichybridization,CGH)分析25例肝癌标本。结果:4q、8p、16q、17p、13q和6q区域的缺失以及8q、1q、6p和17q区域的扩增为肝癌的特征性变化。结论:非随机改变区域存在的相关基因与肝癌发生有关。

p16基因甲基化状态与散发性大肠癌的相关性研究

为探讨p1 6基因甲基化状态与散发性大肠癌发生发展的关系 ,用甲基化特异性的聚合酶链反应 (methylati omspecificPCR ,MSP)结合测序检测散发性大肠癌及相应癌旁组织p1 6基因甲基化状态。研究发现p1 6基因在散发性大肠癌中甲基化率为 2 8 9% (1 3 4 5 ) ,有 8例癌及癌旁组织都发生了甲基化 ;有淋巴结及远处转移的甲基化率为5 0 % (8 1 6 ) ,高于无转移的甲基化率 2 0 8(5 2 4 ) (P <0 0 5 )。p1 6基因高甲基化是散发性大肠癌中常见的分子改变之一 ,大肠癌中p1

丙型肝炎病毒NS5A区与干扰素敏感性间关系的研究

日本学者首先发现丙型肝炎病毒 NS5 A区存在干扰素敏感决定区 (ISDR) ,可预测干扰素疗效 ,但随后西欧学者的多项研究并不支持此观点。本文对 ISDR与干扰素疗效、病毒滴度、准种选择性的关系以及 ISDR的体外研究等方面的现状进行了综述。

小麂Sry基因的克隆和测序

应用人的性别决定基因SRY(Sex determiningRegionYgene,SRY)中HMG框内的一对引物,对小麂细胞株的基因组DNA进行PCR扩增,得到雄性小麂细胞的220bp扩增产物,而在雌性小麂细胞中未发现扩增产物。将雄性小麂细胞的220bp扩增产物通过T-A互补法克隆到质粒pGEM-T载体中,筛选阳性克隆进行DNA测序。测序结果表明小麂Sry基因保守序列与人的SRY基因保守区相同碱基的比值为152/184,达到82.6%。提示小麂Sry基因与人的SRY基因存在着较高的同源性,说明SRY基因在进化过程中高度保守。

肝癌中HLA抗原表达及临床意义

目的 探讨HLA抗原在肝癌中的表达水平及与病程、预后等的关系。方法 应用 5种HLA及相关分子单抗 ,采用免疫组织化学方法 (ABC法 )对 93例肝细胞肝癌及癌旁组织的石蜡切片进行检测。结果 HLAI类抗原在癌旁正常肝细胞中不表达或低表达 ,在癌细胞中表达明显增强 ;肝癌中HLAI类抗原表达增强的患者生存率较其他患者高 ,肝癌中I类抗原表达阳性的患者较表达阴性的患者生存率高。未发现肝癌细胞HLAI类抗原表达的增强与年龄、AFP、HBsAg、肝硬化、瘤体大小及病理分级有关。HLAII类抗原在肝癌及癌旁细胞中均表达较弱或不表达。结论 HLAI类抗原在肝癌中表达较癌旁细胞增强 ,并有利于患者的预后。肝癌中HLAI类抗原表达增强这种有别于其他肿瘤的分子机制及意义等问题还需进一步研究。

应用蛋白截短技术检测APC基因胚系突变

建立蛋白截短检测技术,分析家族性腺瘤样息肉病(FAP)发病相关基因APC基因的胚系突变,研究基因突变型与FAP疾病表型的关系。经临床诊断的22例FAP患者及43例散发性大肠癌患者,分别取外周静脉血和正常结肠粘膜组织,常规提取基因组DNA。应用蛋白截短检测技术,分段分析APC基因巨大的第15外显子,对检出截短蛋白的样本进行测序,以确定突变位点及突变性质。22例FAP患者中,5例患者存在APC基因第15外显子的胚系突变,均为碱基缺失造成的移码突变,导致截短蛋白的产生;43例散发性大肠癌患者中未检测到APC基因第15外显子的胚系突变。蛋白截短检测技术是一种高效的基因突变分析技术,适用于大片段基因(如APC基因第15外显子)截短型突变的检测,可作为FAP症状出现前的常规基因诊断技术的一项有效补充。

应用树状DNA杂交(DDH)对生殖道尖锐湿疣中HPV DNA的分型检测

从手术切除的 5 0例生殖道尖锐湿疣新鲜标本中 ,以及 1 5例正常人血清中 ,提取基因组DNA ,同时用树状DNA杂交 (dendrimerDNAhybridizalion ,DDH)技术和PCR进行HPVDNA的分型检测。结果 5 0例尖锐湿疣中 ,以DDH方法检测 ,感染HPV6型者 2 0例 ,感染 1 1型者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 3例 ,总检测率达 94 % ;以PCR方法检测 ,HPV6型感染者 2 1例 ,1 1型感染者 2 4例 ,6 / 1 1型混合感染者 3例 ,阴性 2例 ,总检测率为 96 %。1 5例正常人血清中 ,以DDH方法检测 ,HPV感染的假阳性率为 0 % ;以PCR检测 ,假阳性率为 6 .6 7%。还以HPV阳性标本对DDH方法做了敏感度的测定 ,结果阳性病例DNA检测最低浓度为 97.2 8pg/ml。研究表明 ,DDH技术具有较高敏感性和高特异性 ,且成本较低 ,操作安全简便 。

CK19、CK20 mRNA在上皮性恶性肿瘤患者外周血中的表达及其意义

目的 :分析上皮性恶性肿瘤患者外周血中CK19、CK2 0mRNA的表达水平 ,探讨其临床病理意义。方法 :随机选择和收集 5 3例上皮性恶性肿瘤患者的外周血 ,应用巢式RT PCR法联合检测其CK19、CK2 0mRNA表达情况。另取 15例上皮性肿瘤组织为阳性对照 ,15例非肿瘤患者外周血为阴性对照。结果 :5 3例肿瘤患者外周血中CK19阳性率为 3 5 .8% (19/5 3 ) ,CK2 0阳性率 41.5 % (2 2 /5 3 ) ,两者至少 1项阳性者 69.8% (3 1/5 3 )。 15例肿瘤组织中CK2 0阳性率为 10 0 % (15 /15 ) ,CK19阳性率 86% (13 /15 ) ;15例阴性对照CK19阳性 2例 ,CK2 0阳性 1例。结合肿瘤的临床病理资料分析 ,肿瘤患者外周血CK19、CK2 0mRNA阳性表达与肿瘤浸润深度、临床分期及淋巴结转移间存在明显的相关性 ,而与肿瘤患者的年龄、性别、肿瘤分化程度无明显相关。结论 :CK19、CK2 0mRNA可作为检测上皮性肿瘤外周血微转移的靶基因。联合检测肿瘤患者外周血CK19、CK2 0mRNA可增加外周血循环癌细胞的检测率。

人精子蛋白17基因在大肠杆菌中的表达

目的:克隆人精子蛋白17(hSp17)基因,构建重组表达载体并表达重组蛋白.方法:用RTPCR法从人睾丸中克隆hSp17基因,构建重组表达质粒pET28a(+)/hSp17,转化大肠杆菌BL21(DE3),IPTG诱导表达,SDSPAGE检测,用特异性hSp17的mAb进行Westernblot鉴定,NiNTAHisBind树脂纯化重组蛋白.结果:克隆到hSp17cDNA(456bp)并经过DNA测序证实,表达和纯化得到重组蛋白hSp17(表观Mr为27500),并经过Westernblot鉴定.结论:成功克隆和表达hSp17基因.

戊型肝炎病毒第4基因型中国株ORF2编码蛋白的抗原表位分析

以戊型肝炎病毒（HEV）第4基因型中国株ORF2编码蛋白p166Chn制备单克隆抗体（McAbs）,同时制备20个N端或C端逐渐截短的p166Chn截短蛋白,与7种不同基因型和亚型的p166蛋白一起,通过ELISA、免疫印迹（Western blot）以及竞争抑制实验对主要存在于我国的HEV第4基因型毒株进行抗原表位分析。结果发现所制备的McAbs与p166Chn截短蛋白的免疫反应有两种类型,以1G10为代表的McAbs能与N端不短于aa477、C端不短于aa613的截短蛋白反应,其针对的抗原表位是构象依赖型表位,依赖于aa477-aa613肽链区段;而McAb2F11则能与N端不短于aa474、C端不短于aa617的截短蛋白反应,其针对的抗原表位也是构象表位,但需依赖于较长的肽链区段（aa474-aa617）。竞争抑制实验显示两类McAbs互不抑制,进一步证实了所发现的两个抗原表位在空间位置上的不同。更有意义的是,两类McAbs均能与其他不同HEV基因型和亚型来源的p166重组蛋白发生阳性反应,表明这两个抗原表位是HEV基因型共同性的,可以在世界各国分布的不同基因型HEV毒株中诱导交叉免疫。

抗戊型肝炎病毒噬菌体抗体库的构建与筛选

目的 :构建人抗戊型肝炎病毒 (HEV)噬菌体抗体库 ,筛选人源中和性抗HEV的单克隆抗体 (mAb)。方法 :取抗HEV抗体阳性的 6例HE患者静脉血 ,分离淋巴细胞 ,提取细胞总RNA后逆转录。用一组人IgGFab基因特异性引物 ,分别扩增IgGκ0轻链与重链Fd段基因。将κ轻链与Fd段基因先后克隆入噬菌体载体pComb3的相应位点 ,经电穿孔法转化大肠杆菌XL1 Blue ,再以辅助噬菌体VCSM13超感染 ,构建人抗HEV噬菌体抗体库。采用独特的 5轮筛选法 (逐渐降低抗原包被量 ,严格洗脱条件 ) ,以固相化的 4种含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原 ,筛选人噬菌体抗体库 ,并以ELISA鉴定噬菌体抗体。结果 :经数次电转化构建了容量为1.9× 10 7重组率为 80 %的κ轻链基因库 ;容量为 1.8× 10 7重组率为 2 0 %的Fab基因库。以含中和抗原表位的HEV代表株ORF2重组混合抗原特异淘筛 5次 ,出现特异富集。ELISA鉴定第 5轮筛选产物 ,得到 4株与HEVORF2重组混合抗原具有较高亲和力的Fab噬菌体抗体 ,可能为中和抗体。结论 :成功地构建了人抗HEV噬菌体抗体库 ,并获得人源抗HEV特异性噬菌体抗体。

唇受精卵的皮层反应及其引发机制

唇皮层小泡1-4层,在光镜和透射电镜下均具5种形态,由外及内,小泡内颗粒直径逐渐减少。在H．E染 色中,动物极低纬度区和精孔器附近的卵膜和质膜之间,具少量均匀的着色非常深的紫色斑点,与Ⅰ型皮层小泡内 容物形态结构相似,在透射电镜下,这些斑点和卵膜、质膜有明显的界限,其外没有包被膜相结构,我们称之皮层反 应引发斑,这是在鱼类受精卵中发现的一个新的结构。扫描电镜下,引发斑成絮状。引发斑对皮层反应的引发具 有重要作用。皮层反应可分为潜伏期、始发期、高潮期、衰退期四个时期,潜伏期没有皮层反应发生,始发期只是位 于受精卵外围的少量皮层小泡释放,高潮期为多个皮层小泡相互融合形成一个大的泡状体,泡状体再与质膜接触、 融合后,随后破裂,释放内容物,可分为两个阶段,衰退期释放Ⅴ型皮层小泡和其他残存的皮层小泡以及未完全降 解卵黄颗粒碎屑;皮层反应是由Ⅰ型皮层小泡和引发斑诱导的爆发性的链式反应,卵子外侧的皮层反应可以诱导 内侧皮层反应。皮层反应有两个起始区域,在受精后35s开始于动物极低纬度区,稍后出现在精孔器前庭附近,随 后在这两个始发区向四周扩散,并在前庭以外的区域愈合、打通。皮层小泡分批多次释放,质膜多次重组。精子入 卵位点附近没有皮层小泡,不发生皮层反应,这提示皮层反应对鱼类多精受精的抑制效应有限。

抗果蝇ECP蛋白单克隆抗体的制备及特性鉴定

目的: 制备抗果蝇ECP蛋白的单克隆抗体(mAb)并进行特性鉴定.方法: 用大肠杆菌表达并纯化的GST-ECP融合蛋白, 免疫6～8 wk的雌性BALB/c小鼠, 取其脾细胞与Sp2/0骨髓瘤细胞融合, 经间接ELISA筛选和克隆化培养制备杂交瘤细胞系.用间接ELISA及Western blot等方法对mAb的Ig亚类(型)、腹水效价及特异性进行鉴定.结果: 获得1株杂交瘤细胞株, 命名为8G9.Ig亚类(型)鉴定表明, 此株mAb为IgG1(κ型).腹水mAb的效价为 1∶ 1×105.Western blot分析表明, 该株mAb可与果蝇的幼虫、蛹及成虫组织中表达的ECP特异性结合, 可特异性的识别ECP抗原的231～300aa区段.结论: 获得1株能稳定分泌抗ECP mAb的细胞株, 为进一步研究ECP的功能奠定了基础.

血液透析患者丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型

目的 建立一种丙型肝炎病毒型特异性PCR基因分型方法。方法 对 4 7份血液透析患者HCVRNA阳性的标本 ,用 5′非编码区 (5′ NCR) 1、2、3、1b型特异性引物 ,进行逆转录巢式PCR扩增分型。结果 4 7份HCVRNA样本 4 3例可以分型 ;优势株为 1b亚型 ,1b及 1b相关型占总样本数的 87.2 3% (4 1 / 4 7) ;7例为混合感染 ,占可分型数的 1 6 .2 7% (7/ 4 3)。结论 本组血液透析患者感染的HCV基因型的分布可能与地区流行及医源性传播有关 。

果蝇中Ecp蛋白的表达、纯化与抗体制备

获得特异性抗Ecp多克隆抗体 ,为进一步研究ecp的功能奠定基础。利用特异引物 ,通过RT PCR扩增出编码Ecp蛋白的全长cDNA ,克隆至谷胱甘肽S转移酶融合蛋白表达载体pGEX 4T 1(His) 6C中 ,转染大肠杆菌DH5α,经诱导表达后 ,利用谷胱甘肽琼脂糖珠从细胞裂解物中特异吸附融合蛋白 ,经凝血酶裂解 ,释放出Ecp蛋白 ,再经Ni NTA亲和层析 ,最终获得高纯度的Ecp蛋白。用纯化的Ecp蛋白免疫新西兰家兔 ,亲和层析纯化抗Ecp抗体。利用该抗体进行的WesternBlot结果表明 :Ecp蛋白在野生型黑腹果蝇胚胎、三龄幼虫神经系统、成虫、成虫头部组织中均有明显表达 。