胰岛素增敏剂对糖尿病患者胰岛素受体激酶的影响

目的针对糖尿病患者胰岛素受体缺陷导致的胰岛素抵抗,观察胰岛素增敏剂罗格列酮和吡格列酮对2型糖尿病患者胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶活性的影响。方法实验于2001-10/2003-03在东南大学基础医学院生化教研室完成。应用W GA-Sepharose4B亲和层析方法分离纯化来自正常人16例、糖尿病患者16例、肥胖症患者22例3组人群的血红细胞膜胰岛素受体,分别在罗格列酮或吡格列酮作用下应用同位素示踪法测定受体蛋白酪氨酸激酶活性的变化,激酶活性用多肽底物磷酸化的程度表示。结果16例正常人,16例糖尿病患者,22例肥胖症患者的血样均进入结果分析。①正常人、糖尿病患者、肥胖症患者3组红细胞膜受体蛋白酪氨酸激酶活性均呈胰岛素剂量依赖关系。②与正常对照组相比[(781.86±120.23)fm ol/(m g·m in)],糖尿病组与肥胖症组的红细胞膜蛋白酪氨酸激酶和纯化胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶的活性均显著降低[(230.09±35.87),(253.57±37.38)fm ol/(m g·m in)]。吡格列酮和罗格列酮均可以明显改善糖尿病患者和肥胖症患者的纯化胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶的活性[(830.63±166.96),(800.79±153.45)fm ol/(m g·m in),P<0.01;(664.92±119.33),(567.98±103.47)fm ol/(m g·m in),P<0.01]。结论罗格列酮和吡格列酮可能部分通过直接激活胰岛素受体蛋白酪氨酸激酶的活性来改善胰岛素敏感性。

新型融合蛋白hIL15M-TNFαM表达质粒的构建

目的 构建hIL15M -TNFαM融合毒素的表达质粒 ,为该融合毒素的功能研究及临床应用前景的分析评价奠定基础。方法 通过PCR删除hIL15 5′端前 8个氨基酸残基的编码序列获得人白介素 15突变体 (hIL15M ) ,将hIL15M基因片段与人工改造的TNFα基因按正确的阅读框架融合 ,定向克隆于表达载体pET16b。结果 经酶切分析 ,所构建的质粒均插入hIL15M -TNFαM融合基因。结论 利用 pET16b表达载体成功构建融合毒素hIL15M