白皮杉醇体外抗轮状病毒的作用研究

目的研究白皮杉醇(PIC)体外抗轮状病毒(RV)的作用及机制。方法采用RV-Wa株、RV-SA11株感染MA104细胞模型,MTT法评价白皮杉醇抗RV吸附、直接抑制RV以及抗RV生物合成作用;TCID50法检测白皮杉醇处理前后病毒滴度的变化;利用分子对接预测白皮杉醇与RV-Wa株VP8*蛋白的结合度;RT-qPCR法检测VP6 mRNA的表达;间接免疫荧光法检测VP6蛋白的表达;Western blot检测VP6、IκBα、NF-κBp65、p-NF-κBp65蛋白的表达;ELISA法检测细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。结果白皮杉醇具有直接抑制RV和抗RV生物合成的双重作用,无抗RV吸附作用。对白皮杉醇直接抑制RV作用进行研究,结果显示,白皮杉醇处理后病毒滴度显著下降;分子对接结果显示,白皮杉醇与RV-Wa株VP8*蛋白有较好的结合能力。对白皮杉醇抗RV生物合成作用进行研究,RT-qPCR结果表明白皮杉醇可以下调VP6 mRNA的表达;Western blot结果表明,RV感染后经白皮杉醇处理可以下调VP6、p-NF-κBp65蛋白的表达,上调IκBα蛋白的表达;ELISA结果表明白皮杉醇可以降低细胞上清液中IL-1β、IL-6、TNF-α的含量。结论白皮杉醇具有直接抑制RV和抗RV生物合成的双重作用,可能通过与RV-Wa株VP8*蛋白相互作用阻止RV入侵细胞以及抑制NF-κBp65磷酸化减轻RV感染引起的炎症反应发挥抗RV作用。

蜘蛛香不同提取物抗轮状病毒的作用研究

目的研究蜘蛛香不同提取物抗轮状病毒(Rotavirus,RV)的作用。方法采用RV-Wa株感染MA104细胞模型,MTT染色法测定病毒抑制率,考察蜘蛛香水提物、70%乙醇提取物(ZZX-1)及90%乙醇提取后经大孔吸附树脂法纯化所得提取物(ZZX-2)体外抗RV的作用;采用免疫荧光和实时荧光定量PCR(qRT-PCR)检测RV结构蛋白VP6的表达变化,验证蜘蛛香抗RV作用;采用RV-Wa株感染Caco-2细胞,qRT-PCR检测蜘蛛香对神经营养因子GDNF、紧密连接蛋白ZO-1和促炎因子[肿瘤坏死因子-α(TNF-α)、白细胞介素-1β(IL-1β)、白细胞介素-6(IL-6)]的影响。结果蜘蛛香水提物无抗RV的作用;蜘蛛香醇提物ZZX-1和ZZX-2具有抗RV生物合成作用。免疫荧光和qRT-PCR实验结果表明,ZZX-1和ZZX-2均能够抑制VP6蛋白的合成以及降低VP6 mRNA的表达,抑制RV的合成。与RV组相比,ZZX-1和ZZX-2能够显著提高GDNF、ZO-1 mRNA的相对表达量(P<0.001或0.01),降低TNF-α、IL-1β、IL-6 mRNA的相对表达量(P<0.0001或0.001)。结论蜘蛛香醇提物ZZX-1和ZZX-2具有抗RV生物合成作用,可能通过提高GDNF、ZO-1基因表达,降低炎症因子IL-1β、IL-6、TNF-α的基因表达发挥抗RV感染作用。