差异显示技术在肝病基因研究中的应用

流行病学调查显示中国乙肝病毒的感染率达50%以上,但是却只有小部分人发病,这说明乙肝病毒感染机体后,宿主的个体差异对其病变发生发展的方向起了决定性作用。肝病基因模式在病毒感染后的病程发展中有着举足轻重的作用,随着差异显示技术的日新月异,为肝病基因表达模式提供了一系列简便高效可行的方法,此文结合差异显示技术在肝病基因研究中的应用作一综述。

抗-HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异

研究抗 -HBe阳性乙型肝炎病毒C基因启动子 (CP)和前C基因变异。用基因序列分析检测基因变异。(1)抗 -HBe阳性患者的前C终止变异 (nt1896G→A)的发生率显著高于抗 -HBe阴性组 (P <0 0 0 1) ;而CP双变异(nt176 2A→T和 176 4G→A)则在两组中无明显差异。 (2 )同抗 -HBe阳性慢性乙肝组比较 ,抗 -HBe阳性重型乙肝患者的前C终止变异和CP双变异发生率无明显差异 ,而CPnt175 2A→G变异发生率则显著增高 (P <0 0 5 )。前C终止变异与抗 -HBe阳性乙型肝炎密切相关 ;而CPnt175 2变异则可能与抗

健康成人外周血T淋巴细胞亚群绝对计数正常值调查

目的 建立健康成年人外周血T淋巴细胞亚群绝对计数正常参考值。方法 使用三标荧光抗体及TriCOUNT计数管 ,分别对 2 98例健康成年人外周血T淋巴细胞亚群进行标记 ,采用FACSCaliburTM型流式细胞仪进行检测并分析结果 ,SPSS 10 .0软件进行统计学处理。结果 18～ 5 7岁健康成年人外周血中CD3+ 细胞绝对计数值为 (12 4 2± 4 0 4 )个 / μl ;CD3+ CD4 + 细胞的绝对计数值为 (6 5 1± 2 0 9)个 / μl ;CD3+ CD8+ 细胞的绝对计数值为 (5 2 4±2 83)个 / μl ;CD3+ CD4 + CD8+ 细胞的绝对计数值为 (17± 10 )个 / μl。男性CD3+ 、CD3+ CD8+ 细胞数比女性显著升高(P <0 .0 1)。结论 在相同地域、相同种族 ,可以建立健康成年人外周血的T淋巴细胞亚群绝对计数正常参考值。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响

目的 研究乙型肝炎病毒 (HBV)C基因启动子 (CP)和前C基因变异对HBeAg含量和HBVDNA定量及肝炎病情的影响。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 75例慢性乙肝、 14例慢性重型乙肝和 34例肝硬化患者的血清HBVCP和前C基因序列 ,通过微粒子发光法定量检测血清中HBeAg的含量 ,通过荧光定量PCR技术检测血清HBVDNA含量。结果 (1)中度和重度慢性乙型肝炎 (CH)患者CP双变异 (nt176 2A→T和 176 4G→A)的发生率同轻度CH组比较显著升高 (分别为 6 1 3%和 6 1 1%VS 2 3 1% ) ;肝硬化组患者CP双变异发生率同CH组比较显著升高(76 5 %VS 4 8 0 % )。前C基因终止变异 (nt1896G→A)在重型乙型肝炎患者中的发生率显著升高 (71 4 % )。 (2 )双变异组和终止变异组患者HBeAg含量均显著下降 ,但后者下降更明显。双变异组的HBeAb阳性率和对照组比较无明显差异 ,但终止变异组的HBeAb阳性率同双变异组和对照组比较差异显著。终止变异联合双变异组的HBeAg含量及HBeAb阳性率同终止变异组相似。 (3)双变异组和对照组患者HBVDNA含量间无明显差异。结论 CP双变异和前C基因终止变异均影响HBeAg表达 ,但后者影响更大 ;在对病情影响上 ,前者与肝硬化发病有关 ,后者则与重型乙肝发病有关。

乙型肝炎病毒C基因启动子和前C终止变异与乙型肝炎标志物模式的关系及临床意义

目的 研究乙型肝炎病毒C基因启动子和前C基因终止变异与乙型肝炎标志物模式的关系 ,并分析其临床意义。方法 通过基因测序法分析检测 10 4例乙型肝炎患者血清中C基因启动子和前C基因终止变异情况 ,采用微粒子发光分析法和荧光定量聚合酶链法 (PCR) ,分别检测血清中乙型肝炎e抗原 (HBeAg)和乙型肝炎病毒脱氧核糖核酸 (HBV DNA)含量 ,并进行比较分析。结果 乙型肝炎表面抗原 (HBsAg)、HBeAg、乙型肝炎核心抗体 (抗 HBc)阳性患者 176 2T/176 4A双变异率显著高于HBsAg、乙型肝炎e抗体 (抗 HBe)、抗 HBc阳性患者 ,而 1896G→A终止变异率和联合变异 (双变异合并终止变异 )率显著低于HBsAg、抗 HBe、抗 HBc阳性组 ,73例HBsAg、HBeAg、抗 HBc阳性患者中 32例无变异者 ,其HBeAg定量值显著高于其他有变异者 ,31例HBsAg、抗 HBe、抗 HBc阳性患者中有 4例无双变异和终止变异 ,其HBV DNA定量值显著低于其他患者。结论 176 2T/176 4A双变异和 1896G→A终止变异可使HBeAg含量显著下降 ,其变异株并不影响病毒的复制。 176 2T/176 4A双变异和 1896终止变异株的优势积累并逐渐取代野生株是HBeAg向抗抗

流行性乙型脑炎患儿IL-10、IL-12和TNF-α变化的临床意义

目的 :检测流行性乙型脑炎 (乙脑 )患儿脑脊液及血清中白细胞介素 (IL) 10、IL 12和肿瘤坏死因子 (TNF) α水平 ,以探讨其在发病机制中的作用。方法 :3 1例乙脑患儿分别于急性期和恢复期留取血清及脑脊液 ,-2 0℃冻存。IL 10、IL 12和TNF α的检测采用ELISA法。结果 :急性期血清、脑脊液中IL 10、IL 12、TNF α水平均升高 ,而恢复期降低。急性期脑脊液中IL 10、IL 12和TNF α水平较同期血清中的高。TNF α的水平与疾病轻重程度呈正相关 ,而IL 10、IL 12水平与疾病严重程度无关。IL 10与TNF α的水平呈正相关 ,而其它细胞因子间未见明显相关性。结论 :(1)细胞因子IL 10、IL 12和TNF α参与乙脑的发病。(2 )TNF α可能直接参与并介导免疫损伤 ;内源性IL 10未显示出有效地抑制其它炎症因子释放的作用 ,可能也参与了炎症过程 ;IL 12可能具有抗病毒作用。 (3 )乙脑时IL 10、TNF α可能主要在中枢神经系统局部产生。 (4 )选用某些细胞因子或通过抑制某些细胞因子的释放可为临床治疗乙脑提供新的途径。

HGV单独及重叠HBV、HCV感染64例临床分析

目的 :了解庚型肝炎病毒 (HGV)单独及重叠乙型肝炎病毒 (HBV)、丙型肝炎病毒 (HCV)感染的临床特征 ,探讨其致病性。方法 :用套式聚合酶链反应 (PCR)检测患者血清中HGVRNA ,用ELISA和 (或 )PCR法对其他肝炎病毒标志物进行血清学检测。结果 :从临床分型来看 ,HGV单独感染者以急性肝炎 (AH)多见 ,占 47.1% ;重叠HBV感染者以肝硬化 (LC)多见 ,占 5 1.3 % ;重叠HCV感染者以慢性肝炎 (CH)多见 ,占 75 %。各组间比较均有显著性差异 (P <0 .0 5 )。从肝功能恢复情况来看 ,各组间均无显著性差异 (P >0 .0 5 )。结论 :HGV单独感染多表现为AH ,重叠HBV、HCV感染时对病情影响不明显 。

乙型肝炎病毒C基因启动子变异与基因型和肝硬化的关系

目的 研究HBVC基因启动子 (CP)和前C基因变异与HBV基因型和病情的关系。方法 通过DNA扩增、基因序列分析检测 4 4例慢性乙型肝炎 (CH) ,2 9例肝硬化 (LC)患者的血清HBVS基因序列以确定其基因型 ,测定HBVCP和前C区序列以确定其变异状况。结果 (1)CP双变异 (nt 176 2A→T和 176 4G→A)的发生率肝硬化组为75 9% ,慢性乙型肝炎组为 4 5 5 % ,两组间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。 (2 )LC患者的C基因型检出率为 6 9 0 % ,CH患者的C基因型检出率为 4 3 2 % ,二者间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。 (3)C基因型HBV感染者CP双变异发生率为 6 9 2 % ,B基因型HBV感染者CP双变异发生率为 4 4 1% ,二者间差别有显著性意义 (P <0 0 5 )。结论 CP双变异与C基因型密切相关 ,并且导致病情向肝硬化发展。

流行性乙型脑炎患者体内干扰素变化的临床意义

目的 :了解流行性乙型脑炎 (乙脑 )患者体内干扰素 (IFN)水平的变化。方法 :采用细胞病变抑制法 (CPE)检测5 1例乙脑患者血清及脑脊液 (CSF)中的IFN水平。结果 :(1)急性期血清及CSF中的IFN水平均显著升高 ,恢复期显著下降 ,但仍明显高于正常对照 ;CSF中的含量高于血液 ,并与病情的严重程度关系密切。 (2 )采用IFN肌肉注射治疗的患者用药后血清中IFN升高 ,但CSF中IFN水平未见升高 ,而且临床主要症状及体征改善与未用IFN组无显著差异。结论 (1)IFN参与了乙型脑炎的发病过程。 (2 )IFN治疗并不能提高疗效 ,临床上不易贸然使用 ,需寻找其它更为有效的抗病毒治疗方法。

血清HBV DNA含量在乙型肝炎诊治中的临床价值

目的 :了解乙型肝炎 (乙肝 )患者血清HBVDNA含量在乙肝诊治中的临床价值。方法 :采用荧光定量PCR技术定量检测 13 9例乙肝患者血清中HBVDNA含量 ,比较不同病变程度患者血清中HBVDNA含量的差异 ,同时检测其病毒标志物和丙氨酸转氨酶 (ALT)水平并进行比较分析。结果 :急性乙肝 (AH)患者血清中HBVDNA含量〔(2 .14± 2 .96)拷贝·ml-1〕显著低于慢性乙肝 (CH)〔(5 .3 6± 2 .3 4)拷贝·ml-1〕和活动性肝炎肝硬化 (LC)患者〔(4 .96± 2 .3 3 )拷贝·ml-1〕 ;HBeAg阳性组患者血清中HBVDNA含量显著高于HBeAg阴性组 ,而且HBeAg、HBeAb阴性组仍可检出较高水平的HBVDNA ;血清HBVDNA含量与ALT无相关关系。结论 :血清HBVDNA含量与不同类型肝病和病毒标志物有一定相关性 ,与ALT无相关关系 。

南京地区乙型肝炎病人HBV基因型的分子生物学特性及临床意义

目的 研究南京地区乙型慢性肝病病人HBV基因型与CP和前C区基因变异及与病情的关系。方法 选取慢性乙型肝炎(CH)44例，慢性重型乙型肝炎(CSH)4例，肝硬化(LC)29例病人血清，测定HBVS基因序列以确定其基因型，测定HBVCP和前C区序列以确定其变异状况。结果 南京地区乙肝病人的HBV基因型以B型和C型为优势基因型，分别为48．1％和51．9％；LC病人的C型检出率显著高于CH组(69、0％vs43．2％，x^2=4．67，P<0．05)；C型HBV感染者的CP双变异发生率显著高于B型组(67．5％vs40．5％，x^2=4．58，P<0．05)。结论南京地区乙肝病人的FIBV基因型以B型和C型为优势基因型。C基因型病毒易发生CP双变异，并且导致病情向肝硬化发展。

乙型肝炎病毒传播母婴阻断1月龄婴儿乙型肝炎病毒标志物模式及临床意义

目的探讨乙型肝炎病毒传播母婴阻断1月龄婴儿乙型肝炎病毒血清学标志物（HBVM）模式及临床意义，为乙型肝炎病毒母婴传播的阻断深入探讨提供依据。方法采用美国Abbott单克隆酶联免疫试剂检测孕妇及婴儿HBVM。结果经过分析归纳，临床上有14种HBVM模式。结论HBsAg、HBeAg、HBcAb三项阳性孕妇官内母婴阻断失败率仅为3．43％，因此，对婴儿加强疫苗接种或进行免疫干预有重要意义。

乙型肝炎病毒X基因PCR产物直接测序方法的建立和临床应用

乙型肝炎病毒各个区变异的研究是当前的研究热点。已经知道，HBV有S区、C区、P区和X区四个区。其中X区的变异可影响核心启动子和增强因子Ⅱ，产生翻译终止密码，导致HBV DNA复制和表达的抑制。研究HBV变异的方法有多种，而确定变异位点最直接的方法就是DNA测序。目前，DNA序列分为引物标记法和末端标记法两种，本研究拟通过PCR扩增HBV X基因，并用引物标记法对其测序，拟建立一个快速、简便、低成本的测序方法。研究HBV X基因变异从而为研究其他目的基因的变异提供有效的方法。