河豚鱼皮胶原寡肽的毒理学安全性评价

以河豚鱼皮作为原料采用两步酶解法制备河豚鱼皮胶原寡肽,分子量分布主要集中在100 u^1 000 u。根据《食品安全性毒理学评价程序和方法》和《化学药物刺激性、过敏性和溶血性研究技术指导原则》的要求,利用动物试验对河豚鱼皮胶原寡肽的安全性进行评价。急性经口、经皮毒性试验选用SD大鼠,大鼠经口LD_(50)>5 000 mg/kg,经皮LD_(50)均>2 000 mg/kg;皮肤、眼刺激试验选择健康白色家兔皮肤刺激强度平均分值为0,平均眼刺激积分指数(I.A.O.I)为0,眼刺激平均指数(M.I.O.I)48 h为5。皮肤变态反应(致敏)试验选用豚鼠,致敏强度为Ⅰ级。

Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体ATP酶6和ATP酶8基因表达的影响以及与能量代谢障碍的关系

目的探讨Cr(Ⅵ)对肝细胞线粒体ATP酶6和ATP酶8基因表达水平与能量代谢的影响及其相互联系。方法用Cr(Ⅵ)2,8和32μmol·L-1分别处理体外培养的人胚L-02肝细胞24 h后,用细胞总RNA提取试剂盒分离RNA,线粒体ATP酶6和ATP酶8 mRNA表达水平用逆转录-荧光定量聚合酶链反应(qRT-PCR)测定;细胞ATP含量、线粒体呼吸链复合体酶Ⅴ活性与细胞活性氧(ROS)含量分别用化学发光法、紫外分光光度法和荧光分光光度法检测。结果与正常对照组相比,Cr(Ⅵ)2,8和32μmol·L-1使ROS显著升高(P<0.05);与正常对照组相比,Cr(Ⅵ)2μmol·L-1可使ATP酶6和ATP酶8基因表达水平增高(P<0.05),Cr(Ⅵ)8和32μmol·L-1使之明显降低(P<0.05);而呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量均随Cr(Ⅵ)浓度的增加而显著降低(P<0.05)。ATP酶6和ATP酶8基因表达与呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量呈正相关(r=0.858,0.795,0.809,0.766,P<0.01),与ROS水平呈负相关(r=-0.738,-0.801,P<0.01)。结论 Cr(Ⅵ)能诱导肝细胞ATP酶6和ATP酶8基因表达水平改变,导致线粒体呼吸链复合体酶Ⅴ活性及细胞内ATP含量降低。

外勤交通警察呼吸系统症状发生率及相关因素的研究

目的调查长沙市外勤交通警察呼吸系统症状发生率及相关影响因素,为交通性空气污染对人体呼吸系统影响提供科学依据。方法应用横断面调查方法,对长沙市429名外勤交警的呼吸系统症状发生率及其影响因素进行了初步调查。结果(1)外勤交警呼吸系统症状:咳嗽、有痰、咳嗽并有痰、呼吸困难的发生率分别为45.22%、55.71%、36.82%、48.95%,明显高于对照组(P<0.05)。(2)Logistic逐步回归分析表明危险因素主要有外勤工作年限(X1)、吸烟(X2)、年龄(X3)。结论外勤交警呼吸系统症状发生率随着外勤工作年限的增加而明显升高。

甲醛对雌性大鼠卵巢组织Fas凋亡途径相关基因表达的影响

目的:观察甲醛对雌性大鼠卵巢组织Fas,caspase-8和caspase-3表达的影响,探讨甲醛对雌性大鼠卵巢毒性的分子机制。方法:将40只雌性SD大鼠随机分为正常对照组和3个不同浓度甲醛处理组,腹腔注射甲醛,剂量分别为20.0,2.0和0.2mg/kg,每天1次,连续14d后处死所有大鼠后取卵巢组织,用RT-PCR检测Fas和caspase-8mRNA表达,Western印迹检测Fas蛋白表达,分光光度法检测caspase-8和caspase-3的活性。结果:甲醛染毒组动物卵巢组织Fas与caspase-8mRNA表达以及caspase-8和caspase-3活性明显高于对照组,且随剂量的增加而增加(P<0.05)。结论:Fas基因表达与caspase活性的增强可能是甲醛诱导雌性动物卵巢毒性的重要机制。

草甘膦对GC-1小鼠精原细胞的毒性作用及N-乙酰半胱氨酸的干预效应

摘要：为探讨41％草甘膦水溶液（农达）对雄性生殖细胞的毒性及其作用机制以及N-乙酰半胱氨酸（N-acetylcysteine，NAC）的干预效应。以GC．1小鼠精原细胞为受试细胞，设正常对照组、草甘膦染毒组（60、90、120、150、180mg·L-1）、NAC干预组（10mmol·L NAC＋90mg·L-1农达）。MTT法检测细胞存活率，Giemsa染色法观察细胞的形态学改变，彗星试验检测细胞DNA损伤，比色法检测细胞培养液乳酸脱氢酶（LDH）以及细胞内超氧化物歧化酶（SOD）、谷胱甘肽（GSH）及丙二醛（MDA）水平的变化。结果显示，随着草甘膦染毒浓度增加，细胞存活率逐渐下降妒〈0．01），彗星阳性率逐渐升高（P〈0．01）；与对照组相比，草甘膦染毒组LDH活性增加（P〈0．05，60mg·L-1组除外），MDA生成量增多（P〈0．05），GSH含量降低（P〈0．05）和SOD活性降低（P〈0．05）。抗氧化剂NAC预处理具有相应的拮抗作用。研究表明，60～180mg·L。浓度草甘膦对GC-1细胞有明显的损伤作用，其机制可能是草甘膦诱导氧化应激，导致细胞通透性增加和DNA损伤。抗氧化剂NAC对草甘膦的细胞毒性具有一定保护作用。

草甘膦对小鼠的致突变作用研究

背景与目的:研究草甘膦对小鼠的致突变作用。材料与方法:采用骨髓微核试验:以不同剂量(2320、1160、580mg/kg)的草甘膦分2次经口灌胃染毒小鼠,每次间隔24h,于末次染毒后6h处死小鼠,检测骨髓嗜多染红细胞微核率;雄性小鼠精子畸形试验:设1160、580、290mg/kg的3个草甘膦剂量组,经口灌胃连续染毒5d,于首次染毒后第1、4周分2批处死动物,常规观察精子畸形率、精子数和睾丸、附睾重量及其脏器系数的变化。两种实验同时设阴性对照组(蒸馏水)和阳性对照组(CP40mg/kg)结果:2320mg/kg剂量组的微核率明显高于阴性对照组(P<0.01),染毒剂量与骨髓微核率呈现剂量依赖关系(r=0.588,P<0.01)。草甘膦染毒后1周,与阴性对照组比较,580mg/kg、1160mg/kg剂量组的精子畸形率增加而精子数减少(P<0.05,P<0.01),1160mg/kg剂量组的附睾重量及附睾系数明显下降(P<0.05);草甘膦染毒后4周,与阴性对照组比较,1160mg/kg剂量组的精子畸形率增高,精子数减少(P<0.05),睾丸和附睾重量减轻。结论:在本实验条件下,草甘膦对小鼠具有生殖毒性并具有一定的致突变作用。

钩吻提取液对Hela细胞生长增殖和细胞周期的影响

目的探讨钩吻(GelsemiumelegansBenth)提取液对Hela细胞生长增殖以及细胞周期的影响。方法采用XTT法分析细胞增殖,Timelapse显微镜形态观察,流式细胞仪检测凋亡和细胞增殖状态,综合评价钩吻提取液抗Hela细胞生长和增殖的作用。结果钩吻B组分具有明显的抑制Hela细胞增殖和诱导凋亡,且存在明显的剂量和时间-效应关系。经钩吻B处理的Hela细胞周期发生明显变化,G0/G1期细胞比例降低,S期细胞比例增加,而G2/M期细胞比例变化不明显。结论钩吻B组分可抑制Hela细胞增殖、诱导凋亡,具有明显的抗肿瘤细胞的作用;钩吻B组分主要阻止细胞由G1期向S期转化,并在此阶段诱发凋亡。

乐果对小鼠骨骼肌细胞毒性作用及凋亡的诱导

目的研究乐果对小鼠骨骼肌的细胞毒性和凋亡的诱导效应,探讨急性有机磷农药中毒中间型综合征(IMS)肌无力发生的细胞学基础。方法以35,350,3500μmol/L乐果浓度接触3h及350μmol/L乐果浓度接触3,9,24h,观察乐果对小鼠骨骼肌细胞形态、细胞活力以及对细胞凋亡率的影响。结果乐果具有明显的细胞毒性,使乳酸脱氢酶(LDH)漏出增加和细胞存活率明显下降,并具有明显的剂量依赖关系(r=0.684,P<0.01)和时间依赖关系(r=0.955,P<0.01);乐果处理能诱导明显的骨路肌细胞凋亡形态学变化及凋亡率增加。结论乐果对离体骨骼肌细胞具有明显细胞毒性,并诱导骨骼肌细胞的凋亡,这可能在IMS的发病过程中发生作用。

五氯酚钠对雄性小鼠的生殖毒性作用

为研究五氯酚钠(PCP-Na)对雄性小鼠的生殖毒性作用,将100只昆明雄性小鼠随机分为5组:3个染毒组、1个阴性对照组(蒸馏水)和1个阳性对照组(环磷酰胺40mg·kg-1).以不同剂量(13.44、26.88、53.76mg·kg-1)PCP-Na经口染毒,连续染毒5d,每天1次.染毒结束后第2d和第23d分两批处死动物,检测精子数量、精子畸形率以及睾丸、附睾重量及其脏器系数的变化.结果表明,PCP-Na染毒结束后第2d,与阴性对照组相比,高剂量组(53.76mg·kg-1)精子畸形率显著增加(p<0.05),睾丸、附睾重量及附睾系数显著下降(p<0.05),其他指标无显著变化(p>0.05).中、低剂量组(26.88、13.44mg·kg-1)各检测指标与阴性对照组均无显著性差异(p>0.05);PCP-Na染毒结束后第23d,与阴性对照组相比,高剂量组(53.76mg·kg-1)精子畸形率显著增加、精子密度显著减少、睾丸和附睾重量显著下降(p<0.05),中剂量组(26.88mg·kg-1)附睾重量显著下降(p<0.05),其他指标均无显著变化(p>0.05);PCP-Na引起的精子畸形以头部畸形为主,主要为无定形,其次为无钩形、香蕉形和尾折叠.以上结果提示,在本实验条件下,PCP-Na对雄性小鼠具有明显的生殖毒性.

地塞米松不同给药方式对胸膜炎的干预效应及副作用研究

目的研究地塞米松(Dex)以不同灌胃给药方式对实验性胸膜炎的干预效应及副作用,为Dex的合理应用提供实验依据。方法采用大鼠角叉菜胶诱导胸膜炎模型,致炎前以Dex5mg/kg分别灌胃给药1次与连续给药7次,检测胸腔渗出液炎症反应指标及脂质过氧化损伤指标的变化,并计算脾脏系数和胸腺系数。结果Dex5mg/kg短时给药与连续给药对实验性胸膜炎均有一定干预效果,表现为渗出液中白细胞计数下降和蛋白含量减少,MDA和NO含量降低;但连续给药组大鼠的脾脏系数、胸腺系数明显低于短时给药组,体重也明显减轻。结论地塞米松两种灌胃给药方式对大鼠胸膜炎均有一定的干预作用,但Dex连续给药易发生免疫抑制、体重减轻等副作用。

对化学毒物诱导肝细胞线粒体损伤的保护作用机制研究进展

肝脏是化学毒物攻击的主要靶器官,线粒体作为细胞生命活动的主要亚细胞器,是许多外源化合物最敏感、也是最早侵入的靶点。探讨化学毒物诱导的肝细胞线粒体代谢障碍及保护剂的拮抗作用具有重要意义。本文从减轻氧化损伤、稳定线粒体膜功能、抑制线粒体钙超载、维持线粒体电子传递链功能和调节线粒体依赖性相关因子等方面对化学毒物造成的肝细胞线粒体损伤的相关保护机制进行了综述。

甲醛对雌性大鼠卵巢结构及卵母细胞超微结构和凋亡的影响

目的:研究甲醛对雌性大鼠卵巢病理组织结构、卵母细胞超微结构及卵母细胞凋亡的影响。方法:将40只SD雌性大鼠随机分为正常组和3个不同浓度甲醛染毒组,腹腔注射甲醛,剂量分别为20.0、2.0和0.2 mg/kg,每天1次,连续14 d,14 d后处死所有大鼠取卵巢组织,应用HE染色光镜观察雌性大鼠卵巢组织病理形态变化,应用电镜技术观察雌性大鼠卵母细胞超微结构的变化,应用TUNEL染色观察卵母细胞凋亡的情况。结果:甲醛可引起雌性大鼠卵巢组织的病理结构变化,其病理变化的程度与甲醛呈剂量依赖性;电镜检查发现甲醛可破坏卵母细胞的超微结构,其超微结构变化的程度与甲醛亦呈剂量依赖性;TUNEL染色观察到甲醛染毒组大鼠卵母细胞的凋亡率均高于对照组,且中、高剂量组和对照组间凋亡率比较差异具有显著性意义。结论:甲醛对雌性大鼠的卵巢组织结构及卵母细胞超微结构造成不良影响,促使卵母细胞凋亡。

六价铬对肝细胞内活性氧和腺苷酸转运体1转录水平的影响

目的探讨重金属六价铬[Cr(Ⅵ)]的体外肝毒性。方法 L-02肝细胞经Cr(Ⅵ)0,2,4,8,16和32μmol.L-1分别染毒12,24或36 h后,采用逆转录-荧光定量聚合酶链反应(RT-qPCR)和荧光光度法分别对腺苷酸转运体1(ANT1)mRNA表达水平和活性氧簇(ROS)水平进行检测。结果 Cr(Ⅵ)32μmol.L-1处理细胞12和24 h后,ROS水平明显升高,而处理36 h后,ROS水平明显下降。Cr(Ⅵ)2～32μmol.L-1处理细胞12和24 h后,细胞内ANT1 mRNA呈明显低表达水平,而处理36 h后,细胞内ANT1 mRNA表达水平明显增高,达正常对照组的2倍左右。结论 Cr(Ⅵ)在早期(12,24 h)可使L-02肝细胞内ROS水平升高,发生氧化应激,在后期(36 h)可诱导ANT1 mRNA表达水平升高,发生能量代谢应激,可能是Cr(Ⅵ)诱导细胞线粒体损伤的分子毒性机制之一。

六价铬致癌机制的研究进展

对国内外关于六价铬的致癌机制研究进展进行了综述,着重介绍了六价铬通过还原中间产物、ROS引起DNA损伤和干扰细胞凋亡及周期调控以及影响核转录因子等途径可能存在的致癌作用。

电压依赖性阴离子通道在线粒体依赖性细胞凋亡中作用的研究进展

电压依赖性阴离子通道(VDAC)是线粒体外膜上含量极为丰富的孔状蛋白,是细胞内代谢物分子进出线粒体的必经通道,VDAC的功能状态与线粒体的代谢和功能关系十分密切。VDAC的异常通常会引发线粒体功能紊乱,导致ATP水平或转膜电位下降、细胞色素c释放等凋亡程序的启动。VDAC可与许多物质相互作用而发挥诱导细胞凋亡或抑制细胞凋亡的效应,从而在线粒体依赖性细胞凋亡途径中有着十分重要的作用。VDAC对细胞凋亡的影响机制可应用于药物治疗靶点、外源化学物毒性机制的研究,因此,VDAC的作用是近年来外源化学物所致细胞凋亡机制研究领域中的热点问题。

六价铬对L-02肝细胞线粒体功能的影响

目的 探讨六价铬 (Cr(VI) )对肝细胞线粒体与凋亡密切相关功能的影响。 方法 选取 2、4、8、16、3 2、64μmol/L 6个不同浓度的Cr(VI)溶液处理L -0 2人胚肝细胞 6h ,采用MTT法检测细胞活力和线粒体酶抑制率 ;荧光分光光度法检测线粒体膜通透性转运孔 (PTP)的开放程度和线粒体膜电位的 (△ψm)的变化。 结果 在 2～ 64 μmol/LCr(VI)处理浓度 ,Cr(VI)对L -0 2肝细胞具有明显的细胞毒性 ,其细胞存活率与Cr(VI)处理浓度呈负相关 (相关系数r =-0 .910 )。随着Cr(VI)浓度的增加L -0 2肝细胞线粒体总酶活性受到抑制 ;线粒体PTP孔开放程度增加 ;线粒体膜电位(△ψm)降低 ,且与对照组比较均具有显著性差异 (P <0 .0 5 )。 结论 Cr(VI)可对L -0 2肝细胞线粒体与凋亡相关的功能产生损伤效应。

酸性鞘磷脂酶在二氧化硅致小鼠胚肺成纤维细胞纤维化体外模型中的作用

目的观察酸性鞘磷脂酶(ASM)在二氧化硅(SiO2)粉尘致小鼠胚肺成纤维细胞(NIH3T3)纤维化过程中的变化及规律,探讨ASM在硅尘致肺纤维化体外模型中的作用。方法收集SiO2200 mg·L-1刺激小鼠原代肺泡巨噬细胞(PAM)12 h的培养上清再刺激小鼠胚胎成纤维细胞(NIH3T3)6,12,18,24,36和48 h,ELISA法测定PAM培养上清中白细胞介素8(IL-8)、肿瘤坏死因子ɑ(TNF-ɑ)及转化生长因子β1(TGF-β1)的含量;高效液相色谱法测定NIH3T3细胞内的ASM活性;Western蛋白质印迹法测定NIH3T3细胞内Ⅲ型胶原蛋白质的表达。结果 SiO2200 mg·L-1刺激PAM 12 h,培养上清中IL-8,TNF-ɑ及TGF-β1的分泌中明显增加(P<0.01)。PAM上清刺激NIH3T3细胞24,36和48 h,细胞ASM活性明显升高(P<0.05),在36 h达到峰值,加入地昔帕明1.25μmol·L-1细胞ASM活性随着时间延长而显著降低。Western蛋白质印迹法结果显示,PAM上清刺激NIH3T3细胞24,36及48 h,细胞内Ⅲ型胶原蛋白表达明显增加(P<0.05),在36 h达到峰值,加入地昔帕明1.25μmol·L-1组Ⅲ型胶原蛋白表达随着时间延长而降低。结论抑制ASM活性可能对改善肺纤维化有一定的作用。

酒石酸锑钾对肝L-02细胞的抑制和凋亡诱导影响

目的探讨酒石酸锑钾(PAT)对人胚肝L-02细胞的生长、细胞周期和诱导凋亡的影响。方法采用改良的噻唑蓝(MTT)比色法检测不同浓度PAT处理24、48、72、96及120 h对L-02细胞的生长抑制效应,用PI单染流式细胞术检测不同浓度PAT处理24 h诱导细胞周期的改变情况,用AnnexinV-FITC/PI双染流式细胞术检测不同浓度PAT作用24 h对细胞凋亡的影响。结果PAT染毒24、48、72、96及120 h,随PAT染毒剂量的增大,L-02细胞生长抑制率明显升高;浓度200μmol/L PAT作用24 h使细胞发生S期阻滞,≥400μmol/LPAT使细胞发生G1期阻滞;浓度200μmol/LPAT作用24h诱导细胞凋亡,≥400μmol/LPAT可导致细胞坏死。结论在一定剂量下,PAT可以显著抑制L-02细胞的生长增殖,低剂量PAT主要引起L-02细胞发生S期阻滞和细胞凋亡,高剂量PAT主要引起L-02细胞发生G1期阻滞和细胞坏死。