《医学免疫学》教学的几点体会

《医学免疫学》公认难“教”和难“学”。采取以各知识点的内在科学联系、知识体系的完整性为“纲”；以基本概念、基础理论的准确讲解为基本点；以内容新颖先进、重点突出为授课特点；适度讲授免疫学新进展、新理论；以新型的分子免疫学实验淘汰陈旧的实验内容，注重互动启发式、PBL和双语教学，能有效地激发学生的学习兴趣，知识掌握清晰、全面。

“免疫学论坛”教学模式在研究生教学中的探索与思考

免疫学内容素以深奥、抽象、记忆量大而使学生倍感困惑,为调动学生学习的主观能动性,我们以"免疫学论坛"的教学模式对研究生的免疫学教学进行改革。通过教学模式的改变,增加学生学习的积极性,让学生以点带面掌握并在一定程度上应用免疫学基本知识。

多媒体在免疫学教学中的应用

多媒体在免疫学教学中有诸多优势。对于提高教学效果，保证教学质量作用重大。

因材施教——成人教育免疫学教学之思考

成人教育不是缩水的学历教育，不应简单地将课时压缩和单纯削减内容。应该根据成教学生的特点制定相应的教学措施。我们实施了三项改革措施：一是理论讲授重新设计，突出了重点、难点和学科更新的知识；二是充分发挥了学生的自学能力，制定自学提纲、编写详细的讲义，为学生达到本科水平提供了有力的保障；三是考核方法多样化，改革考试构成，降低期末考试成绩所占比例，有利于调动学生的主观能动性，提高素质培养。

一非肌球蛋白重链9基因相关疾病家系患者的临床及分子生物学特点

目的:探讨一非肌球蛋白重链9基因相关疾病(MYH9-RD)家系的临床表型和分子生物学特性,以阐明MYH9-RD形成的分子机制。方法:通过临床评估和实验室检测对家系进行筛查,应用光学显微镜和自动血细胞计数仪对家系成员进行血小板计数及外周血细胞形态观察,应用聚合酶链反应和直接测序方法分析家系患者MYH9基因突变情况。结果:家系内MYH9-RD患者15例,所有患者均具有典型的"血小板减少、巨大血小板和粒细胞包涵体"三联症,而且都有轻至中度的出血倾向;临床表现具高度复杂性,并伴有严重的白血病、青光眼、心功能不全、转氨酶升高、血脂升高、哮喘、鼻炎及白内障等多种疾病;家系患者MYH9基因的所有外显子与侧翼区均未检测到致病性突变。结论:临床表现和实验室检测表明该家系MYH9-RD诊断成立,其临床表型复杂多样可能与家系患者MYH9基因的所有外显子与侧翼区未检测到致病性突变有关。

A、B型流感病毒HA1嵌合基因疫苗的构建及免疫保护研究

为制备能提供交叉保护的疫苗,本研究在证实A型、B型流感病毒HA1 DNA能够提供抗流感病毒保护的基础上,将编码A型和B型流感病毒HA1的基因构建在同一质粒中,制备成嵌合DNA疫苗。将该重组质粒免疫小鼠,并以致死量同种流感病毒A/PR/8/34或B/Ibaraki/2/85攻击,通过测定小鼠的血清抗HA抗体和保护效果(包括存活率、肺部病毒量和体重丢失率)来评价DNA疫苗的免疫效果。结果表明:A、B型流感病毒HA1嵌合DNA疫苗能保护小鼠抵抗两种致死量流感病毒的攻击,具有提供交叉保护的能力。

衣原体免疫逃逸机制的研究进展

衣原体作为一类专性细胞内寄生的原核微生物,具有广泛的致病谱,其在宿主体内的持续感染是衣原体致病的主要原因。研究表明,衣原体可通过逃避宿主细胞溶酶体的融合、下调宿主细胞MHC分子表达、抑制宿主细胞凋亡、干扰宿主细胞信号转导等途径逃避机体的免疫清除。

日本血吸虫童虫表膜结合多肽的亲和筛选与初步鉴定

目的筛选噬菌体十二肽库中与日本血吸虫(Schistosoma japonicum)童虫表膜特异性结合的多肽并鉴定。方法利用噬菌体十二肽库与日本血吸虫活童虫靶分子之间的亲和力结合,经3轮吸附-洗脱-扩增,从末次回收的结合噬菌体中随机挑取20个克隆进行测序。根据测序结果 ,选取出现次数最多的噬菌体克隆作为目标噬菌体,免疫组化检测目的噬菌体,并回输到已感染日本血吸虫的小鼠体内,2.5h后处死小鼠,回收肝脏和日本血吸虫童虫,分别洗脱与肝脏和童虫结合的噬菌体,进行统计学分析。结果经3轮筛选后,噬菌体回收率从第1轮的0.77×10-8到第3轮的0.75×10-5,说明噬菌体得到了有效富集。DNA测序结果表明,20个噬菌体克隆中的15个克隆呈现QHPRIRKOOOOO序列。免疫组化结果显示,表达该序列的噬菌体能与童虫表膜有效结合;体内回输试验证实,该噬菌体能有效地靶向结合于体内日本血吸虫童虫表膜。结论筛选获得的短肽QHPRIRKOOOOO能有效地靶向结合日本血吸虫童虫表膜。

1例遗传性MYH9相关疾病家系老年白内障患者临床和基因突变特点

目的了解海南省MYH9相关疾病家系1例老年白内障患者的临床表现和MYH9基因突变特点。方法对该患者进行临床体征评估和实验室检测;应用光学和电子显微镜进行外周血细胞形态和超微结构分析;对MYH9基因的40个外显子和侧翼区进行PCR扩增和测序,确认突变类型。结果通过临床表现和实验室检测,该患者具有典型的巨大血小板、血小板减少和粒细胞内包涵体三联症,且表型复杂多样如伴有长期高脂血症、蛋白尿、肌酐升高、心功能不全、转氨酶升高、哮喘、鼻炎等多种疾病;MYH9基因40个外显子和侧翼区未见致病突变(除25号外显子发生一同义突变,突变类型为A1143A)。结论该老年白内障患者MYH9基因未见致病性突变,其具有的严重临床表型可能与存在新的基因突变类型或新的致病基因有关。

宫颈癌与沙眼衣原体感染的相关性研究

目的 探讨宫颈癌的发生与沙眼衣原体 (Ct)的关系。 方法 利用单克隆抗体免疫荧光法 (IFA)对 5 3例宫颈癌患者、47例非宫颈癌患者、77例健康妇女的宫颈组织上皮细胞进行Ct检查。 结果 IFA检测宫颈癌患者、非宫颈癌患者和健康妇女的Ct阳性率分别是 3 9.6%、2 1.3 %和 6.5 %。宫颈癌组Ct感染率明显高于非宫颈癌组 (P <0 .0 5 )和健康对照组 (P <0 .0 1)。

湖南地区白血病MHC-Ⅰ类链相关基因A微卫星多态性分析

目的:探讨MHC-Ⅰ类相关链基因A(MHC class-Ⅰchain related gene A,MICA)与湖南地区白血病之间的相关性。方法:应用荧光聚合酶链反应-基因扫描技术和聚合酶链反应-序列特异性引物技术分析,对62例白血病患者和112名正常人群进行MICA基因第5外显子微卫星等位基因分型及MICA基因缺失检测。结果:慢性粒细胞白血病组(n=35)的MICA*A5基因频率显著低于正常对照组(RR=0.635,P=0.0380);急性淋巴细胞性白血病组(n=13)的MICA*A4基因频率显著低于正常对照组(RR=0.120,P=0.0297);而在急性非淋巴细胞性白血病组(n=14),MICA*A5基因频率显著高于正常对照组(RR=2.229,P=0.0218)。结论:本文数据显示,MICA-STR多态性与湖南地区白血病之间存在相关性;不同病理类型的白血病相关格局有所不同。

一个蒙古族人群HLA-A位点DNA多态性分析

目的人类白细胞抗原(Human Leucocyte Antigen,HLA)编码基因具有高度遗传多态性,有关中国人群HLA分布,已有的文献报道主要为汉族人群数据。本工作首次采用DNA分型技术,分析蒙古族HLA-A位点多态性。方法采用ARMS/PCR技术对83例居住在内蒙古地区的蒙古族健康个体做HLA-A DNA分型。结果该人群存在HLA-A*01至A*33等11种等位基因(组),其中,以HLA-A*02频率最高(0.2886),HLA-A*11、A*24次之;该人群中,HLA-A19宽特异性(Broad Specificity)含有HLA-A*29、A*30、A*31、A*32、A*33等5组编码基因,频率之和为0.2368;此外,在蒙古族,HLA-A*01较为常见(基因频率为0.08823)。结论本研究在DNA水平提供了蒙古族HLA-A位点频率分布数据。

宫颈病变患者生殖道沙眼衣原体感染情况及临床意义

目的 探讨女性生殖道沙眼衣原体 (CT)感染情况及与宫颈病变的关系。方法 利用单克隆抗体免疫荧光法 (IFA)对 10 0例疑为宫颈癌患者的宫颈组织和 77例健康妇女的宫颈上皮细胞进行CT检查。结果 IFA检测宫颈病变患者和健康妇女的CT阳性率分别是 3 1.0 %和 6.5 % ,患者组CT感染率明显高于健康对照组 (P <0 .0 1)。结论 宫颈病变与沙眼衣原体感染有关 ,积极治疗沙眼衣原体感染对防治宫颈疾患有重要意义。

STAT2的小分子干扰RNA抑制HeLa细胞增殖

新近研究发现STAT2基因具有致瘤性。前期研究发现:多种肿瘤组织和细胞系高表达STAT2,因此为进一步研究STAT2基因在肿瘤发生发展中的功能,利用RNA基因沉默技术,降低STAT2基因在宫颈癌HeLa细胞系中的内源表达水平,采用XTT实验、软琼脂集落形成实验以及裸鼠体内成瘤实验等研究策略,发现沉默STAT2基因可抑制肿瘤细胞在体外和裸鼠体内的增殖,提示STAT2基因具促进肿瘤细胞增殖功能。

eHSP的研究进展

热休克蛋白(heat shock protein,HSP)一直被认为是细胞内蛋白质,在胞内通过帮助蛋白质正确折叠、组装以及促进变性蛋白质降解而发挥生物学功能。HSP能被主动地分泌到胞外,成为细胞外HSP(extracellularHSPe,HSP),但其分泌及作用机制尚未定论。HSP偶然释放到外周循环是通过细胞坏死,生理性释放则是通过活化分泌系统。HSP有一种重要的前炎症因子可通过相同的分泌系统分泌,抗HSP自身抗体可以促进HSP的细胞因子样、辅佐样活性,抗HSP自身抗体与HSP或者HSP受体交联是放大HSP免疫信号作用的可能机制。

芦荟多糖对衰老模型小鼠Th1／Th2细胞因子的调节作用

目的通过芦荟多糖对衰老模型小鼠的影响，观察小鼠血清Th1／Th2细胞因子的改变，以增进对衰老免疫学机制的了解，探求芦荟多糖对免疫衰老调节的理论及实验依据。方法选取3周龄健康雌性NIH小鼠44只，体重20±4g，按体重随机分为4组：衰老模型组、芦荟多糖组、阳性对照组、正常对照组。连续灌胃30d后，用酶联免疫吸附法测血清IL-12、IFN-γ、IL-4水平。结果衰老模型组小鼠血清IFN-γ水平显著升高，IL-4水平明显下降，与正常对照组相比有显著差异。与衰老模型组相比(P<0．01)，芦荟多糖可下调血清IFN-γ水平，提高血清IL-4的含量，与正常对照组、灵芝多糖组相比无显著差异(P>0．05)。衰老模型组小鼠血清IL-12与IFN-γ／IL-4均有显著升高(P<0．01)，与其它各组相比，有显著差异。芦荟多糖组可明显降低IL-12与IFN-γ／IL-4的数值，与衰老模型组相比有显著差异，而与灵芝多糖组、正常对照组相比无显著差异(P>0．05)。结论芦荟多糖可降低血清IL-12、IFN-γ水平，同时提高血清IL-4水平，调节衰老引起的Th1/Th2平衡的失调。

HLA-DRB1等位基因和抗HLA-DRB1抗体在尿毒症患者中的分布特征

为了研究华南地区尿毒症患者的HLA-DRB1等位基因频率分布及抗HLA-DRB1抗体类型,收集尿毒症患者和健康对照者的外周血,通过聚合酶链反应-序列特异性寡核苷酸探针(PCR-SSO)方法对HLA-DRB1等位基因进行基因分型。经Luminex系统检测因尿毒症进行肾移植的患者中抗HLA-DRB1抗体的类型和频率,用HLAMatchmaker数据库比较和分析HLA-DRB1的表位及其氨基酸序列,通过统计软件分析患者中HLA等位基因和抗HLA抗体的类型和频率。结果发现:与健康对照者相比,尿毒症患者HLA-DRB1*13等位基因的频率显著低于健康对照者(4.33%vs.13.37%,P<0.001);HLA-DRB1*14等位基因的频率显著高于健康对照者(12.01%vs.4.12%,P<0.001)。在所有类型的抗HLA-DRB1抗体中,抗HLA-DRB1*01/*13/*14抗体的频率显著低于其他抗HLA-DRB1抗体的频率(P<0.05)。经HLAMatchmaker数据库分析发现,HLA-DRB1*01/*13/*14等位基因中的常见表位为77T。这表明:在基因频率上,HLA-DRB1*13与尿毒症患病率呈负相关,可能对个体具有保护作用;HLADRB1*14与尿毒症患病率呈正相关,可能是尿毒症的易感因素。尿毒症患者中抗HLA-DRB1*01/*13/*14抗体的水平显著低于其他抗HLA-DRB1抗体,这可能是由存在的共同表位77T所致。研究结果将为深入了解HLA-DRB1基因与尿毒症的关系奠定基础,对阐明HLA-DRB1基因在尿毒症及肾移植中的作用提供试验依据。

褐藻糖胶促进小鼠巨噬细胞免疫活性及机制初探

目的探讨褐藻糖胶(Fucoidan)对小鼠巨噬细胞RAW264.7免疫活性的影响及初步探讨作用机制。方法采用体外细胞培养方法,比色分析检测不同浓度Fucoidan(0、100、200、300、400、500μg/mL)作用下RAW264.7吞噬中性红的能力,噻唑蓝(MTT)法检测不同浓度Fucoidan(0、50、250、500μg/mL)作用下RAW264.7增殖,Western Blotting检测Fucoidan诱导的RAW264.7的MAPK/ERK1/2的磷酸化。结果Fucoidan剂量依赖性地促进RAW264.7吞噬功能和增殖功能。200μg/mL Fucoidan作用10 min即使ERK1/2发生磷酸化,30min时ERK1/2磷酸化达到最大值。结论 Fucoidan可提高小鼠巨噬细胞的吞噬活性和增殖能力,其机制可能与Fucoidan直接激活RAW264.7的MAPK/ERK1/2信号转导通路有关。

中国人群HLA-Cw、KIR2D受体基因多态性分析

目的分析中国南、北方两个汉族人群、一个蒙古族人群的人类白细胞抗原-Cw（human leucocyte antigen-Cw，HLA-Cw）遗传多态性；进一步分析南、北方汉族人群杀伤细胞免疫球蛋白样受体2D（killer immunloglobulin-like receptor 2D，KIR2D）基因的遗传多态性、与HLA-Cw的组合特点。方法采用聚合酶链反应．序列特异性引物技术（polymerase chain reaction-sequence specific primer，PCR-SSP）检测湖南地区112名汉族人群、内蒙古地区98名汉族人群、内蒙古地区83名蒙古族人群HL4-Cw基因、第80位密码子（Lys80、Asn80）多态性；检测两个汉族人群KIR2DL 1／2／3、KIR2DS 1／2基因分布。结果（1）湖南地区汉族人群与内蒙古地区汉族、蒙古族人群在HLA-Cw等位基因、第80位密码子的频率差异均有非常显著的统计学意义（P〈0．001），而内蒙古地区汉族、蒙古族人群之间上述频率差异无统计学意义（P〉0．05）。（2）南、北方两个汉族人群间，5个K／R2D基因频率、各基因型频率差异无统计学意义（P〉0．05）。（3）两个汉族人群均以Asn^80／Asn^80,2DL1＋／2DL2-／2DL3＋／2DS1-／2DS2-组合模式最为常见（45／112、29／98）；其次为Asn^80／Asn^80，2DL1＋／2DL2-／2DL3＋／2DS1＋／2DS2-（18／112，16／98）和Asn^80／Lys^80，2DL1＋／2DL2-／2DL3＋／2DS1-／2DS2-（11／112，17／98）。Lys^80／Lvs^80，2DL1＋／2DL2-／2DL3＋／2DS1-／2DS2-组合模式的频率差异有统计学意义（1／112，8／98；Fisher’s P=0．0134），其余11种组合模式在两个人群间的频率差异均无统计学意义（P〉0．05）。结论提供了中国南方湖南地区、北方内蒙古地区正常汉族人群的HLA-Cw、5个KIR2D受体基因多态性数据、蒙古族人群HLA-Cw DNA分型数据；提示我国南、北方汉族人群在HLA-Cw第80位密码子、KIR2D受体基因的组合层面上可能存在着以抑制性信号通路为优势的共同特点。

中国南方汉族人群D6S1624、D6S258、M6S211、D6S510遗传多态性及与HLA—A连锁不平衡分析

目的研究中国南方湖南地区汉族人群HLA Ⅰ类区远着丝粒端D6S1624、D6S258、M6S211、D6S510遗传多态性及与HLA-A的连锁不平衡。方法应用荧光聚合酶链式反应．基因分型和聚合酶链式反应-序列特异性引物技术分别检测湖南地区227份正常人群样本D6S1624、D6S258、M6S211、D6S510和HLA-A位点。结果5个位点基因型分布均符合Hardy-Weinberg平衡（P〉0．05）。在D6S1624、D6S258、M6S211和D6S510位点分别检出10、10、12、9种等位基因，各位点均有若干主要等位基因，分别以D6S1624-＊199、D6S258-＊195、M6S211-＊261、D6S510-＊186最为常见。在该人群中，4个微卫星位点均具有较高的杂合度值（O．7142—0．8316）和多态性信息含量（0．6686—0．811），属高度多态性位点。D6S1624、D6S258位点与HLA-A位点之间均不存在总体连锁不平衡（P=0．2646；P=0．3481），M6S211、D6S510位点与HLA-A位点之间均存在非常显著的总体连锁不平衡（P〈0．0001；P〈0．0001）。对观察频率≥3％的所有单倍型做连锁不平衡分析，显示10种D6S1624-HLA-A单倍型中，仅两种处于连锁不平衡状态；9种D6S258-HLA-A单倍型中，仅3种处于连锁不平衡；而8种M6S211-HLA-A单倍型、7种D6SSl0-HLA-A单倍型中，分别有7种、6种均处于连锁不平衡状态。结论所获得的4个微卫星标记的群体遗传学数据将有助鉴定HLAI区域内与疾病相关（如鼻咽癌）的遗传标志、法医学个体认定、人类学研究，亦将有助于评价、指导临床器官移植的组织相容性配型。