兔外周血内皮祖细胞的多功能分子影像探针标记及其在肿瘤模型中的活体示踪

目的:构建多功能分子影像探针——共轭化合物-1,体外标记兔外周血内皮祖细胞(endothelial pro-genitor cells,EPCs),并进行体内细胞示踪。方法:利用磁共振T1对比剂Gd、近红外荧光染料Cy5.5以及罗丹明合成共轭化合物-1,体外标记EPCs,采用四氮噻唑蓝(MTT)比色实验评价不同浓度bCD-PLL标记EPCs后对细胞增殖力的影响;流式细胞术分析对细胞周期的影响及不同孵育时间细胞荧光标记率。将标记共轭化合物-1的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型,通过磁共振成像和近红外光学成像对移植细胞进行活体示踪。结果:共轭化合物-1的标记对EPCs增殖活性及细胞周期无明显影响;2μmol.L-1共轭化合物-1可有效标记细胞。磁共振成像和近红外光学成像表明标记的EPCs在移植后5 d肿瘤信号出现明显改变。结论:共轭化合物-1能有效标记兔外周血EPCs,细胞活力不受影响。两种活体成像均表明经标记的EPCs移植于乳腺癌荷瘤鼠模型后能够归巢至肿瘤组织,显示出共轭化合物-1的成像优越性。

靶向LOX-1的ApoE-/-小鼠动脉粥样硬化斑块近红外荧光成像及阿托伐他汀干预实验研究

目的探讨靶向LOX-1的近红外分子探针示踪小鼠动脉粥样硬化(AS)斑块及评价阿托伐他汀干预的可行性。材料与方法采用12周龄Apo E-/-小鼠经高脂高糖饮食喂养16周建立AS模型,C57小鼠作为对照。基线实验分为靶向探针组(n=5)、竞争性抑制组(n=4)、碱性磷酸盐溶液(PBS)组(n=5)及对照C57组(n=5),经小鼠尾静脉注入1 mg/kg靶向探针或PBS,24 h后行近红外荧光成像(NIRF)。干预实验将Apo E-/-小鼠随机分为对照组和干预组(n=5,饮食中不加或加阿托伐他汀干预6周)。采用油红O染色鉴定斑块面积。斑块面积与NIRF信号分布之间的关系采用线性相关分析。结果 Apo E-/-小鼠注入anti-LOX-1-NIR797探针24 h后,NIRF示主动脉斑块区见强荧光信号,竞争性抑制组斑块SNR显著降低,而对照组C57小鼠注入靶向探针或Apo E-/-小鼠注入PBS时,其主动脉斑块信噪比较弱(P<0.01)。实验组Apo E-/-小鼠主动脉油红O染色和NIRF的阳性面积呈正相关(r=0.917,P<0.001)。阿托伐他汀干预组anti-LOX-1-NIR797信号较对照组显著降低、腹主动脉斑块面积减少(P<0.05)。结论应用靶向LOX-1的近红外探针在NIRF平台可有效检测Apo E-/-小鼠AS斑块并评价阿托伐他汀的干预效果。

血管平滑肌细胞与血管性病变发生的分子成像研究进展

血管平滑肌细胞(VSMC)是构成血管壁结构及维持血管张力的主要细胞,在血管再狭窄、动脉粥样硬化等多种血管病变中发挥着关键作用。随着分子影像学的发展,血管平滑肌细胞层面的分子成像研究日益受到重视。对VSMC在病理状态下的表型转化、增殖、迁移及分子成像研究进展予以综述,旨在提高对血管再狭窄及动脉粥样硬化形成等血管性疾病的诊治水平。

前言——发挥神经影像学先进技术的作用,提高脑血管病的诊治水平

随着我国人口老龄化程度不断增高，脑血管病发病率也随之上升，脑血管病已成为第二大致死性和第一大致残性疾病。我国每年有200多万人发生脑血管病，每年死于脑血管病者约有100万以上。

抓住核心问题，卓有成效地开展分子影像学研究

医学领域正悄然发生着一场革命，特别是人类基因组计划的完成，为实现个体化危险因素的评估、预防和医学干预提供了可能。伴随不断涌现的“组科学（omics）”，如功能基因组学、蛋白组学、药物基因组学等研究的进展及系统生物学的推广，个体化医疗（personalized medicine）将逐渐成为现实。分子影像能够无创或微创、可重复地提供在体、定量、实时、可视化分子及基因信息，甚至是多分子相互作用的信息，这些独特、真实的个体信息正是个体化医疗的前提。

7.0T micro-MRI评价局部应用丝裂霉素C和消旋聚乳酸膜抑制大鼠硬膜外粘连及瘢痕形成

目的应用7.0Tmicro-MR比较单独应用丝裂霉素C(MMC)、消旋聚乳酸(DL-PLA)膜以及二者联合应用(MMC+DL-PLA膜)时抑制大鼠椎板切除术后硬膜外粘连的效果。方法将16只SD大鼠随机分为4组,每组4只,椎板切除术后于硬膜外给予不同局部处理:单纯MMC组局部应用MMC 0.67mg/ml;单纯DL-PLA膜组给予生理盐水和0.05mm厚DL-PLA膜;MMC+DL-PLA膜组给予MMC 0.67mg/ml和0.05mm厚DL-PLA膜;对照组单纯应用生理盐水。术后4周处死大鼠,分别行7.0Tmicro-MR扫描及瘢痕组织面积测定,并于镜下观察硬脊膜与后方瘢痕组织粘连情况。结果单纯MMC组和单纯DL-PLA膜组硬膜外瘢痕组织较疏松,瘢痕面积小,与硬脊膜部分粘连。MMC+DL-PLA膜组硬膜外瘢痕组织较疏松,瘢痕面积更小,与硬脊膜未形成明显粘连。对照组标本硬膜外瘢痕组织致密,瘢痕面积大,与硬脊膜形成紧密粘连。结论局部单独应用浓度为0.67mg/ml的MMC或0.05mm厚的DL-PLA膜均能减少硬膜外瘢痕组织增生,二者联合应用时效果更显著。

大鼠眼球的高场磁共振成像研究

该文旨在研究微型磁共振(MRI)对大鼠眼球的成像效果和应用.通过对10只SD大鼠的20只眼球进行7.0 T MRI检查,应用常规T1WI和T2WI序列高分辨率扫描;观察MRI图像上大鼠眼球的结构,并比较MRI测量与组织学显微镜下测量视网膜厚度结果.磁共振扫描清楚地显示了所有受试大鼠眼球的主要结构,包括角膜、晶状体、玻璃体、视网膜、巩膜、虹膜、睫状体、视神经.球壁结构磁共振图像层次与组织学结构层次有良好对应性;磁共振视网膜厚度测量值与显微镜下视网膜厚度测量数据进行配对t检验,P>0.05,二者无显著差异.由此得出的结论是小动物MRI可以对大鼠眼球细微解剖结构进行无创性的成像,为我们提供了一个研究大鼠眼科疾病模型的形态学及功能变化的手段.

2型糖尿病患者认知障碍及其功能磁共振成像研究进展

一、糖尿病脑病的概念 随着社会发展及人们生活方式的改变，全球范围内糖尿病患者逐年增加，世界卫生组织最新统计数据显示：全球约有3．47亿糖尿病患者。在中国糖尿病的患病形势更为严峻，2010年国家疾病控制中心和中华医学会内分泌学会调查显示，我国18岁以上成年人糖尿病总体发病率达11．6％，老年人中超过20．4％患有糖尿病，其中90．0％以上为2型糖尿病心，本文主要综述2型糖尿病的相关研究进展。

原肌球蛋白-4抗体靶向标记合成型血管平滑肌细胞MR体外成像的实验研究

目的 分离、培养并鉴定合成型血管平滑肌细胞（VSMC）,检测靶向标记原肌球蛋白-4（TPM-4）,并采用免疫分子成像技术构建TPM-4抗体靶向型MRI探针,探讨靶向合成型VSMC体外MR成像的可行性.方法 体外分离培养合成型VSMC与内皮细胞（EC）,采用SMA、Ⅷ因子免疫细胞化学染色方法分别行细胞鉴定;免疫荧光双重染色验证合成型VSMC高表达TPM-4蛋白;应用化学交联法合成靶向TPM-4 MRI分子探针,TPM-4标记探针（TPM4-USPIO）为实验探针组、IgG标记探针（IgG-USPIO）为阴性探针组、未标记探针（USPIO）为对照探针组,PBS为空白组,实验组探针分别与合成型VSMC及EC共孵育,阴性组、对照组探针与VSMC EC共孵育.采用普鲁士蓝染色分析探针特异靶向性,噻唑蓝（MTT）比色法分析不同铁浓度条件下（含铁浓度梯度分别为0、5、10、20、40 μg/ml）对细胞体外生物学活性的影响;采用7.0TMR扫描仪检测探针磁学特性,并对不同探针组标记的合成型VSMC（n=3）以及1×103、5×103、1 × 104、5 ×104、1×105个/管（n=3）不同浓度梯度TPM4-USPIO标记细胞行体外细胞T2WI成像分析.T2信号数据以及MTT结果数据组间比较先行单因素方差分析（ANOVA）,若差异有统计学意义,再用LSD法行组间两两比较.结果 成功分离并培养了合成型VSMC,合成型VSMC中TPM-4呈高表达;成功构建TPM-4、IgG抗体标记靶向型探针,TPM4-USPIO、IgG-USPIO探针弛豫率分别为0.0350×106、0.0316×106 mol/s,同USPIO（0.0292×106 mol/s）磁学特性相似,稳定性高;普鲁士蓝染色结果显示实验组探针与合成型VSMC呈特异性结合,与EC无特异性结合,MTT结果表明铁浓度≤40 μg/ml范围内对合成型VSMC增殖活性无影响;实验探针组标记细胞T2WI呈低信号,较阴性探针组、对照探针组及空白组信号变化明显,T2弛豫时间为（116.67 ±2.08） ms,明显短于以上3组探针[（217.67±2.52）、（219.33±2.08）及（205.33±1.53） ms],差异具有统计学意义（F=1670.43,,＜0.01）;1×103、1 ×104、1×105 3种浓度细胞之间T2弛豫时间分别为（184.33±2.08）、（169.67±1.15）、（116.67±2.08） ms,差异具有统计学意义（F=684.35,P＜0.01）,T2 WI信号梯度减低,同一数量级细胞之间T2值变化差异无统计学意义（P值均＞0.05）.结论 血小板衍化生长因子（PDGF）-BB处理后可获得合成型VSMC,TPM4-USPIO探针能够高效、靶向性结合合成型VSMC,高场强MRI T2WI信号变化显著,为血管性疾病在体靶向合成型VSMC的相关分子影像学研究提供了新的切入点.

静息态脑功能磁共振的低频振荡信号及其应用进展

功能磁共振是目前研究人脑工作的有效手段。通过局部刺激诱导脑血氧水平的血液动力学改变，从而间接反应神经活动情况。大部分功能磁共振研究是通过比较刺激组和对照组（或者基线）血氧水平依赖（bloodoxygenationlevel—dependent，BOLD）信号强度的改变，因此对照组的精心设计能使得特殊刺激的神经活动信号改变显得更有意义。

小鼠脾源性内皮祖细胞培养及7．0T磁共振单细胞成像初探

目的建立一种小鼠脾源性内皮祖细胞的培养方法，探讨7．0T磁共振（7．0TMR）系统对磁标记单细胞成像的可行性。方法密度梯度离心法分离脾脏单个核细胞，诱导培养得到内皮祖细胞（EPC）。免疫化学、荧光染色鉴定细胞特性。Fe2O3-PLL标记细胞，普鲁士蓝染色，MTT法评价Fe2O3-PLL对细胞生长的影响，邻菲哕啉法定量分析细胞内铁含量。7．0TMR不同序列体外单细胞成像。结果小鼠脾脏单个核细胞经体外诱导培养呈内皮细胞形态，表达EPC表面标志物CD31、CD34、vWF，显示内吞乙酰化低密度脂蛋白（acLDL）、结合凝集素1（UEA-1）等内皮细胞的功能。MTT检测Fe2O3-PLL标记对细胞增殖活力影响不明显，标记组与未标记组吸光度（A）值比较第4天至第7天差异均无统计学意义（第4天，t=2．81；第5天，t=-1．87；第6天，t=-0．298；第7天，t=-0．115；P均〉0．05）。磁标记单细胞能够在7．0TMR检测中成像，自旋回波序列（MSME）图像中标记细胞显示灰度高于梯度回波序列（2D-FLASH），MSME序列图像标记细胞平均导致信号缺失体素个数为20．2个，而2D—FLASH序列图像为30．1个，差异具有统计学意义（t=15．2，P〈0．05）。结论小鼠脾脏单个核细胞可诱导分化为EPC。在7．0TMR检测中Fe2O3-PLL标记的EPC能够实现体外单细胞成像。