枸杞多糖通过抑制NF-κB/NLRP3通路减少视网膜色素变性小鼠感光细胞凋亡

目的探讨枸杞多糖可否通过抑制核因子激活的B细胞的κ-轻链增强子/NOD样受体热蛋白结构域相关蛋白3(NF-κB/NLRP3)信号通路减少视网膜色素变性(RP)小鼠视网膜光感受器细胞的凋亡。方法(1)体外实验将小鼠视网膜神经节细胞(661W细胞)分为正常组、模型组、枸杞多糖低剂量组(40 mg/L)、中剂量组(80 mg/L)、高剂量组(160 mg/L)和阳性药物对照组(NLRP3抑制剂,160 mg/L);分别用50、100、200和400μmol/L四种剂量的H_(2)O_(2)干预661W细胞,选出最佳H_(2)O_(2)浓度(200μmol/L)造模,细胞计数试剂盒CCK-8测定细胞活力,流式细胞仪检测细胞凋亡率,免疫荧光检测NLRP3标志物的表达,酶联免疫吸附试验(ELISA)和免疫印迹法(WB)检测细胞凋亡标志物的表达。(2)选用C57/BL6小鼠和Rd10小鼠进行体内实验,分组为正常组、模型组、枸杞多糖低剂量组(0.08 g/d)、中剂量组(0.16 g/d)、高剂量组(0.32 g/d)和阳性药物对照组(NLRP3抑制剂,0.08 g/d),其中正常组为C57/BL6小鼠,其余组为Rd10小鼠,每组10只,相对应的药物连续灌胃4周,通过视网膜电图、组织病理学检查和WB等方法观察NF-κB/NLRP3通路及细胞凋亡标志物的表达,评估枸杞多糖对视网膜光感受器细胞凋亡的影响。结果(1)体外实验中,与正常组相比,模型组661W细胞凋亡率明显增加(P<0.01),且NF-κB/NLRP通路关键蛋白NLRP3、NF-κB、p-NF-κB和促凋亡蛋白caspase-3的表达水平上调(P<0.01),Bax/Bcl-2的比值增大(P<0.01),白细胞介素(IL)-1β和肿瘤坏死因子(TNF)-α的浓度显著升高(P<0.01)。与模型组相比,高剂量的枸杞多糖降低了661W细胞的凋亡率(P<0.01),下调了NF-κB/NLRP3通路关键蛋白NF-κB、NLRP3、p-NF-κB和caspase-3的表达(P<0.01),减小了Bax/Bcl-2的比值(P<0.01),降低了IL-1β和TNF-α的浓度(P<0.01)。(2)体内实验中,高剂量的枸杞多糖显著增加了Rd10小鼠外核层(ONL)厚度的形态变化以及a波和b波振幅的功能变化(P<0.01),下调了NF-κB(P<0.05)、NLRP3、p-NF-κB和caspase-3的表达水平(P<0.01),减小了Bax/Bcl-2的比值(P<0.01),降低了IL-1β(P<0.01)和TNF-α(P<0.05)的浓度。结论枸杞多糖可能通过抑制NF-κB/NLRP3通路改善视网膜形态和功能,保护光感受器免受细胞凋亡的影响。