与人类关系密切的7种动物对戊型肝炎病毒易感性的初步研究

目的 用双抗原夹心法ELISA (DS -ELISA)和逆转录巢式PCR法 (RT -nPCR)研究与人类生活关系密切的猪、犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等 7种动物对戊型肝炎病毒 (HEV)的易感性。方法 用多基因型HEV重组蛋白建立检测HEV抗体的DS -ELISA ,并用于 5 91份猪、警犬、家犬、宠物犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔等多种动物血清标本的HEV抗体检测 ;用HEV多基因型通用性引物RT -nPCR扩增 14 3份犬血清标本HEVRNA。结果 在猪、家犬和宠物犬血清标本中检测到HEV抗体 ,阳性率分别为 4 3 93%、15 19%和 4 6 5 % ,但在警犬、山羊、鸡、鸭、鸽子和兔血清标本中未检测到HEV抗体 ;14 3份犬血清标本用RT -nPCR未扩增出HEVRNA。结论 用多基因型HEV重组蛋白建立的双抗原夹心法ELISA适用于多种动物血清标本HEV抗体的检测 ;猪和犬对HEV易感 ,在HEV传播中可能起重要作用。

载体和基因片段的选择对戊型肝炎病毒基因免疫抗原表达的影响

目的比较不同载体和不同大小的目的基因片段对戊型肝炎病毒(HEV)基因免疫抗原表达的影响,为基于HEV中和抗原表位的HEV基因免疫提供一定的依据。方法将含Ⅳ型HEV中国株中和抗原表位的p166和p179片段编码基因分别克隆入pTR421和pCDNA3.1两种真核表达载体,用脂质体介导基因转染HepG2人肝癌细胞系,经间接免疫荧光和Western blot分析以及将质粒注射小鼠局部肌肉组织后经免疫组织化学染色检测,分析目的基因在体内外的表达水平。结果成功构建了pTR421-166、pTR421-179、pCDNA3.1-166和pCDNA3.1-179四种重组质粒,经限制性内切酶双酶切和核苷酸测序鉴定,编码基因正确无误;pTR421-179转染的细胞以及注射小鼠的局部肌肉组织可以检测到p179的表达,而pCDNA3.1-179、pCDNA3.1-166以及pTR421-166均检测不到目的基因在体内、外的抗原表达。结论载体和目的基因片段的选择显著影响HEV抗原在体内、外的表达,直接关系到基因免疫的成功与否。

探讨BCG初次免疫结核杆菌DNA疫苗加强免疫方案的效应

目的:探讨BCG初次免疫(BCG-prime),结核杆菌共表达DNA疫苗加强免疫(DNA疫苗-boost)的策略对小鼠的免疫效果。方法:将BCG及结核杆菌重组DNA疫苗依次免疫小鼠,通过检测CTL和NK细胞的杀伤活性和特异性淋巴细胞增殖,以及小鼠血清抗体及细胞因子的水平,观测BCG-prime、共表达结核杆菌Ag85A/GM-CSFDNA疫苗boost策略对小鼠的免疫效果。结果:采用prime-boost免疫策略组的小鼠CTL的杀伤活性明显增强、特异性淋巴细胞明显增殖、IFN-γ的水平明显增高,NK细胞杀伤活性与对照组相比也有一定提高,但未超过BCG单独免疫效果。免疫小鼠血清特异性抗体的滴度超过单独DNA疫苗免疫组。结论:在采用BCG-prime-结核杆菌DNA疫苗boost免疫策略后,能增强对小鼠的免疫效应,尤其是Th1型细胞免疫反应增强明显,为进一步在动物体内进行保护性效应试验的研究提供了实验依据。

无血清培养的SP2/0细胞肿瘤学特性的研究

目的:研究无血清培养条件下SP2/0细胞的相关肿瘤学特性。方法:应用MTT法检测用无血清培养所得的SP2/0细胞的增殖能力及这些细胞中SP细胞的比例,并检测它们的体内致瘤性。结果:SP2/0细胞在无血清培养基中增殖缓慢,但当把它们放回含血清培养中,则表现出比普通培养的SP2/0细胞有更高的增殖能力;无血清培养可以使SP2/0细胞中的SP细胞比例增加;无血清培养的SP2/0细胞比普通培养的SP2/0细胞在鼠体内有更高的体内致瘤性。结论:无血清培养可以增加SP2/0细胞中具有干细胞特性的瘤细胞比例,即可以富集SP2/0细胞的肿瘤干细胞。

T细胞过继免疫治疗恶性实体肿瘤研究进展

过继细胞免疫治疗（adoptive cellular immunotherapy，ACI）在血液系统疾病的临床应用已获得广泛认可，尤其在目前疫苗免疫治疗还存在着不能有效抑制微小残留肿瘤生长等多种因素而限制了其临床应用的前提下，ACI在恶性实体肿瘤治疗中的应用研究也引起了人们的普遍关注。

结核DNA疫苗免疫策略研究进展

近年来,结核DNA疫苗的研制得到飞速发展,在传统结核DNA疫苗的基础上构建新型DNA疫苗以及基于结核DNA疫苗的PrimeBoost免疫策略的研究成为热点,新的接种途径及接种技术有助于提高DNA疫苗在试验动物的免疫保护作用,同时对结核DNA疫苗的安全性也不可忽视。

抗菌新药甲磺酸加替沙星的药效学实验研究

目的 :研究抗菌新药甲磺酸加替沙星粉剂的体外抗菌效果和体内保护作用 ,并与国家药品监督管理局已批准进入临床研究的加替沙星粉剂进行比较。方法 :按照我国二类新药抗生素类药效学实验指导原则 ,选用试管对倍稀释法作体外抗菌实验及KM小白鼠作体内保护实验。结果 :甲磺酸加替沙星和阳性对照药加替沙星对 14种 (2 3 2株 )临床菌株和质控菌株的最小抑菌浓度 (MIC)值、最小杀菌浓度 (MBC)值及杀菌速率均无显著差异。不同细菌接种量和不同培养基pH值对两药MIC值的影响也基本一致。体内保护实验显示 ,两药对金黄色葡萄球菌、铜绿假单胞菌感染的小鼠模型均具有很强的保护作用 ,且两者的ED50 及 95 %可信限基本相同。结论

人微小病毒B19母婴感染的血清学调查

目的调查该地区B19病毒母婴感染情况。方法用ELISA和套式PCR分别检测母婴血清B19病毒IgG、IgM抗体和DNA。结果92例孕妇血清B19病毒IgG抗体阳性率3704%,720例孕妇血清B19病毒IgM抗体阳性率902%,而95例婴儿脐血IgM抗体阴性;720例孕妇血清和95例婴儿脐血B19病毒DNA亦均为阴性。结论部分孕妇存在B19病毒感染既往史,少数孕妇有近期或急性B19病毒感染,但母婴垂直传播B19病毒风险很低。

免疫平衡的重要调节者白细胞介素-21

白细胞介素-21(IL-21)是γc家族的一个新成员,主要由活化的CD4+ T细胞产生,对多种表达IL-21受体(IL-21R)的细胞如T细胞、B细胞、NK细胞及DC细胞等均有作用。近年发现IL-21与Th细胞系中新发现的分支Th17细胞的发生密切相关,在调节CD4+ T细胞究竟是分化为Th17细胞还是CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞中有"开关"作用,从而对免疫系统发挥重要的调节作用,在自身免疫性疾病和抗肿瘤免疫中扮演着重要的角色。简要综述了IL-21与Th17细胞、CD4+CD25+Foxp3+ Treg细胞之间的关系及对免疫平衡的调节作用。

从鼠黑色素瘤细胞系中分离和鉴定癌干细胞样细胞

目的:从鼠黑色素瘤BL6F10细胞系中分离与鉴定癌干细胞(CSC)样细胞,为今后对CSC的鉴定及靶向治疗奠定基础。方法:用不同免疫磁珠标记的单克隆抗体,从BL6F10细胞系中分离有特征性CD表型的瘤细胞,体外观察不同CD表型瘤细胞在软琼脂培养基上形成克隆的能力;将这些瘤细胞皮下注射到C57BL/6小鼠,比较其致瘤性。结果:从BL6F10细胞系中分离出不同CD表型的特征性瘤细胞;在软琼脂培养基上,CD133+、CD44+和CD44+CD133+细胞克隆形成率分别高于CD133-、CD44-和CD44+CD133-细胞;CD133+、CD44+、CD44+CD133+和CD44+CD133+CD24+细胞在小鼠体内的致瘤性分别强于CD133-、CD44-、CD44+CD133-和CD44+CD133+CD24-细胞。结论:CD44+CD133+CD24+表型的BL6F10细胞的某些生物学特性与CSC样细胞相似,具有CSC特征,这些实验结果为进一步鉴定BL6F10细胞系中的CSC提供了重要的实验资料。

髓源性抑制细胞在肿瘤免疫中的作用

近来研究发现,一类被称为髓源性抑制细胞(Myeloid-derived suppressor cells,MDSCs)的细胞群,参与了肿瘤的免疫逃逸、免疫耐受、免疫抑制等病理过程,促进肿瘤的发生和生长。这群细胞主要分布在血液、脾、淋巴结、骨髓及肿瘤微环境等部位,通过复杂的分子途径,对机体的抗肿瘤免疫起抑制作用。本文就MDSCs在这方面作用的研究进展作一综述。

CD133分子与造血干/祖细胞和癌干细胞之间的关系

越来越多的实体瘤癌干细胞(CSCs)研究中鉴定分离出含有CD133+的CSCs亚群。深入了解CD133+分子的生物学特性及在细胞与肿瘤信号转导、药物耐受和放化疗抵抗等的相关性,将有助于靶向治疗CSCs。本文就CD133分子与造血干/祖细胞(HSPC)和CSCs之间的关系及其耐药机制的研究进展作一综述。

MDP-Cyclic与CpG-ODN1826对小鼠膀胱瘤免疫治疗效应的初步研究

目的:研究卡介苗(BCG)有效成分MDP-Cyc lic和细菌细胞核有效成分CpG-ODN 1826免疫治疗小鼠膀胱瘤效应。方法:用小鼠膀胱肿瘤细胞(BTT739)在T739小鼠皮下接种,肿瘤形成后,于瘤内多点注射MDP-Cyc lic或CpG-ODN 1826共3次。ELISA检测IFN-γ和IL-4含量,3H-TdR掺入法和MTT法检测脾淋巴细胞增殖效应和对靶细胞杀伤效应。结果:(1)与生理盐水(NS)对照组相比,联合应用MDP-Cyc lic和CpG-ODN 1826组小鼠肿块重量明显减轻,优于单独使用CpG-ODN 1826组;(2)联合用药能明显促进IFN-γ分泌,而对IL-4没有显著影响;(3)脾淋巴细胞对联合用药或单用MDP-Cyc lic刺激均有增殖作用,与NS对照组相比差异有统计学意义;(4)脾淋巴细胞对肿瘤细胞杀伤率联合用药组高于其它组。结论:联合应用免疫调节剂MDP-Cyc lic和CpG-ODN 1826能抑制小鼠膀胱肿瘤生长。

基于戊型肝炎病毒中和表位的基因免疫表达载体的构建与鉴定

目的 :获得戊型肝炎病毒 (HEV )中和表位 p166的编码基因 ,构建基于该中和表位的HEV基因免疫的真核表达载体。方法 :应用RT PCR方法从粪便标本中扩增获得HEVORF2中G64 61～G70 3 5片段 ,通过比较核酸序列同源性鉴定其基因型 ,PCR方法扩增该片段中HEV中和表位 p166的编码基因 ,经酶切后克隆于真核表达载体 pTR42 1质粒 ,并以PCR、酶切和DNA测序加以鉴定。结果 :成功克隆了 p166的编码基因 ,其基因型别为Ⅳ型 ;经酶切鉴定和DNA测序证实p166的编码基因已成功插入pTR42 1质粒 ,且核酸序列、读码框架正确。结论 :成功构建含Ⅳ型HEV中和表位编码基因的重组质粒 ,为后续基于HEV中和表位基因免疫的研究奠定基础。

GM-CSF基因免疫治疗小鼠骨髓瘤的实验研究

目的:探讨mGM-CSF基因免疫小鼠是否可以诱发小鼠对肿瘤的免疫应答。方法:用SP2/0肿瘤细胞皮下接种Balb/c小鼠建立肿瘤动物模型,再以皮下或肌肉注射空质粒或重组质粒4次,共400μg。8周后观察小鼠的抑瘤率、肿瘤质量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润情况,检测血清中IFN-γ和IL-2浓度,MTT法体外检测CTL、NK细胞活性。结果:基因免疫Balb/c小鼠8周后,重组质粒皮下注射组肿瘤质量[(0.880±0.405)g]轻于对照组[(1.548±0.221)g,P<0.01];重组质粒肌肉注射组肿瘤质量[(0.378±0.411)g]明显轻于对照组[(1.554±0.249)g,P<0.001];重组质粒肌肉注射组肿瘤组织可见淋巴细胞浸润;IFN-γ和IL-2的浓度及CTL、NK细胞活性显著高于对照组。结论:GM-CSF基因免疫能诱发小鼠抗肿瘤作用,肌肉注射比皮下注射效果好。

结核杆菌抗原85A与小鼠白细胞介素21共表达DNA疫苗的构建及其免疫效应研究

目的:利用真核表达质粒pRSC,构建结核杆菌抗原85A(Ag85A)与小鼠白细胞介素21(mIL21)共表达重组体pRSC-mIL21-Ag85A,为研究新型结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。方法:从质粒pcDNA3.1-mIL21中经PCR扩增出mIL21基因,并插入质粒pRSC中构成pRSC-mIL21;再从pIRES-Ag85A质粒中经PCR扩增出Ag85A基因,构建于pRSC-mIL21重组质粒上,成为共表达DNA疫苗pRSC-mIL21-Ag85A。结果:经酶切、基因测序证实,该疫苗构建正确并能成功表达目的基因。共表达DNA疫苗免疫小鼠后,CTL活性、特异性淋巴细胞增殖水平及小鼠血清特异性抗体均呈有意义的提高。结论:结核杆菌Ag85A与mIL21共表达DNA疫苗能诱导小鼠免疫反应,为进一步研究DNA疫苗抗结核杆菌攻击的免疫防护效应奠定了基础。

HCV结构区DNA疫苗诱发小鼠特异性细胞免疫反应的研究(英文)

目的通过 HCV结构区 DNA疫苗直接免疫小鼠 ,诱发其体内特异性细胞介导的免疫反应的研究 ,为 HCVDNA疫苗的研制打下基础。方法用重组的 p BK- CMV质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞 SP2 / 0 ,建立了能体外表达 HCV结构区蛋白的 SP2 / 0 D细胞系 ,分别用 SP2 / 0和 SP2 / 0 D细胞攻击用空质粒或 p BK- CMV质粒免疫过的 Balb/ c小鼠 ,通过肿瘤形成、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润以及不同免疫组小鼠血清中 IL - 2和 IFN -γ含量来观察小鼠体内 T淋巴细胞的活性。结果用 SP2 / 0和 SP2 / 0 D攻击空质粒或 p BK- CMV质粒免疫过的小鼠 15 d后 ,SP2 / 0 D攻击的 p BK- CMV质粒免疫鼠肿瘤重量 ( 0 .9± 0 .12 ) g明显低于空白质粒免疫组和 SP2 / 0接种组 ( P<0 .0 0 1) ,且该免疫组小鼠血清中 IL- 2和 IFN- γ的浓度明显高于其它免疫组 ;此外 ,用 SP2 / 0 D攻击的 p BK- CMV免疫鼠 ,肿瘤病理切片中可见明显的 T淋巴细胞浸润。结论重组的 HCV结构区 DNA疫苗 ( p BK- CMV)能诱导小鼠体内特异性 T淋巴细胞反应 ,HCV DNA疫苗可能为临床疾病的治疗和预防提供一种新的途径。

黏膜免疫:结核疫苗免疫的新途径

结核分枝杆菌主要是通过呼吸道传播,而机体的呼吸道黏膜免疫又是抵御从黏膜途径入侵的外来物质的第一道防线。因此,诱导有效的黏膜免疫应答对结核分枝杆菌感染的预防和治疗性疫苗的研制具有重要的价值。

共表达结核杆菌Ag85A-ESAT-6融合抗原与IL-21核酸疫苗的构建及免疫效果研究

目的:构建结核杆菌Ag85A-ESAT-6融合抗原与细胞因子IL-21共表达核酸疫苗pIRES-IL-21-Ag85A-ESAT-6,研究其对小鼠免疫功能的影响。方法:用PCR方法分别扩增出Ag85A和IL-21编码基因,并先后插入质粒pIRES-ESAT-6中,构成共表达核酸疫苗pIRES-IL-21-Ag85A-ESAT-6;免疫小鼠后,通过CTL和NK细胞杀伤活性和脾细胞增殖试验,以及小鼠血清抗体、IFN-γ和IL-4的检测,评价该核酸疫苗的免疫效果。结果:pIRES-IL-21-Ag85A-ESAT-6核酸疫苗免疫鼠的CTL活性、脾细胞增殖反应、IFN-γ水平及血清抗体产生明显高于对照组,差异有显著性意义。结论:pIRES-IL-21-Ag85A-ESAT-6核酸疫苗能够诱导小鼠产生有效的免疫反应,可作为新型结核疫苗的候选组分。

结核杆菌Ag85A和mGM-CSF共同表达载体的构建与CTL活性的诱导

构建、鉴定结核杆菌Ag85A和细胞因子GM CSF共同表达质粒 ,为研究新型抗结核杆菌DNA疫苗提供新的策略。先从质粒pBSby5中扩增出结核杆菌Ag85A基因序列并插入到质粒pIRES上成为pI85A ,用PCR方法从pc mGM CSF质粒中扩增出mGM CSF ,构建于pI85A质粒上 ,成为共同表达质粒pI85AGM。然后转染 772 1细胞 ,进行蛋白的表达和鉴定。结果经酶切鉴定和DNA测序证实重组质粒构建正确。通过RT PCR、SDS PAGE、Westernblot检测证实Ag85A与mGM CSF基因的转录和蛋白表达正确。Ag85A与mGM CSF免疫组小鼠的CTL活性明显增强。表明细胞因子GM CSF和结核杆菌Ag85A共同表达载体构建成功 ,并能诱导小鼠的CTL活性 。