下调hENT1可抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的跨膜转运

目的:明确下调hENT1后对胰腺癌细胞株Sw1990跨膜转运吉西他滨的影响。方法:将能特异性下调hENT1的pSilence-hENT14.1-CMV neo的重组质粒以及对照质粒转染至胰腺癌Sw1990细胞内。采用G418筛选阳性克隆细胞,RT-PCR检测hENT1mRNA表达情况。培养Sw1990细胞、pSilence-hENT1Si-Sw1990、pSilence-Control-Sw1990细胞,3组细胞培养基中吉西他滨质量浓度均为100μg/mL,温育0,15,30min,1,2,4h后收集细胞。取等量细胞悬液两份各100μL,一份作为检测样本用毛细管区带电泳测定吉西他滨总量,另一份用作平行样本测定总蛋白含量。根据蛋白-细胞数量标准曲线来确定平行样本中细胞数,再用血细胞分析仪确定细胞体积,最后,计算单细胞内药物总量及浓度。结果:pSilence-hENT1Si-Sw1990细胞的hENT1mRNA表达水平下调50。Sw1990组用含吉西他滨(100μg/mL)的DMEM培养基温育后,细胞内药物质量浓度在30min达(55.1±10.4)μg/mL,60min达(70.2±7.8)μg/mL,120min后处于平台期(90.1±6.0)μg/mL。相比之下,pSilence-hENT1Si-Sw1990组细胞内质量药物浓度30min达(41.3±4.9)μg/mL,60min达平台期(51.3±11.8)μg/mL,与对照组相比,细胞内浓度处于较低水平(P<0.05)。pSilence-hENT1control-Sw1990组与Sw1990组相比差异无统计学意义(P>0.05)。结论:下调hENT1可以抑制胰腺癌细胞株Sw1990对吉西他滨的摄取,hENT1是吉西他滨跨膜转运的重要通道。

细胞外组蛋白对损伤小鼠肠黏膜屏障的影响及在脓毒症发生发展中的作用

目的探讨细胞外组蛋白（EH）对小鼠肠黏膜屏障的影响及在脓毒症发生发展中的作用。方法选择雄性野生型C57BL／6小鼠20只，按随机数字表法分为实验组和对照组，每组10只。实验组将EH按50mg／kg经尾静脉注射人小鼠体内，对照组给予尾静脉注射等量等渗盐水。3h后分别采集两组血液标本和肠组织标本，光镜及透射电镜下对两组肠黏膜组织形态进行观察，Westernblot检测紧密连接相关蛋白（ZO-1、Occludin、Claudin-1）的表达量，酶联免疫吸附（ELISA）法检测血浆二胺氧化酶（DAO）及脂肪酸结合蛋白（I—FABP）含量，鲎试验检测血浆中内毒素（ET）的含量。结果电镜结果显示，实验组肠上皮细胞表面微绒毛排列紊乱，部分断裂、扭曲、脱落，上皮细胞紧密连接模糊，细胞间隙增宽，与对照组比较差异明显。光镜结果显示，实验组肠壁有大量炎细胞浸润，绒毛排列不规则，黏膜及黏膜下出现水肿、出血，杯状细胞出现水肿，绒毛变钝，与对照组比较差异明显。实验组Claudin-1、Occludin、ZO-1的表达量分别为0．5877±0．0606，0．1277±0．0857，0．3933±0．0808，均较对照组的0．6772±0．0383，0．4306±0．0869，0．8128±0．0963明显降低（P〈0．05）；实验组血浆DAO含量为（1．61-4-0．20）U／ml，I—FABP为（548．5±36．8）EU／ml，ET为（0．182±0．076）EU／ml，均较对照组的（0．69±0．15）U／ml、（178．84-26．9）EU／ml、（0．091±0．029）EU／ml明显升高（P〈0．05）。结论EH对小鼠肠黏膜屏障的完整性具有明显损害作用，造成内毒素移位。

肠系膜纤维瘤病的临床及组织病理分析

目的总结肠系膜纤维瘤病的临床及组织病理特征。方法回顾性分析9例肠系膜纤维瘤病患者的临床资料。结果4例表现为腹部疼痛,2例扪及腹部肿块,腹部不适、腹部和腰部不适各1例,1例无明显不适;实验室检测发现轻度贫血1例,低钾血症1例,余血常规、肝功能、肾功能、电解质及肿瘤标志物均无明显异常;CT检查显示病灶呈实性、单发,位于空肠系膜4例、回肠系膜3例、结肠系膜2例,肿瘤直径3~22(12.7±6.5)cm,形态不规则,2例与周围组织分界不清,肿瘤周围未见肿大淋巴结、肠系膜血管癌栓,平扫病灶密度较均匀,未见钙化、坏死及出血性改变,增强扫描1例呈均匀强化,8例呈不均匀强化,动脉期、静脉期、延迟期强化程度逐渐增强;9例均行手术治疗,术后组织病理显示肿瘤由大小不同的梭形或肌纤维母细胞组成,其间质内含有大量胶原纤维,免疫组织化学显示9例β-catenin表达为强阳性或阳性,CD117均为阴性、Ki-67阳性细胞数<5%,Desmin、S-100、SMA表达为弱阳性各1例,8例行DOG-1、CD34检测,DOG-1均为阴性,CD34血管阳性2例;随访6~101个月,6例存活,2例失访,1例死亡。结论肠系膜纤维瘤病临床表现及CT影像特征缺乏特异性,细胞核中β-catenin过表达可能对其诊断有重要作用。

S100P基因shRNA慢病毒载体构建与RNA干扰效率鉴定

目的构建S100P基因短发夹RNA(shRNA)慢病毒载体,并在胃癌细胞中鉴定其沉默效率。方法设计S100P基因特异性的RNA干扰序列,构建shRNA慢病毒载体,与S100P过表达质粒共转染293T细胞。随后筛选有效的shRNA慢病毒载体,与pHelper 1.0和pHelper 2.0质粒共转染293T细胞,包装病毒,感染胃癌细胞株MGC-803和SGC-7901。采用RT-PCR和Western blot检测S100P基因的敲减效率。结果成功构建S100P基因的shRNA慢病毒载体,MGC-803和SGC-7901细胞中S100P基因的mRNA和蛋白表达均降低(P<0.05)。结论成功构建的S100P基因shRNA慢病毒载体能够在细胞水平有效沉默靶基因。

胃肠道术后并发Wernicke脑病的诊疗经验总结

目的总结胃肠道术后并发Wernicke脑病的诊疗经验。方法回顾性分析东南大学医学院附属中大医院和附属徐州医院2008年至2017年3例胃肠道术后并发Wernicke脑病患者的临床资料,结合文献报道讨论本病的临床特征及治疗经验。结果患者年龄(53.0±18.2)岁,男性2例,女性1例。3例患者分别因"直肠癌"、"胃癌"以及"肥胖"而行手术治疗。术后3例患者均出现程度不等的眼球震颤、共济失调以及精神障碍表现。实验室检验结果提示3例患者均为高脂血症。磁共振检查1例患者表现为陈旧性脑梗死,2例患者出现丘脑内侧、第三脑室及中脑导水管周围对称性异常信号。3例患者均予维生素B_1肌内注射治疗,患者预后差异较大,2例患者出现症状缓解,1例患者术后2个月死亡。结论胃肠道手术后合并Wernicke脑病临床较为少见,其起病急剧,易于误诊,未及时有效治疗者预后较差,应引起临床医师的重视。