流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞杀伤效能的实用性比较

目的流式细胞术和乳酸脱氢酶(LDH)释放法检测自然杀伤细胞(natural killer cell,NK细胞)体外杀伤功能的比较和优化。方法以人外周血PBMCS经体外诱导扩增的NK细胞为效应细胞,K562细胞作为靶细胞,按5:1、10:1、20:1、40:1效靶细胞比共培养,分别采用LDH法和流式细胞术检测靶细胞死亡率。结果在4个效靶细胞比实验组中,5:1效靶细胞比条件下LDH释放法检测的靶细胞死亡率显著低于CFSE/PI标记法,其他3个效靶细胞比组的两种方法检测结果无显著性差异。高效靶比、细胞毒作用较强时,LDH释放法的结果误差较大,可重复性不强。结论流式细胞术和LDH释放法检测NK细胞体外杀伤效能的最佳效靶细胞比为10:1。流式细胞术比LDH法灵敏度更高,稳定性更好;在效靶细胞比为10:1的实验条件下,LDH法可作为流式细胞术的替代方法。

外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势

目的:研究外周血自然杀伤(NK)细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。方法:采集10份健康供血者的外周血,采用无血清培养法对NK细胞进行扩增培养,并分别在培养的第0天、第4天、第8天、第12天、第16天、第20天进行细胞观察及计数、细胞表型分析和杀伤活性检测,总结外周血NK细胞培养的扩增效率及杀伤活性的变化趋势。结果:外周血单个核细胞(PBMCs)经诱导培养2~3 d即出现细胞集落。随着培养时间的延长,NK细胞的数量逐渐增加,不同培养时间点(第4天、第8天、第12天、第16天和第20天)NK细胞的数量相比,P<0.05;NK细胞的杀伤活性从培养第8天开始升高,至第12天达到峰值后开始下降,不同培养时间点NK细胞的杀伤活性相比,P<0.05;NK细胞的比例先增加后下降(在培养至16 d达到峰值后开始下降),其比例的下降趋势较杀伤活性的下降趋势滞后,不同培养时间点NK细胞的比例相比,P<0.05;各时间点NK细胞的存活率均大于95%。结论:采用无血清培养法对外周血NK细胞进行培养时,随着培养时间的延长,外周血NK细胞的数量呈逐渐增加的趋势。外周血NK细胞的杀伤活性在培养12 d后出现下降的趋势。在培养的第12天~第16天,NK细胞的杀伤活性较强,细胞数量较多,细胞纯度较高。采用无血清培养法体外扩增NK细胞的效率较高。