中信国健第四届益赛普高峰论坛纪要

2009年7月24日来自全国100多位风湿免疫学及相关学科的专家和学者，参加了由上海中信国健药业有限公司主办的第四届益赛普高峰论坛。现将会议主要内容总结如下。

论我国医药企业的专利围网战略

目的:促进我国医药企业制定和实施专利战略。方法:通过分析我国医药企业制定和实施专利围网战略的必要性,引出专利网的概念及作用,并重点阐述了我国医药企业如何实施专利围网战略的方法。结果和结论:我国医药企业寻求创新和发展,必须制定和实施专利战略。

两种基于RAJI细胞的抗CD20单抗新型定量方法的比较及在药物代谢动力学中的应用

建立和比较基于RAJI细胞的流式细胞法(Flow cytometry assay,FCA)和细胞放射免疫法(Immuno-radiametric assay,IRA)测定重组抗CD20人源化单克隆抗体(r-anti-CD20zumAb)的浓度。两种方法均利用标记后抗体和被检测抗体竞争性结合RAJI细胞表面的CD20抗原,由标记后抗体的荧光或放射性变化而间接反应检测抗体的浓度。FCA和IRA定量范围分别为0.1～100mg/L和0.04～20mg/L,FCA的日内及日间精密度分别小于4.0%和3.0%,准确度为-1.7%～1.1%,IRA的日内及日间精密度值均小于7.0%,准确度为-8.9%～13.2%。方法学确证研究表明,两种方法均具有良好的特异性、灵敏度、精密度和准确度。血浆样品分析结果显示,两种方法具有良好的一致性,是检测猕猴血浆中人源化单克隆抗体浓度的理想方法。

超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱鉴定重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白

采用超高效纳升液相色谱-电喷雾串联质谱对重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白进行了分析。样品经胰蛋白酶酶切后,进行液相色谱-串联质谱分析和数据库检索。结果表明,分别有5个和7个肽段匹配于人肿瘤坏死因子受体和人Iggamma-1chainCregion。比对分析表明,重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白中检测到的人IgG的7个肽段完全与人IgG1的序列匹配,与其它3个亚型只有部分肽段匹配。说明重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白一级结构正确,Fc片段确实为人IgG1的Fc片段。

重组人血小板生成因子对辐射后C57小鼠及MO7e细胞的保护作用

目的:观察国产重组人血小板生成因子(rhT-PO)对辐射所致C57小鼠血小板减少的治疗作用及对辐射所致MO7e细胞凋亡的影响。方法:雄性C57小鼠137铯γ射线4Gy全身照射,于照射前及照射后不同时间点剪尾取血,测定血小板数。MTT法测定辐射后MO7e细胞的存活率,流式细胞仪、透射电镜观察MO7e细胞的凋亡。结果:rhTPO 4.5-18μg/kg可剂量依赖性地升高由137铯辐射降低的C57小鼠外周血小板水平,其升高血小板作用比白介素11强而快。在体外实验中,rhTPO 10、100μg/L能明显提高MO7e细胞存活率,减少辐射引起的细胞凋亡。结论:国产重组人血小板生成因子能降低辐射对小鼠造血系统的损伤,减少辐射引起的MO7e细胞的凋亡,升高细胞存活率,具有一定的辐射保护作用。

新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究现状

新城疫(Newcastle disease,NDV)是当今世界上最严重的禽类传染病之一,被世界动物卫生组织(OIE)列为必须报告的传染病。同预防其他传染病一样,新城疫的主要防控手段仍是免疫接种。F蛋白是构成新城疫病毒(NDV)致病性的分子基础之一。综述了国内外新城疫F蛋白基因工程疫苗的研究进展。

不同通气搅拌条件下体外培养CHO细胞高表达西妥昔单抗的研究

以稳定表达西妥昔单抗的CHO细胞为研究对象,采用无血清悬浮培养方式,建立4种不同的通气及搅拌方式,通过对细胞密度、细胞活率以及蛋白浓度进行跟踪检测,考察其对细胞生长和蛋白表达水平的影响。实验结果表明新型通气搅拌方式的细胞密度和蛋白表达量优于或相当于传统的微泡通气方式,同时还改善了细胞培养的微环境,且在清洗验证上具有很大优势,为大泡通气在动物细胞培养的应用方面奠定了一定的基础,也为优化中试规模制备西妥昔的CHO细胞培养工艺奠定了基础。

无血清培养基干粉的生产工艺优化

为了研究瞬时温度的提高对培养基加工的影响,通过不同的固定温度处理培养基,考察不同温度长时间处理后的培养基对CHO细胞的生长和表达的影响。结果表明,40℃处理后的效果最佳,处理工序与对照工艺相比,大大简化,产能有很大提升,为大规模生产培养基设备的选型和生产参数设置提供理论依据,且提高了设备的生产效率。

检测恒河猴血清中trastuzumab浓度的一种直接酶联免疫竞争法(英)

采用ELISA法建立检测恒河猴血清中trastuzumab的酶联免疫竞争法,为研究人体内trastuzumab的药物动力学学和药效学提供依据。方法的测量范围是1～100μg/mL,最低检测限为1.0μg/mL。板内精密度范围91%～107%,相对标准偏差为1.5%～4.9%。板间精密度范围102%～110%,相对标准偏差为2.7%～15.4%。方法中未显示与重组人Ⅱ型肿瘤坏死因子受体-抗体融合蛋白、重组抗CD20单克隆抗体、丙种球蛋白等的交叉反应。此方法的特异性、灵敏度、精密度和准确度均满足恒河猴血清样品的分析,是检测猴和人体内trastuzumab的理想方法。

纳米抗体的性质及其应用

骆驼体内存在着天然缺失轻链的重链抗体,克隆其可变区得到的单域抗体是最小的功能性抗原结合片段,相对分子质量为15kD,称为纳米抗体。纳米抗体具有容易表达、稳定性强、可溶性好等优点。这种小型抗体在基础研究、新药开发和疾病诊断与治疗上具有广阔的应用前景。本文主要针对纳米抗体的性质与应用进行阐述。

洁净室生产环境的质量风险控制分析

文章通过建立一套行之有效的风险控制策略,旨在将洁净室生产环境的质量风险降低至可接受水平,使其符合法规要求和产品工艺要求,并通过企业新建洁净室项目进行质量风险控制应用分析。

某医药厂房洁净室净化空调系统AHU＋HEPA形式的应用

本文对AHU的原理、特点以及AHU＋HEPA空调系统进行了介绍，然后对某医药厂房洁净室净化空调工程AHU＋HEPA形式的设计与应用、变风量阀的应用进行了介绍，并详细介绍了相关验证调试方案内容。

基于优良自动化生产准则(GAMP)和21CFR第11部分的自动化系统及仪表在单克隆抗体制备中的应用

阐述了医药工业中优良自动化生产准则(GAMP)对自动控制系统的验证模型,对现场仪表的要求和校准管理策略,介绍了21CFR第11部分对医药工业自动化设备的规范及要求,并给出了基于以上准则和规范的自动化系统及仪表在单克隆抗体生产过程中的应用。

依那西普及其生物类似物临床药动学研究进展

通过检索依那西普及其生物类似物的临床药动学研究文献,对其药动学研究进展进行综述。结果显示,依那西普及其生物类似物具有相似的药动学特征;健康人及不同适应症人群之间的药动学特征没有显著差别;肾功能损害及心衰患者体内依那西普的消除不受疾病状态影响;合并使用传统DMARDs类药物甲氨蝶呤不会对其药动学特征产生影响;个体的体重,体表面积,年龄(<17)是影响其分布和消除的重要因素,而性别对依那西普的药动学没有显著影响。

免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的复性与纯化

目的建立免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的分离纯化工艺。方法免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38变性后,进行金属螯合柱层析复性和纯化,再用分子筛层析进行精纯,SDS-PAGE分析纯化产物。结果包涵体形式存在的免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38以8 mol/L尿素溶解效果较好;当复性梯度为稀释液从0到100%,共用时150 min,流速为2 ml/min时,复性效果较好,复性后的目的蛋白纯度可达95%以上;以凝胶柱Superdex 200进行分子筛层析效果较好,纯化产物的纯度可达98%以上。结论已建立了免疫毒素ScFv(anti HER2)-PE38的分离纯化工艺,为进一步的研究奠定了基础。

抗新生血管生成药ramucirumab的药理作用及临床评价

Ramucirumab是礼来公司研发的重组全人IgG1单克隆抗体。本品可以特异性结合人血管内皮生长因子受体2(VEGFR2)的胞外结构域,阻止VEGFR2与血管内皮生长因子A,C,D(VEGF-A,VEGF-C,VEGF-D)的相互作用,从而抑制VEGF激活VEGFR2以及下游信号传导途径。2014年4月,FDA批准了ramucirumab单药用于治疗先前氟尿嘧啶或铂制剂化疗后发生疾病进展的晚期或转移性胃癌或胃-食管结合部腺癌患者。本文对ramucirumab的药理作用、药动学、临床有效性及安全性等进行了综述。

重组抗表皮生长因子受体单克隆抗体生物学活性检测方法的建立

目的建立重组抗表皮生长因子受体(epithelial growth factor receptor,EGFR)单克隆抗体生物学活性检测方法。方法利用A-431细胞,对系列梯度稀释的重组抗EGFR单克隆抗体参考品和供试品进行检测,通过四参数方程进行拟合,计算二者的半数有效浓度(EC50)及供试品的相对比活性,并对该方法进行专属性、精密度(重复性、中间精密度)和准确度验证。结果重组抗EGFR单克隆抗体供试品及参考品在该方法中均存在明显的量效关系,四参数拟合的曲线呈典型的反S型曲线。人Ig G1亚型免疫球蛋白(阴性对照)与A-431细胞无交叉反应,不呈现与重组抗EGFR单克隆抗体供试品相似的剂量-反应曲线;同一名试验人员重复6次检测结果的RSD为5%,同一名试验人员3个工作日检测结果的RSD为4%,3名试验人员3次检测结果的RSD为10%,不同浓度的3个供试品溶液生物学活性理论值和检测值的相对误差分别为10%、8%和12%,均满足方法验证的可接受标准。结论成功建立了重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性检测方法,该方法专属性较强,精密度良好,准确度较高,可作为重组抗EGFR单克隆抗体生物学活性的常规检测方法。

第五届益赛普高峰论坛会议简况

2010年4月24至25日在天津，来自全国的100多位从事风湿性疾病临床工作的专家学者参加了由上海中信国健药业股份有限公司主办的益赛普上市五周年暨第五届益赛普高峰论坛。本届论坛共设10个演讲主题，覆盖了类风湿关节炎（RA）、强直性脊柱炎（AS）基础和临床研究热点，总结了益赛普治疗幼年特发性关节炎（JIA）以及复发性多软骨炎的经验，并介绍了生物制剂治疗患者接种疫苗的安全性以及肿瘤发生风险等。

急性淋巴细胞白血病新型肿瘤免疫治疗药物blinatumomab

复发性或难治性前体B细胞急性淋巴细胞白血病,是一种预后效果不良的淋巴细胞白血病。目前,被批准用于治疗这类疾病的药物还较少。美国FDA于2014年12月3日通过加速审批批准了blinatumomab(商品名BlincytoTM,代号AMG103)用于治疗费城染色体阴性的复发性或难治性前体B细胞急性淋巴细胞白血病。Blinatumomab是一种基于Amgen公司双特异性T细胞连接系统开发而来的肿瘤免疫治疗药物,它能选择性地靶向结合患者过度增殖的B细胞淋巴母细胞表面的CD19蛋白,同时特异性地结合T细胞表面的CD3蛋白,从而激活T细胞,通过活化的T细胞来识别和杀灭过度增殖的B细胞淋巴母细胞。本文对blinatumomab的药理作用、药动学、临床有效性以及安全性进行了综述。

关于机电安装工程造价控制分析探讨

机电安装工程的造价控制问题一直是机电安装工程的重中之重。本文论述了机电安装工程造价的主要内容及特点,并分析了造价失控的原因,最后阐述了做好工程造价需要采取的措施。