以TNFα为基础并靶向于白细胞介素15受体的融合蛋白的构建及功能研究(英文)

IL 1 5及IL 1 5R阳性细胞在成人T淋巴细胞性白血病 (ATL)、多发性骨髓瘤及炎症性自身免疫性疾病病理过程中起着重要作用 .应用基因重组技术 ,构建、表达靶向于IL 1 5受体的两种融合蛋白 ,为研制特异的可消除IL 1 5R高表达细胞的导向药物奠定基础 .将人IL 1 5成熟肽基因及IL 1 5R拮抗剂 (IL 1 5M)基因片段分别与人工改造的人肿瘤坏死因子突变体 (TNFαM)基因按正确的阅读框架融合 ,定向克隆在pET1 6b表达载体T7启动子的下游 ,得到质粒pET IL 1 5 TNFαM和pET IL 1 5M TNFαM .从大肠杆菌相应重组菌株中通过Ni2 + NTA亲和层析分别纯化出两种融合蛋白IL 1 5 TNFαM和IL 1 5M TNFαM .IL 1 5 TNFαM和IL 1 5M TNFαM对IL 1 5R阳性红白血病细胞K5 6 2的杀伤作用分别是TNFα的 4和 1 5倍 ,两种蛋白对IL 1 5R阴性细胞系Jurkat的杀伤作用则没有明显差异且均弱于TNFα .这些结果说明 ,两种融合蛋白特别是IL 1 5受体拮抗型蛋白IL 1 5M TNFαM对与IL 1 5 IL 1

糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法的探讨

目的:对糖尿病大鼠血管平滑肌细胞体外培养方法进行探讨,建立糖尿病大鼠血管平滑肌细胞模型,为糖尿病慢性血管并发症研究奠定基础。方法:建立糖尿病大鼠模型,用组织贴壁法体外培养胸主动脉血管平滑肌细胞。结果:糖尿病大鼠造模成功。用贴壁法培养糖尿病大鼠血管平滑肌细胞,3d后相差显微镜下可见细胞游出,培养7～10d左右细胞重叠生长达多层,高低起伏呈“峰—谷”状。平滑肌细胞actin免疫组织化学染色鉴定为平滑肌细胞。结论:糖尿病大鼠血管平滑肌细胞增殖速度快,培养条件要求严格,在形态学上与正常大鼠平滑肌细胞相同。

丹参酮ⅡA对糖尿病大鼠体内氧化应激的作用

目的研究丹参酮IIA(TanshinoneⅡA,TanⅡA)对成年糖尿病大鼠血液及胸主动脉组织中超氧化物歧化酶(SOD)、丙二醛(MDA)、过氧化氢(H2O2)含量的影响。方法建立糖尿病大鼠模型,随机分为糖尿病(DM)组及糖尿病治疗丹参酮ⅡA(TSN)组,并设立正常对照(NC)组;利用GPO-PAP法和CHOD-PAP法分别测定三组大鼠血液中甘油三酯及总胆固醇含量;黄嘌呤氧化酶法、硫代巴比妥酸法和钼酸法分别测定三组大鼠血液及胸主动脉组织中SOD、MDA、H2O2含量。结果DM组MDA、H2O2含量均明显升高(P<0.01),SOD活力显著下降(P<0.01);经过TSN治疗后,SOD活力上升,MDA、H2O2含量无明显变化。结论丹参酮IIA可通过增强SOD活力来有效降低体内高水平的MDA及H2O2。

体外电脉冲刺激对糖尿病膀胱大鼠排尿功能的影响

目的:探讨体外电刺激法对糖尿病膀胱大鼠排尿功能的影响。方法:将SD大鼠随机分为正常对照组、糖尿病对照组和糖尿病电刺激组3组,每组10只,后两组制作糖尿病大鼠膀胱模型。10周后,电刺激组予体外电刺激治疗,刺激参数:强度31V,密度31 Hz,另两组均不予电刺激。持续治疗3周后观察比较各组尿动力学改变及逼尿肌肌条收缩功能变化。结果:糖尿病大鼠造模10周后施加体外电刺激,其膀胱收缩力加强,残余尿量比(R%)有所下降,膀胱排尿阈容量减少,差异均有统计学意义。结论:体外电刺激可改善糖尿病膀胱的逼尿肌收缩能力及膀胱的感觉功能。

果蝇S2细胞中高表达荧光素酶重组质粒的构建及活性测定

目的:构建果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒。方法:用PCR方法扩增得到pac启动子的基因片段,经酶切亚克隆至pGL3-Basic的真核表达载体中,转染果蝇S2细胞,通过测定荧光素酶和β-半乳糖苷酶的活性计算荧光素酶的相对活性。结果:构建的重组质粒在S2细胞中荧光素酶的相对活性较pGL3-Control中增加了2.7万倍。结论:成功构建了果蝇S2细胞中高表达荧光素酶的重组质粒pGL3-pac。

非小细胞肺癌中PTB对肿瘤抑制基因ceacam1选择性拼接的调控研究

目的:研究在非小细胞肺癌及癌旁组织中ceacam1通过选择性拼接而产生的两种转录产物的调控机制。方法:将用PCR方法获得ceacam1基因中从内含子5至外显子8长1 606 bp DNA片段插入到真核表达载体pCMV中,构建成ceacam1迷你基因模型并与ptb基因共转染,用PCR法鉴定转染后的产物变化;根据外显子7序列设计的探针GAE(16-nt)及ACE(8-nt)进行凝胶阻滞分析实验。分离与探针结合的蛋白并进行质谱分析。结果:ptb3种cDNA与ceacam1迷你基因共转染后,CEACAM lL表达水平下降,其中ptb4对迷你基因的表达产物影响最大。仅转染迷你基因的细胞中ceacam1L在两条带中所占比例为76.7%,而与ptb3种重组质粒共转染后,比例分别下降至58.3%、64.8%和54.0%。凝胶阻滞实验表明,探针GAE能与核蛋白结合,而ACE基本不能与核蛋白结合,与GAE结合的蛋白经质谱分析为PTB。结论:PTB过表达与ceacam1低表达有明显的相关性,拼接因子PTB参与ceacam1的选择性拼接。

DNA甲基转移酶3A siRNA真核表达载体的构建和鉴定

目的:构建DNA甲基转移酶3A(DNA methyltransferases 3A,DNMT3A)siRNA重组质粒稳定表达载体,为进一步探讨DNMT3A在多种生物学过程及肿瘤发生发展中的机制提供工具。方法:依据DNMT3A基因的cDNA序列,利用siDESIGN软件获得RNAi靶位点后设计出对应的siRNA寡核苷酸模板,体外合成寡核苷酸片段经退火形成短双链,克隆到真核表达载体pSUPER-EGFP1中,构建DNMT3A siRNA重组质粒载体,经酶切鉴定后转染人肝癌细胞系SMMC-7721,荧光实时定量PCR初步分析DNMT3A经RNA干涉后的沉默效应。结果:成功构建了靶向DNMT3A基因的siRNA重组稳定表达载体,此载体有效地降低了肝癌细胞系中DNMT3A基因的表达水平。结论:通过该方法初步确定了沉默DNMT3A基因的较佳靶点。

RASAL1表达及ras活性与胃肠道肿瘤临床关系的研究进展

大约有20%的人类肿瘤与ras的突变有关。ras蛋白调控细胞的一系列生物学行为,包括细胞增殖、分化、生存及凋亡等。ras蛋白属于小GTP结合蛋白,通过响应细胞外信号产生活性。RASAL1是一种ras GTP酶激活蛋白,可以抑制ras的活性。调节ras以及RASAL1的活性,可能是肿瘤靶向治疗的方向之一。检测ras以及RASAL1的活性有助于胃肠道肿瘤的早期诊断以及预后的判断。本文从ras的结构、功能及突变与肿瘤的关系,RASAL1作为ras的效应分子抑制ras的活性,ras、RASAL1与胃肠道肿瘤的关系三方面来综述了RASAL1表达及ras活性与胃肠道肿瘤临床关系的研究进展。

黄色黏细菌fruA mRNA 5′非翻译区正性调节其自身基因的表达

黏细菌是研究多细胞结构形态发生机制的良好模型.FruA是黏细菌发育所必需的一种转录因子,其mRNA5′端存在相当长的由235个核苷酸组成的非翻译区(5′-UTR).以lacZ为报告基因,构建保留或缺失5′-UTR的fruA-lacZ翻译融合载体并在染色体attB位点定点整合.5′-UTR自+4～+220缺失后fruA-lacZ在发育阶段几乎不表达,说明完整的5-′UTR为fruA表达所必需.二级结构预测显示,该区域可形成高度稳定的3螺旋接合结构,可能是蛋白因子的结合位点或存在调节fruA表达的顺式元件.因此,fruA发育特异性表达受其5′-UTR的正性调控.