炎性反应激活CXC型趋化因子配体16信号通路进而促进糖尿病肾病进展

目的探讨微炎症状态下CXC型趋化因子配体16（CXC chemokine ligand 16,CXCL16）及其受体CXC型趋化因子受体6（CXC chemokine receptor6，CXCR6）途径在糖尿病肾病（diabetic nephropathy，DN）进展中的作用。方法8周龄雄性2型糖尿病小鼠（db／db小鼠）随机分为DN组（n=8）和DN微炎症组（n=8）。参照本课题组既往建立的方法，背部皮下注射10％酪蛋白制备微炎症模型。体外肾小管上皮细胞（HK-2细胞）分为高糖组和高糖＋IL-1β组，观察各组细胞中脂质沉积及细胞损伤的情况；并应用RNA于扰沉默CXCL16的表达，分为高糖＋IL-1β组、高糖＋IL-1β＋siCXCL16组、高糖＋IL-1β＋空载体组，以验证CXCL16信号通路的作用。24h尿蛋白量及尿N-乙酰-β—D-氨基葡萄糖苷酶（NAG）评估8周内小鼠。肾功能变化，电镜观察第8周肾组织的超微结构。Filipin染色及细胞内游离胆固醇定量观察肾组织及HK一2细胞中胆固醇沉积情况；免疫组化、Western印迹检测肾组织CXCL16信号通路相关分子（CXCL16、CXCR6、解整合素样金属蛋白酶10）、纤维化相关分子（纤连蛋白和α平滑肌肌动蛋白）的蛋白表达；实时定量PCR和Western印迹分别检测HK-2细胞中CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达，及细胞免疫荧光检测HK-2细胞中CXCL16信号通路相关分子表达。结果微炎症组小鼠24h尿蛋白量及尿NAG高于DN组，第8周两组差异均有统计学意义（均P〈0．05）。与DN组比较，微炎症组小鼠电镜下肾小管细胞中空泡增多，同时伴有线粒体水肿、变形以及数量减少；且微炎症组小鼠肾组织中的胆固醇沉积，纤维化相关分子的蛋白表达均高于DN组（均P〈0．05）；进一步研究表明，与DN组比较，微炎症组小鼠肾组织CXCL16信号通路相关分子的蛋白表达均增加（均P〈0．05）。体外高糖＋IL-1β组细胞CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA和蛋白表达及胆固醇沉积均高于高糖组（均P〈0．05）；转染siRNA后，与高糖＋IL-1β组比较，高糖＋IL-1β＋siCXCL16组HK-2细胞CXCL16信号通路相关分子、纤维化相关分子的mRNA及蛋白表达均降低（均P〈0．05），胞内胆固醇沉积和胆固醇酯的含量减少（P〈0．05）。结论微炎症可加剧DN肾小管间质损伤，而下调CXCL16的表达可改善HK-2细胞的脂质沉积及细胞损伤。其中机制可能与CXCL16／CXCR6途径和胞内脂质沉积有关。

炎性反应激活CXCL16／CXCR6通路促进终末期肾病动脉粥样硬化

目的研究炎性反应时CXC趋化因子配体16（CXC chemokine ligand 16，CXCLl6）／CXC趋化因子受体6（CXC chemokine receptor 6，CXCR6）通路对终末期肾病（ESRD）动脉粥样硬化进展的影响，并进一步探讨其机制。方法根据血清C反应蛋白（CRP）的水平将40例ESRD患者分为对照组（CRP〈3．0mg／L，n=15）和炎症组（CRP≥3．0mg／L，n=25）。临床检测患者的生化指标和脂质谱。取ESRD患者动静脉内瘘手术时部分切除的桡动脉组织，HE染色、Filipin染色观察桡动脉组织泡沫细胞形成和胆固醇沉积情况；免疫组化和免疫荧光染色检测桡动脉组织中CXCL16／CXCR6通路相关蛋白、嘌呤受体P2X配体门控通道7（purinergicreceptor P2X ligand-gated ion channel7，P2X7R）蛋白表达，以及炎性因子单核细胞趋化蛋白1（MCP-1）、肿瘤坏死因子α（TNF-α）、CD68的表达。结果与对照组比较，炎症组ESRD患者桡动脉组织中MCP-1、TNF-α的表达和巨噬细胞浸润均增加（均P〈0．05）。进一步分析发现，与对照组相比，炎症组患者桡动脉中的泡沫细胞和胆固醇沉积明显增加，CXCL16、CXCR6和解整合素样金属蛋白酶（a disintegrin and metalloproteinase，ADAM）10的表达均升高（均P〈0．05）。且ESRD患者桡动脉中CXCL16蛋白的表达与血浆中CRP水平呈正相关（r=0．79，P〈0．05），与桡动脉组织中P2X7R蛋白表达呈正相关（r=0．65，P〈0．05）。结论炎性反应通过激活CXCL16／CXCR6通路促进ESRD患者桡动脉中泡沫细胞的形成，进而促进动脉粥样硬化，且P2X7R活化可能参与该过程的调节。