经hCTLA4-Ig基因转染的猪胰岛细胞在小鼠体内的存活与功能状况研究

目的研究将人细胞毒T淋巴细胞相关抗原4免疫球蛋白(hCTLA4-Ig)基因转染至猪胰岛细胞后,再将其移植至小鼠体内的存活及功能状况。方法采用腺相关病毒载体(AAV)介导hCTLA4-Ig基因体外转染新生猪胰岛细胞(NIPs),再将转基因的NIPs移植至构建了人免疫系统的SCID糖尿病小鼠左肾被膜下。逆转录聚合酶链(RT-PCR)反应和免疫荧光染色法检测转染后hCTLA4-Ig基因的表达状况;观察小鼠移植转基因NIPs后的生存时间;移植物免疫组织化学分析及酶联免疫(ELISA)法测定受者血清中细胞因子的水平。结果NIPs经转染后,可检测到hCTLA4-Ig基因及其蛋白表达,且葡萄糖刺激胰岛素释放试验与未转染的对照组比较,差异无统计学意义(P>0.05);糖尿病小鼠经转基因的NIPs移植后,生存时间及血糖维持正常的平均时间分别为(72.5±30.6)d和(59.1±24.0)d,较未转染的对照组(26.9±6.9)d和(12.7±3.3)d显著延长(P<0.01);免疫组织化学染色检测移植后不同时间(15、30、90d)的移植物组织,可见转基因细胞移植部位有完整的胰岛细胞,而对照组胰岛细胞破坏、消失,周围可见较多的炎性细胞浸润;且转基因细胞移植的小鼠血清白细胞介素2(IL-2)、γ干扰素(IFN-γ)、肿瘤坏死因子α(TNF-α)的水平明显低于对照组(P<0.05)。结论AAV介导hCTLA4-Ig基因体外转染猪胰岛细胞后再移植至受者体内,可提高受者的免疫耐受水平,延长胰岛细胞在异种受者体内的存活时间,而胰岛细胞的内分泌功能不受明显影响。