鸭沙门菌高密度发酵工艺的研究

为了提高鸭沙门菌的生产量,简化生产流程降,低生产成本。以GMP为生产指导原则,采用10L发酵罐对影响鸭印第安纳沙门菌高密度发酵的温度、pH值、相对溶氧量、接种量等7个方面进行单因子优化试验。研究结果显示,鸭印第安纳沙门菌在以4%接种量,培养温度为38℃,维持培养基的pH值为7.5,保持溶氧量为40%,150rpm/min的转速和连续补加葡萄糖的方式培养20h后,发酵菌数可达到53.7亿CFU/ml,本研究结果为沙门菌疫苗大规模发酵生产奠定了基础。

徐州及周边地区鸭源沙门菌的分离鉴定及其耐药性、毒力基因分析

旨在了解徐州及周边地区鸭源沙门菌血清分布、耐药状况及毒力基因携带情况。采集徐州及周边地区病鸭脏器329份进行沙门菌分离、双重PCR鉴定及血清分型;采用Kirby-Bauer(K-B)法进行抗菌药物敏感性试验;设计10对引物,对6大类耐药基因进行检测;PCR检测与沙门菌致病性相关的8个毒力基因。结果:共分离49株鸭源沙门菌,分离率为14.9%;鉴定出13种血清型,优势血清型为印第安纳沙门菌、阿贡纳沙门菌和鸭沙门菌。耐药性结果显示:分离株对氨苄青霉素(AMP)和头孢曲松(CRO)耐药率为100%,对土霉素(OXY)、阿莫西林/克拉维酸(AMC)、卡那霉素(KAN)、利高霉素(NA)、强力霉素(DOX)、恩诺沙星(ENR)、环丙沙星(OFL)抗菌药物的耐药率均超过50%以上。耐药基因blaTEM-1检出率为100%,blaPSE-1、aadA1、aadA2、tetA、gyrA、sul2基因检出率超过50%以上,parC、floR和clmA基因检出率分别为44.8%、30.6%和26.5%。毒力基因检测发现spvR(12.2%)携带率较低,mgtC和stn基因检出率为100%,invJ、sseL、siiE、sopB以及fimA基因携带率分别为75.6%、53.3%、89.6%、98.2%和97.9%。研究结果表明,徐州及周边地区鸭沙门菌血清型分布较广,分离株的耐药性及多重耐药较严重,耐药基因和毒力基因分布广泛。

鸭源沙门菌三价油乳剂灭活疫苗的制备及免疫效果

以江苏徐州地区主要流行的印第安纳沙门菌、阿贡纳沙门菌和鸭沙门菌3株鸭源沙门菌为研究对象,采用高密度发酵制备多价油乳剂灭活疫苗,检验疫苗性状并对疫苗免疫后雏鸭血清抗体水平的消长规律和淋巴细胞的活性进行检测,评价疫苗对雏鸭的免疫保护效果,以期制定出合理的免疫程序。结果显示,制备的疫苗为油包水剂型,物理性状稳定,无菌检测合格。雏鸭免疫抗体水平监测结果显示,单次免疫,抗体水平在免疫后3周达到高峰;多次免疫,抗体水平在免疫后5周达到高峰,7周后依然维持较高水平。E玫瑰花环试验检测T淋巴细胞数量,免疫组明显高于对照组。动物免疫试验结果显示,制备的三价油乳剂灭活疫苗可以有效抵抗强毒菌株的攻击,动物保护率达到87%以上。本研究制备的鸭源沙门菌多价油乳剂灭活疫苗性状稳定,免疫效果好,能有效抵抗强毒菌株攻击,为鸭沙门菌病的预防提供有效的防控生物制品。