高等医学院校实验室管理之我见

随着我国高等医学院校硬件设施的日益完善,为教学与科研服务的各层次实验室均配备了一定数量与规模的实验设备。如何使这些设备与仪器能最大限度的为人服务,满足教学与科研工作的顺利进行，充分发挥实验室的功能,不断提高实验室的综合效益，已成为实验改革的出发点与归宿。一般而言，根据服务对象不同，高等医学院校中的实验室可分为两大类：教学型实验室与科研型实验室。

胃癌组织中Brg1基因突变及蛋白表达的研究

目的:研究Brg1基因在胃腺癌组织中突变及蛋白表达意义,探讨其与肿瘤发展的关系。方法:应用聚合酶链反应及单链构象多态性(PCR-SSCP)技术检测37例胃腺癌和正常胃组织中Brg1基因第4和16外显子的基因突变,同时应用免疫组化技术分析30例胃癌组织B rg1蛋白的表达,初步探讨其和胃癌发生、发展及预后的关系。结果:37例胃腺癌标本中,Brg1第4和16外显子的基因突变率为零。B rg1蛋白在胃癌中的表达率为76.67%(23/30),与正常组织的表达率(44.44%)相比有明显增高,B rg1的表达与胃癌的浸润、淋巴结转移及分级分期均有关。结论:Brg1基因突变在胃癌中少见且不起主要作用,但其蛋白在胃癌中高表达并对胃癌的发生、发展起重要作用。B rg1的表达可作为判断胃癌恶性程度及预后的重要指标。

茶多酚对糖尿病肾病大鼠肾脏转化生长因子表达的影响

目的 :探讨茶多酚防治糖尿病肾病的机制。方法 :复制糖尿病肾病大鼠模型 ,随机分为 5组 :单侧肾切除组 (C组 )、糖尿病肾病模型对照组 (DC组 )、茶多酚提前治疗组 (B组 )、同时治疗组 (I组 )和滞后治疗组 (A组 )。分别于造模后 0、2、4周 ,检测血糖、2 4h尿蛋白 ,观察肾皮质转化生长因子 (TGF β1)基因和蛋白的表达。结果 :茶多酚有效降低了早期糖尿病肾病大鼠 2 4h尿蛋白 ,抑制了肾皮质中TGF β1mRNA和蛋白质表达的升高 ,尤以茶多酚提前治疗组效果最为明显。结论 :在糖尿病肾病早期使用茶多酚治疗 ,可以通过降低肾皮质TGF β1基因与蛋白的表达 ,有效延缓了糖尿病肾病的发生和发展。

外周血人类斯钙素1基因表达与消化道恶性肿瘤微转移关系的研究

目的:探讨靶基因人类斯钙索1(hSTC-1)在消化道恶性肿瘤患者外周血中的表达以及与肿瘤微转移的关系。方法:采用RT-PCR方法检测69例消化道恶性肿瘤患者外周血中的人类斯钙素1(hSTC-1)mRNA,12例健康成人、4例妊娠期妇女、14例消化道炎症疾病患者,并检测12例消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本中的hSTC-1 mRNA。结果:69例消化道恶性肿瘤患者外周血中,食管癌组hSTC-1 mRNA的阳性率为52.9％(9/17例),胃癌组的阳性率为57.7％(15/26例),大肠癌组的阳性率为53.8％(14/26例),消化道恶性肿瘤患者手术中新鲜组织标本的阳性率为100％(12/12例);而健康成人、妊娠期妇女、消化道炎症疾病患者外周血中无1例出现阳性。将肿瘤患者hSTC-1 mRNA检测结果与临床病理结合分析发现:外周血中的hSTC-1 mRNA的表达与肿瘤的浸润深度、临床病理分期、淋巴结转移有显著相关性。结论:应用RT-PCR方法检测消化道恶性肿瘤患者外周血中的hSTC-1 mRNA具有较高的敏感性和特异性,可成为检测肿瘤外周血微转移的一个新指标。

MUC5AC蛋白在大肠肿瘤中的表达及意义

目的:探讨大肠肿瘤组织中MUC5AC蛋白的表达情况及其意义.方法:采用S-P免疫组化法对10例正常大肠黏膜及60例大肠肿瘤石蜡包埋标本中MUC5AC蛋白的表达进行了检测,PBS代替一抗作为阴性对照.结果:正常大肠黏膜几乎不表达MUC5AC蛋白.肿瘤组织中MUC5AC的总阳性率为46.67%(28/60),其中,大肠腺瘤(100%,10/10)与印戒细胞癌(70%,7/10)中表达率较高,与高、中、低分化的腺癌及黏液腺癌相比,MUC5AC的表达具有显著性差异(P<0.05).结论:MUC5AC表达的异常变化可能是大肠肿瘤发生过程中的早期事件.

纳米医药技术在恶性肿瘤治疗中的应用

纳米药物具有靶向性和药物控释性的特点 ,与其他恶性肿瘤治疗方法相辅相承 ,并可在肿瘤组织的细胞和亚细胞水平上发挥作用 ,尤其是在转移性恶性肿瘤的治疗领域具有巨大的潜力。本文介绍纳米医药技术在恶性肿瘤治疗领域的研究和进展。

RegⅣ在大肠癌中的表达及其临床意义

目的:探讨RegⅣ蛋白在大肠癌发生发展中的作用.方法:免疫组织化学染色检测60例临床大肠腺癌组织及其癌旁组织和30例大肠腺瘤组织中RegⅣ蛋白的表达.结果:RegⅣ蛋白在癌旁组织、腺瘤和癌组织中的阳性表达率分别为75.00%、86.6%和63.33%,差异具有统计学意义(P<0.01).RegⅣ蛋白与大肠癌进展无显著相关性(P>0.05).RegⅣ蛋白的表达与性别、年龄、肿瘤分级和有无淋巴结转移均无显著性差异(P>0.05).结论:RegⅣ蛋白是一个在大肠癌发生发展中差异表达的肿瘤相关基因,可能在腺瘤向腺癌转化的早期阶段起作用,而与肿瘤的进展无关.

磁流体在肿瘤学治疗领域的应用进展

磁流体 (magneticfluids)是含有超微磁铁粒子的液体 ,既具有固体磁性材料的磁性 ,又能象液体一样流动 ,磁流体因其本身所具有的某些特性而具有广泛的应用价值 ,尤其在肿瘤治疗领域———靶向载药磁性微球、磁控血管内磁性微球栓塞、磁流体热疗 ,给肿瘤的治疗带来了新的契机和希望。本文拟就国内外磁流体的研究现状及其在肿瘤学治疗领域的应用作一综述。

自发性脑出血患者肺炎衣原体感染的研究

目的探讨自发性脑出血与肺炎衣原体感染的关系。方法检测9例自发性脑出血患者的外周血肺炎衣原体IgG、IgM抗体(微量免疫荧光法)、病变脑动脉组织肺炎衣原体DNA(PCR法)及肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达(Westernblot法)。结果患者IgG抗体的几何平均滴度(1903±32)、IgG抗体阳性率(852%)、IgM抗体阳性率(308%)均显著高于对照组(分别为481±20、481%、48%,P<001,P<005,P<001);病变脑动脉中肺炎衣原体DNA检出率为889%(8/9);所有患者病变脑动脉都有肺炎衣原体主要外膜蛋白的表达。结论自发性脑出血患者存在肺炎衣原体感染的证据,自发性脑出血与肺炎衣原体感染可能有关。

树突状细胞改变以及HLA-Ⅱ类分子表达在肠癌中意义

目的研究肠癌组织中专职抗原递呈细胞树突状细胞数量以及兼职抗原递呈细胞肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达强度改变,揭示肠癌组织中的抗原递呈功能改变,为肠癌免疫治疗提供理论依据。方法用免疫组化的方法标记肠癌组织中的树突状细胞、HLA-Ⅱ类分子,以切端组织形态正常的黏膜组织(距离癌组织>5 cm)作为对照,结合临床资料分析肠癌组织中的树突状细胞数量改变以及HLA-Ⅱ类分子表达情况。结果相对于切端黏膜,肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达下调,差异有统计学意义(P<0.05),树突状细胞数量减少,差异有统计学意义(P<0.05)。肠癌组织HLA-Ⅱ类分子表达在肠癌不同分级、分期差异无统计学意义(P>0.05),树突状细胞的数量在肠癌不同分级、分期差异无统计学意义(P>0.05)。结论肠癌组织中HLA-Ⅱ类分子表达显著下降,树突状细胞数量显著减少,导致肠癌组织中的肿瘤抗原递呈功能下降,是肠癌组织逃避机体免疫监视的重要途径。

CCl_4肝纤维化过程中肝组织金属硫蛋白与肝星状细胞MMP-2表达及活性之间相关性研究

目的:研究金属硫蛋白(MT)在体内及体外与基质金属蛋白酶-2(MMP-2)表达、活性之间的相关性。方法:昆明种雄性成年小鼠50只,其中实验鼠40只,对照鼠10只,用CCl4诱导小鼠肝纤维化模型。向肝星状细胞(HSCs)条件培养基(含有MMP-2)中加不同浓度MT,使之与MMP-2酶学共浴,检测MMP-2活性。制作小鼠肝组织芯片,天狼猩红染色判断肝纤维化程度。免疫组化法测肝组织MMP-2、MT蛋白表达,酶图法测鼠肝组织匀浆和培养基中MMP-2活性。结果:①模型组小鼠肝组织MMP-2和MT蛋白表达水平均随纤维化进展而呈波浪式交替升高,但二者时相变化相反。②模型组小鼠肝组织MMP-2活性随实验时间的增加而逐渐升高,亦有波动。除个别时点外,酶活性与MT表达呈负相关。③肝星状细胞条件培养基与不同浓度的MT直接作用后,MMP-2活性随MT浓度增加活性逐渐降低(P<0.01)。结论:在小鼠肝纤维化发生发展过程中,肝组织MT蛋白和MMP-2蛋白表达均有上升趋势,二者间可能存在相互作用;MT蛋白和MMP-2活性呈负相关,前者对后者可能起抑制作用。

纳米技术在乳腺癌治疗中的研究进展

近年来 ,纳米技术在医药领域的研究已取得了一些开拓性进展 ,为疾病的诊断与治疗开辟了崭新的领域。现综述纳米技术在乳腺癌治疗中的研究现状和进展 ,包括被动靶向纳米粒、单克隆抗体介导的主动靶向、磁性微球介导的主动靶向及纳米磁流体热疗、受体介导的主动靶向以及纳米技术与乳腺癌的基因治疗 。

PTEN、CD44v6蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床意义

目的 探讨PTEN、CD4 4v6蛋白在乳腺癌组织中的表达及其临床病理意义。方法 采用免疫组化S P法检测 90例乳腺癌组织中PTEN、CD4 4v6蛋白的表达水平。结果 (1)正常乳腺组织中PTEN呈高表达 ;有腋窝淋巴转移的乳腺癌组织中PTEN高表达率为 39 3% ,明显低于无腋窝淋巴结转移者 5 9 6 % (P <0 0 5 ) ;复发组PTEN高表达率低于无转移组 ,两组有统计学差异 (P <0 0 0 5 )。 (2 )CD4 4v6在浸润性导管癌中阳性表达率较高 (6 9 5 % ) ,小叶癌中的阳性表达率较低(35 5 % ) ,两者有统计学差异 ;PTEN、CD4 4v6蛋白表达水平与患者年龄、肿瘤最大直径、组织学分级无关。结论 乳腺癌组织中PTEN/CD4 4v6蛋白表达减弱 ,可能与乳腺癌的发生、发展及预后有关 ;CD4 4v6可以作为浸润性导管癌和小叶癌的鉴别诊断的辅助指标。

HCV结构区DNA疫苗诱发小鼠特异性细胞免疫反应的研究

目的 :通过HCV结构区DNA疫苗直接免疫小鼠 ,诱发其体内特异性细胞介导的免疫反应的研究 ,为HCVDNA疫苗的研制打下基础。方法 :用重组的pBK CMV质粒体外转染小鼠骨髓瘤细胞SP2 0 ,建立了能体外表达HCV结构区蛋白的SP2 0D细胞系 ,分别用SP2 0和SP2 0D细胞攻击用空质粒或pBK CMV质粒免疫过的Balb c小鼠 ,通过肿瘤形成、肿瘤重量、肿瘤组织淋巴细胞的浸润以及不同免疫组小鼠血清中IL 2和IFN γ含量来观察小鼠体内T淋巴细胞的活性。结果 :用SP2 0和SP2 0D攻击空质粒或pBK CMV质粒免疫过的小鼠 15d后 ,SP2 0D攻击的pBK CMV质粒免疫鼠肿瘤重量〔(0 9± 0 12 )g〕明显低于空白质粒免疫组和SP2 0接种组 (P <0 0 0 1) ,且该免疫组小鼠血清中IL 2和IFN γ的浓度明显高于其它免疫组 ;此外 ,用SP2 0D攻击的pBK CMV免疫鼠 ,肿瘤病理切片中可见明显的T淋巴细胞浸润。结论 :重组的HCV结构区DNA疫苗 (pBK CMV)能诱导小鼠体内特异性T淋巴细胞反应 。

CK19和DNA拓扑异构酶Ⅱ在甲状腺肿瘤患者组织中表达的临床意义

目的研究甲状腺肿瘤患者组织中CK19和DNA拓扑异构酶Ⅱ与甲状腺肿瘤病理特征的相关性。方法用免疫组织化学法检测23例甲状腺肿瘤患者组织中CK19和DNA拓扑异构酶Ⅱ的表达。结果12例甲状腺癌患者组织中CK19均阳性表达,DNA拓扑异构酶Ⅱ阴性表达;而在11例良性甲状腺病变患者组织中DNA拓扑异构酶Ⅱ阳性表达,CK19呈阴性表达。结论CK19可以作为甲状腺癌的肿瘤标志物之一;而对于TopoⅡα呈阳性表达的良性甲状腺疾病,可以选择对该酶具有敏感性的药物进行治疗,以及明确诊断提供依据。

小鼠骨髓间充质干细胞体内定向诱导分化与治疗肝功能损伤的实验研究

目的 观察小鼠骨髓间充质干细胞（MSC）在肝脏特定微环境下是否向具肝细胞表型与功能的细胞横向分化，并探讨其治疗肝功能损伤的可行性。方法 20只裸小鼠，随机分为4组，每组5只：A组：CCl4与橄榄油1：1混合，按1ml／kg腹腔注射，每周2次。1周后经尾静脉移植1×10^6GFP阳性MSC，术后继续注射CCl4，每周2次；B组：CCl4注射同A组，经尾静脉注入等量生理盐水；C组：正常小鼠，细胞移植同A组；D组：正常对照。术后4周处死全部受试动物，血清检测肝功能，HE、Masson染色行组织学观察，双荧光染色确认GFP阳性细胞并观察其是否表达肝细胞特异性蛋白。结果 A、B组受体肝纤维组织增生显示肝功能损伤模型制作成功，二组胶原分布百分比差异并无统计学意义（10．5±1．5vs12．7±1．6，t=-2．238，P〉0．05）。A组镜下可见GFP阳性细胞主要分布于汇管区及小叶间隔周围，部分同时表达白蛋白（35％±7％）；B、C、D组镜下均未见绿色荧光细胞。A组白蛋白水平明显高于B组（24．4g／L±3．3g／Lvs18．6g／L±2．9g／L，P〈0．05），两组血清丙氨酸转氨酶（ALT）水平差异有统计学意义（121U／L±21U／Lvs192U／L±29U／L，P〈0．05）。结论 持续肝功能损伤可以有效诱导MSC向肝迁移增殖，部分MSC在肝细胞持续损伤的微环境下有向肝样细胞横向分化的潜能，提示MSC移植可以在一定程度上修复受损肝功能。

季德胜蛇药片对大鼠急性肺损伤的保护作用

目的研究季德胜蛇药片对细菌脂多糖(Lipopolysaccharide,LPS)诱导大鼠急性肺损伤的保护作用。方法50只雄性SD大鼠随机分为6组:正常对照组、地塞米松阳性对照组、LPS模型组及低、中、高三种不同剂量蛇药组。分别用地塞米松和三种不同剂量的蛇药在LPS诱导ALI模型之前预处理大鼠。检测大鼠的肺系数,光镜观察肺组织损伤程度,酶谱法测肺组织匀浆液和支气管肺泡灌洗液上清中MMP2、MMP9酶活力及免疫组织化学方法检测肺组织MMP2、MMP9蛋白表达情况。结果与模型组比较,阳性对照组及蛇药组肺系数均降低(P<0.05),且高剂量组明显低于阳性对照组(P<0.01)。蛇药组肺组织损伤程度、MMP9酶活力均随剂量的增加而减轻或降低,MMP2酶活力亦有不同程度的下降;高剂量组MMP2、MMP9蛋白表达减弱;结论季德胜蛇药片对LPS诱导大鼠急性肺损伤有一定保护作用,其作用机制可能与抑制MMP2、MMP9表达及活性有关。