TGF-β1干预下体内兔骨髓间充质干细胞对退变椎间盘治疗的实验研究

[目的]评价在TGFβ1干预下的兔间充质干细胞移植到兔退变椎间盘后是否可诱导向髓核细胞分化并增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量。[方法]采用体外细胞培养技术,将兔骨髓间充质干细胞自骨髓血中分离、纯化和培养,成功传代、纯化后并在TGFβ1干预下植入兔退变椎间盘的模型中。分别于2、4、6、8周用间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量的变化;免疫组化法测定Ⅱ型胶原的含量变化。所得数据经SPSS11.5统计学软件进行统计学处理。[结果]原代培养及传代培养显示兔骨髓间充质干细胞具有活跃的增殖倍增能力,并且8周内蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量的恢复实验组对比模型组增高明显,统计学显示差异有显著性意义。[结论]将TGFβ1干预下的兔间充质干细胞移植到退变椎间盘后可以在一定时间内增加蛋白多糖和Ⅱ型胶原的含量,从而延缓椎间盘退变。

白细胞介素6 mRNA在突出腰椎间盘中的表达及临床意义

目的 探讨白细胞介素 6 (IL 6 )mRNA在突出腰椎间盘组织的表达及临床意义。方法 以RT PCR技术测定不同类型椎间盘髓核、纤维环、软骨终板组织标本IL 6mRNA表达。结果椎间盘突出症组IL 6mRNA表达水平明显高于正常对照组 ,差异非常显著 (P <0 0 0 1)。病变组髓核、纤维环、软骨终板不同部位IL 6mRNA的表达有显著差异 (P <0 0 5 )。根据NorbetBoos的病理组织学分级 ,轻度病变者 11例 ,重度者 14例 ,重度组IL 6mRNA的表达明显高于轻度者 ,有显著统计学意义。不同突出病理类型椎间盘突出类椎间盘型IL 6mRNA的表达有显著差异 ,游离型高于突出型 ,突出型高于凸起型 ,有显著统计学意义。髓核组织中IL 6mRNA的表达与患者的直腿抬高程度 (SLR)呈负相关 (γ =- 0 4 5 7,P =0 0 0 3)。在不同病程阶段患者椎间盘组织中IL 6mRNA的表达无明显差异。结论 IL 6参与腰椎间盘突出的病理过程 ,随病情的加重而分泌增多。IL

白细胞介素-1受体拮抗剂对兔椎间盘髓核前列腺素和5-羟色胺代谢的影响

目的:研究白细胞介素-1受体拮抗剂(IL-1Ra)对兔椎间盘髓核前列腺素E2(PGE2)、前列腺素F1琢(PGF1琢)和5-羟色胺(5-HT)代谢的影响。方法:取日本大白兔椎间盘髓核,制成匀浆后进行髓核组织的体外培养,观察不同浓度IL-1Ra和同一浓度IL-1Ra不同培养时间培养液中PGE2、PGF1琢和5-HT的含量。结果:IL-1Ra(100、200、400ng/ml)实验组较对照组培养液中PGE2、PGF1琢和5-HT的含量显著减少(P<0.01),呈现明显的浓度依赖性;IL-1琢(2.0ng/ml)组和IL-1Ra(200ng/ml)组随培养时间延长,PGE2、PGF1琢和5-HT的含量增加,每个时间段实验组与对照组浓度之差的差异有显著性意义(P<0.01)。结论:IL-1Ra可以拮抗IL-1琢对椎间盘髓核细胞PGE2、PGF1琢和5-HT合成的促进作用,呈现明显的浓度依赖性。IL-1Ra可以较长时间拮抗IL-1琢生物学作用,但本实验未能证明此作用具有时间依赖性。

颈椎后纵韧带胶原、蛋白多糖、钙含量变化的研究

[目的]通过定量测定颈椎后纵韧带总胶原、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白多糖和钙含量改变,探讨颈椎后纵韧带在颈椎病发病机理中的意义。[方法]收集脊髓型颈椎病下位颈椎后纵韧带15例作试验组,同年龄段正常下位颈椎后纵韧带10例作对照,Weossner法测定两组总胶原含量;酶联免疫吸附法测定Ⅰ型、Ⅱ型胶原含量;间苯三酚分光光度法测定蛋白多糖含量;甲基百里香酚蓝比色法测定钙含量;进行HE染色和Masson染色,对比观察后纵韧带的显微结构变化特点。[结果]试验组总胶原、Ⅰ型胶原和蛋白多糖含量低于对照组;试验组Ⅱ型胶原含量较对照组高;试验组Ⅰ型/Ⅱ型胶原比值低于对照组;试验组钙含量较对照组高,组间对比均有统计学意义(P<0.05);病理结构显示试验组弹力纤维、胶原纤维肿胀,排列紊乱。[结论]颈椎病患者颈椎后纵韧带退变,总胶原、Ⅰ型胶原、Ⅱ型胶原、蛋白多糖和钙代谢发生紊乱,颈椎后纵韧带分子水平的生物化学变化与颈椎病发生发展有密切关系。

糖尿病患者肌腱病变研究现状

糖尿病患者合并肌腱病变,尤其是跟腱损伤时,常常并发足底溃疡,最终发展成为糖尿病足。目前关于糖尿病患者肌腱病变的研究已从最初简单的大体形态改变、生物力学特性变化等逐步发展到组织病理学和分子生物学水平。

成年大鼠嗅球嗅鞘细胞的纯化实验(英文)

背景:嗅鞘细胞的纯化方法以及嗅鞘细胞纯度的不同被认为与嗅鞘细胞移植后的效果有关。因此,开发高效、便于统一的纯化方法对嗅鞘细胞移植研究的标准化非常重要。目的:为嗅鞘细胞移植研究的标准化提供一个高效、便于统一的纯化方法。设计:随机对照实验。单位:东南大学临床医学院附属中大医院骨科,东南大学临床医学院中心实验室,东南大学临床医学院实验动物中心。材料:实验于2006-02/08在东南大学临床医学院中心实验室完成。选用28只成年雌性SD大鼠,体质量200￣250g;DMEM/F-12(GIBCO);2.5g/L胰蛋白酶(GIBCO);左旋多聚赖氨酸(SIGMA);牛垂体萃取液(SIGMA);胎牛血清(杭州四季青生物试剂公司);兔抗p75抗体(SIGMA);生物素化羊抗兔IgG(武汉博士德生物技术公司);MTT试剂盒(SIGMA)。方法:将SD大鼠嗅球中分离出嗅鞘细胞的原代培养物,体外培养8d,将培养物分为4组:差速贴壁组、免疫吸附组、改良方法组、对照组。①改良方法组细胞悬液接种到未经包被的培养瓶在37℃、体积分数为0.05CO2的环境中孵育1h,将上清液接种到培养瓶中(底面用1mg/L的兔抗p75抗体润湿后在37℃下烘干,再用DMEM/F-12洗涤1次)。上清液在这种已包被兔抗p75抗体的培养瓶中37℃、体积分数为0.05CO2下孵育45min,DMEM/F-12洗涤5遍以清除未贴壁的细胞,用细胞刮刀收获贴壁细胞、离心、重新悬浮在含20mg/L牛垂体萃取液和10万U/L青链霉素的D/F-10S中;Nash差速贴壁组细胞按Nash的方法进行操作;抗p75抗体免疫吸附组细胞按照Ramo’n-Cueto的方法进行操作;上述纯化方法获得的3组细胞悬液分别接种到包被左旋多聚赖氨酸的24孔细胞培养板中,在37℃、体积分数为0.05CO2的环境中培养14d。对照组未经纯化的细胞悬液同样重新悬浮在含20mg/L牛垂体萃取液和10万U/L青链霉素的D/F-10S中并接种到包被左旋多聚赖氨酸的24孔细胞培养板中,培养条件同其他组。②在各组处理结束后2,5,8,10,12,14d进行嗅鞘细胞纯度比较,每组每个时间点都随机选择15个视野计算嗅鞘细胞比例,这15个数值的平均值代表嗅鞘细胞纯度,从而评估这种改良方法的纯化效率。③分别用MTT法检测处理后第14天各组细胞活力。主要观察指标:各组嗅鞘细胞纯度、处理后14d细胞活力检测结果。结果:①改良方法组每个时间点的嗅鞘细胞纯度都高于其他3组(P<0.05～0.01),各组嗅鞘细胞纯度都随培养时间延长而降低,但改良方法组的纯度变化最小,改良方法组最后1个时间点的纯度仍然很高(92.1±1.2)%,而其他组最高只有(85.2±2.2)%。②处理结束后第14天,改良方法组嗅鞘细胞细胞活力与其他组细胞活力差异无显著性(P=0.895)。结论:本组纯化成年大鼠嗅球嗅鞘细胞的改良方法是高效的,而且对嗅鞘细胞的活力无额外损害,将有益于嗅鞘细胞研究的标准化。

颈椎后纵韧带总胶原、Ⅰ型和Ⅱ型胶原含量变化的研究

目的通过测量脊髓型颈椎病患者和正常对照组颈椎后纵韧带总胶原、Ⅰ型和Ⅱ型胶原含量,探讨颈椎后纵韧带在颈椎病发病机制中的意义。方法收集脊髓型颈椎病下位颈椎后纵韧带15例做实验组,同年龄段正常下位颈椎后纵韧带10例做对照组,Weossner法测定2组总胶原含量;酶联免疫吸附法测定Ⅰ型和Ⅱ型胶原含量;HE染色和Masson染色,对比观察后纵韧带的显微结构变化。结果实验组总胶原、Ⅰ型胶原含量低于对照组;实验组Ⅱ型胶原含量较对照组高;实验组Ⅰ型/Ⅱ型胶原比值明显低于对照组,差异有统计学意义(P<0.05);病理显示实验组弹力纤维、胶原纤维肿胀,排列紊乱。结论颈椎后纵韧带总胶原、Ⅰ型和Ⅱ型胶原代谢发生紊乱,与颈椎病发生发展有密切关系。

氨甲环酸在全髋关节置换术中的应用进展

目的:通过回顾既往公开发表的研究所提供的证据,对全髋关节置换术中使用氨甲环酸来减少出血量的有效性及安全性进行评估,同时对氨甲环酸的最佳剂量及给药方式进行探讨。方法:以"Tranexamic acid;Total hip arthroplasty;Blood loss;Method of administration;Venous thromboembolism"为检索词,对Pub Med,Medline,Cochrane,Ovid,Science Direct数据库进行检索,纳入标准:(1)英文文献;(2)患者为成年患者;(3)文章主题为氨甲环酸在全髋关节置换术中的应用。排除标准:(1)关于其他关节置换手术的研究;(2)关于根治性矫形手术的研究。结果:(1)使用氨甲环酸可减少全髋关节置换术术后的出血;(2)通过与安慰剂组或对照组进行比较可以发现氨甲环酸组患者深静脉血栓形成的发病率低于安慰剂或对照组;(3)氨甲环酸的给药途径包括静脉给药(最常见),局部给药和口服给药(最少见);(4)对于不同的给药途径,给药时间导致给药剂量也存在很大分歧。结论:氨甲环酸应用于全髋关节置换术,可以降低术中和术后失血量,尤其是术后失血量,进而降低临床输血量,降低因失血和输血导致的感染等并发症和副反应发生的风险。同时,氨甲环酸安全性良好,并不会额外增加静脉血栓栓塞发生的风险。但是,现有研究在给药途径和使用剂量等方面仍存在很大分歧,因此,未来的工作重点应集中于如何就氨甲环酸在全髋关节置换术中的使用时间、给药途径和使用剂量等方面进行优化,取得共识。

骨组织工程中种子细胞的选择

组织工程学是把材料学和生命学科有机结合的一门现代学科 ,材料学和细胞学的协同发展有效的促进了组织工程学的发展 ,材料载体学已取得了相当的发展 ,学者们面临着如何在骨组织工程中选取高效、便捷的种子 ,使工程化骨有效修复治疗骨缺损等骨骼疾病。细胞本文仅就组织工程学中种子细胞的发展一简要综述 。

椎间盘镜腰椎间盘切除术与开放式手术对患者应激反应的实验研究

[目的]研究椎间盘镜腰椎间盘切除术与开放式手术对患者细胞因子应激反应的影响。[方法]前瞻性随机对照研究:选择符合研究条件的病人,随机分为两组。一组采用椎间盘镜(METRx)行后路腰椎间盘髓核摘除术,另一组行开放式腰椎间盘髓核摘除术,各约30例。采用酶联免疫吸附试验(ELISA)法分别检测手术前和手术后第1、2、4、8、24、48h患者血清中白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)、肿瘤坏死因子-α(TNF-α)的数值。同时检测各时段血清C反应蛋白(CRP)和外周血白细胞(WBC)数量。[结果]采用椎间盘镜髓核摘除术(MED)组相比开放式手术(OD)组手术切口小、出血少、住院时间短,但手术时间偏长。两组手术前后比较肢体疼痛视觉模拟评分(VAS)值均明显降低。术后24h两组CRP值均达到峰值,但OD组较MED组(CRP)值明显升高。术后8h左右IL-1β、IL-6、TNF-α均达到峰值,OD组较MED组IL-1β、IL-6、TNF-α值均明显升高。术后24hWBC数量OD组较MED组明显升高。[结论]椎间盘镜(METRx)腰椎间盘切除术与开放式手术相比,患者组织细胞因子应激反应小,创伤小,疗效接近。

IL-1、IL-6、TNF与手术创伤应激反应的研究概况

应激（stress）是由被称为应激原（stressor）的各种强烈刺激作用于机体后引起的一系列非特异的神经-内分泌反应。其主要特征是交感神经兴奋、垂体-肾上腺皮质激素分泌增多以及由此引起的各种机能、代谢的变化，包括免疫功能的变化。本文重点讨论外科手术对细胞因子的影响。

股骨头无菌性坏死的组织移植治疗进展

股骨头无菌性坏死 (ANFH)是一种常见于 30～ 5 0岁中老年性疾病 ,其病因学最常见于股骨颈骨折、酒精性、激素性。关于其发病机理至今尚不清楚 ,较为公认的学说是“缺血—压力增高学说”。早期诊断手法以 MRI成像最具价值 ,治疗主要分为手术治疗和非手术治疗 ,非手术治疗的长期疗效多家文献报道较差 ,主要的手术治疗方法包括髓心减压术、血管束移植术 ,自体、同种异体骨移植术 ,截骨术 ,以及人工全髋关节置换。各种手术方法疗效报道均具有争议性 ,本文就近年颇具治疗应用前景的组织移植技术 (包括血管移植技术 ,自体、异体骨移植技术 )治疗 ANFH作一概要综述。

后路椎弓根内固定椎体间融合术治疗腰椎滑脱症

目的：探讨后路椎弓根内固定椎间融合术治疗腰椎滑脱症的方法和疗效。方法：选择症状较为典型的腰椎滑脱症病例118例，采用RF椎弓根内固定及后路椎体间融合技术治疗腰椎滑脱症。结果：本组118例患者全部获得随访，随访时间6～30个月，平均24个月，滑脱复位率89，8％（106／118），椎体间融合率91．5％（108／118），无再滑脱现象。所有患者症状均有所缓解。无严重并发症发生。结论：RF椎弓根内固定椎体间融合术可直接复位滑脱椎体，即刻稳定病变节段，增加椎间孔截面积间接扩大侧隐窝而缓解对神经根的卡压，提高融合率。

微创颈前路减压融合术治疗急性颈椎间盘突出症

目的探讨微创颈前路减压融合术治疗急性颈椎间盘突出症的应用价值。方法对33例急性颈椎间盘突出症患者术前进行磁共振成像（MRI）和CT检查确诊，行微创颈前路颈椎间盘髓核摘除术，同时行减压及颈椎椎体间融合器融合术。随访28例，平均随访时间22．6月，观察病人的椎体间高度、颈椎生理曲度、融合率、内植物并发症并进行功能评价。结果。28例均获得骨性愈合，术后椎体间高度和颈椎生理曲度维持满意，未发生内植物并发症。采用Odom评定，22例，良4例，一般2例，差0例，优良率92．8％。结论微创颈前路减压融合术治疗急性颈椎间盘突出症，可及早解除脊髓压迫，并使颈椎融合节段获得术后即刻稳定，提高椎体间骨性融合率和维持术后椎体间高度，并能维持脊髓减压疗效。

后路椎间盘镜(METRx)腰椎间盘髓核摘除术135例

目的 :探讨后路椎间盘镜 (METRx)腰椎间盘髓核摘除术的操作治疗要点和临床效果。方法 :采用METRx下腰椎间盘髓核摘除术治疗腰椎间盘突出症患者 135例。结果 :本组病人术后MRI检查显示突出椎间盘得以摘除 ,脊髓及神经根已获得充分减压 ;无手术并发症发生。全组病人均获得随访 ,平均随访时间 8.5个月 ,临床疗效优良率为 93.3%。结论 :METRx腰椎间盘髓核摘除术具有手术切口小、创伤小、神经根减压彻底、术后恢复快等特点 ,适用于除术后复发以外的各种类型的腰椎间盘突出症。

运动疗法预防绝经期女性骨质疏松骨折的临床实效性评价

目的对运动疗法预防绝经期女性骨质疏松骨折的临床实效性进行观察与探讨。方法选择本医院自2011年5月—2012年6月接诊的PMO患者66例,根据研究要求并按照个人意愿将患者分为对照组和运动组,运动组患者在常规治疗基础上给予运动疗法,而对照组仅给予常规治疗。考察经运动干预后患者的骨密度变化,腰椎骨痛感和预后骨折发生概率。并利用SPSS19.0软件对2组差异进行统计学分析。结果运动组在治疗后12个月的骨密度较治疗前有明显上升,差异有统计学意义(P<0.05);对照组在也有上升,但是差异没有统计学意义(P>0.05)。经MP的干预治疗患者的骨痛改善指数明显降低,然而对照组的骨痛指数则出现增加。经t检验,运动组干预前后的差异具有统计学意义(P<0.05)。未经运动干预的对照组中骨折发生概率达30%,而经运动疗法干预治疗的骨折发生概率只有8.4%,其骨折的发生概率明显低于对照组,且差异具有统计学意义(P<0.05)。结论运动疗法对PMO患者的骨密度有很好的提升,并能改善患者的腰椎骨痛感以及减少骨折的发生概率。因此,运动疗法能够改善PMO的临床症状,值得在临床上推广。

深低温冷冻对大鼠髌腱组织内肌腱干细胞生物学特性影响的研究

目的探讨深低温冷冻处理对大鼠髌腱组织中肌腱干细胞(tendon-derived stem cells,TDSCs)的成活、细胞活力、早期凋亡、迁移能力及肌腱相关基因表达的影响。方法取12只4月龄雄性SD大鼠双侧髌腱组织,其中6只大鼠12条髌腱组织(实验组)进行深低温冷冻处理;剩余髌腱组织(对照组)不作处理,作为正常对照。取两组髌腱组织用0.3%Ⅰ型胶原酶消化获得有核细胞,分别用锥虫蓝染色检测有核细胞成活率、结晶紫染色检测有核细胞克隆形成能力;取两组髌腱组织分离培养TDSCs,并传至第3代,采用Alamar Blue法检测细胞体外增殖能力;Annexin V-FITC/PI双染法检测细胞早期凋亡率;Transwell法检测细胞迁移能力;实时荧光定量PCR检测细胞肌腱相关基因Ⅰ型胶原(collagen typeⅠ,Col1α1)、scleraxis(Scx)和tenomodulin(Tnmd)m RNA表达。结果与对照组(91.00%±3.63%)比较,实验组原代有核细胞成活率为61.65%±4.76%,差异有统计学意义(t=12.010,P=0.000)。两组有核细胞接种后,均呈克隆样生长;培养12 d,实验组每1 000个有核细胞克隆集落形成数为(8.41±0.33)个,较对照组(15.19±0.47)个显著减少(t=28.910,P=0.000)。实验组TDSCs占活性有核细胞比例为1.37%±0.09%,较对照组1.67%±0.10%显著减少(t=5.508,P=0.003)。第3代TDSCs培养14 d内两组细胞生长趋势一致;两组各时间点吸光度(A)值比较,差异均无统计学意义(P>0.05)。实验组及对照组TDSCs早期凋亡率分别为1.67%±0.06%、1.63%±0.06%,比较差异无统计学意义(t=0.707,P=0.519)。镜下见,两组均有TDSCs黏附于Transwell小室下室,实验组细胞数为(445.00±9.70)个,对照组为(451.50±12.66)个,比较差异无统计学意义(t=0.998,P=0.342)。实验组Col1α1、Scx、Tnmd的m RNA相对表达量分别为3.498±0.065、0.062±0.002、(4.211±0.211)×10–5,对照组分别为3.499±0.113、0.062±0.001、(4.341±0.274)×10–5,比较差异均无统计学意义(t=0.013,P=0.991;t=0.042,P=0.969;t=0.653,P=0.549)。结论大鼠肌腱组织经深低温冷冻后其有核细胞成活率降低,但肌腱组织仍保留大量有活性TDSCs,且细胞增殖能力、早期凋亡率、体外迁移能力及成肌腱分化能力未见明显异常。